Procedura Per autologo trombina attivazione delle piastrine nel plasma ricco di piastrine (PRP)

BACKGROUND

Le piastrine sono piccoli corpi granulati anuclear che aderiscono, aggregare e formare un tappo piastrinico in siti di lesioni vascolari per prevenire la perdita di sangue. concentrazione piastrinica nel sangue è di circa 300.000 /ul, e normalmente hanno una emivita di 4 giorni. Essi sono formati da cellule staminali giganti impegnati chiamati megacariociti come pizzicare fuori pezzetti di loro citoplasma e li estrudere nella circolazione sanguigna. Le piastrine hanno microtubuli intorno alla loro periferia e una membrana ampiamente invaginato a contatto con il liquido extracellulare.

I loro membrane contengono recettori per una serie di sostanze tra cui collagene, adenosina difosfato (ADP), fattore di von Willebrand e fibrinogeno. Alcuni dei contenuti del loro citoplasma hanno la loro origine nei megacariociti, alcuni sono sintetizzati internamente, e alcuni sono memorizzati dopo endocitosi. Tra gli organelli intracellulari sono due tipi di granuli:

1) granuli densi, che contengono le sostanze non proteica, che vengono secreti in risposta alla attivazione piastrinica, tra cui la serotonina, ADP /ATP, l'istamina, dopamina e catecholamines.1

2) * -granules, che contengono secreti proteins.1-3 Tra queste proteine ​​memorizzati sono fattori di crescita mitogeni e angiogeniche che sono essenziali per la rigenerazione dei tessuti duri e molli e la riparazione. Marx4 del Nord America e Anitua et al1 d'Europa hanno dimostrato che in precedenza e una maggiore densità ossea è ottenuto in siti chirurgici trattati con PRP rispetto ai siti di controllo. I fattori di crescita delle piastrine sono fattore di crescita derivato dalle piastrine (PDGF), fattore di crescita trasformante (TGF), fattore di crescita vascolare endoteliale (VEGF), il fattore di crescita dei fibroblasti (bFGF), derivato dalle piastrine fattore di crescita epidermico (PDEGF), e l'insulina like growth factor-1 (IGF-1). Questi sono variamente coinvolti nello stimolare la chemiotassi, proliferazione cellulare e la maturazione in ferita healing.1

Nel plasma ricco di piastrine primi anni del 1990 (PRP) è stato introdotto come un biomaterial.5,6 autologo Una varietà di macchine sono stati adattati per ottenere la separazione centrifuga ottimale di PRP per uso terapeutico da piccole quantità di citrato blood.7-13

Nel 2002, Gonshor9 sviluppato un procedimento caratterizzato da un metodo a doppia rotazione centrifugazione usando una centrifuga non automatizzato di sequestrare e concentrarsi piastrine ad un livello di valori di sangue intero da quattro a otto volte basale. Le tecnica prodotta concentrazioni di PDGF-AB superiore a 500% e TGF, superiori al 800%. La sua sperimentazione ha mostrato che la resa delle piastrine 85,1% è rimasto a riposo per tutta la procedura, mantenendo la loro integrità e la vitalità, senza l'attivazione accidentale. trombina bovina 5000 unità e la soluzione di cloruro di calcio al 10% sono stati utilizzati per l'attivazione delle piastrine, la creazione di un gel PRP.

Nel 2005 Marx e Garg15 pubblicato un eccellente libro di testo sulla "Dental and Applications cranio-facciali di piastrine-Rich Plasma". In questo testo gli autori affermano che "i fattori di crescita sono emersi come il" Santo Graal "di guarigione delle ferite" e proiettata liofilizzata preparazione trombina bovina come standard per l'avvio di coagulazione del PRP e l'attivazione di piastrine
.

Tuttavia, un anno prima, nel 2004, trombina bovina è diventato disponibile in Canada. Questo evento ha precipitato una ricerca di un'alternativa alla trombina bovina. trombina autologo e /o ricombinante trombina umana erano le scelte logiche. La necessità è diventata quindi la madre dell'invenzione, e la ricerca è stata avviata per un'alternativa.

SOGGETTI

Questo studio consisteva di 21 pazienti che hanno richiesto posizionamento degli impianti e /o innesto osseo. Dei 21 pazienti 5 necessario il posizionamento immediato dell'impianto con innesto osseo, solo l'8 posizionamento dell'impianto necessario, e 8 osso necessario l'innesto solo.

MATERIALI E METODI

Materiali

1) scopo generale centrifuga (non automatizzata) con un rotore a sei posizioni, o centrifugare automatizzato.

2) 4 giallo-top vacutainer -10ml contenenti soluzione di citrato acido di destrosio (ACD-a).

3) 6 -10 ml non coagulante rosso-top vacutainer

4) 21 -.. calibro farfalla ago e 19 calibro ago a farfalla

5) 21/2 "(63 mm) ago smussato .

6) 3 "(76 millimetri) ago smussato.

7) il 10% cloruro di calcio Soluzione.

8) 6- 5 ml siringhe sterili.

9) 6 -... 1ml siringhe sterili

10) contenitore sterile per PRP

11) contenitore sterile per PPP

12) contenitore sterile per il siero

13) 4 piatti dappen sterili.

14) della confezione di membrana di collagene sterili. (Colla Nastro o nastro Neo)

15) Portaprovette.

La raccolta di sangue e l'elaborazione

Le provette di sangue sono stati prelevati dalla regione antecubitale con una 21-gauge o 19 calibro farfalla ago e raccolti in provette per il prelievo di sangue di colore giallo-top 4-10ml contenenti citrato acido destrosio (ACD-A) soluzione. Due provette di sangue sono stati raccolti come sopra descritto, tranne in 10ml rosso-top vacutainer senza anticoagulante. (Ciascuno dei due tubi rosso-top è stato contrassegnato con una X) (Fig. 1). I quattro tubi di colore giallo-top di sangue sono stati elaborati per produrre PRP utilizzando il Gonshor Procedure9 (Figg. 2-4). I tubi a due RedTop di sangue sono stati messi da parte per coagulare.

Uso della centrifuga general-purpose descritto nella pubblicazione di Gonshor, 9 i tubi di due-rosso-top con sangue coagulato sono stati centrifugati a 2000 rpm per 10 minuti lungo con i quattro tubi rosso-top con plasma per la seconda scissione (Fig. 3). Il siero è stato accuratamente rimosso da ciascuna provetta con una siringa sterile e pool, in un contenitore sterile (Fig. 5). I contenitori che contengono PRP (4.5mls), PPP (6.5mls) e siero (2,5 ml) sono stati coperti e collocati nella operatoria chirurgica insieme ad una fiala di 10% di cloruro di calcio, piatti dappen sterili, 5ml e siringhe sterili 1 ml (fig . 6).

aTTIVAZIONE dI PRP

per attivare il PRP per ottenere un gel plasma ricco di piastrine, 1 ml di PRP è stato erogato in ciascuna delle quattro piatti dappen (Fig. 7). 10% cloruro di calcio è stato aggiunto a ciascun dappen in un rapporto di 1 CaCl2: 5 PRP in volume (0,2 ml CaCl2: 1 ml PRP). Siero è stato quindi aggiunto alla PRP calcificata in ogni dappen in un rapporto di 1 sieri: 2 PRP in volume (0,5 ml di siero: 1ml PRP). Il complesso è stato lasciato riposare a temperatura ambiente e il tempo di formazione del gel PRP è stato registrato (Fig. 8). Il processo di attivazione di cui sopra è stato raggiunto anche aspirando gli importi adeguati di PRP calcificata e siero in un 5mls. siringa. Il complesso attivato potrebbe poi essere trasportato via la siringa a qualsiasi sito di destinazione. Quando innesto osseo è stato fatto, osso autogeno, alloinnesto, xenotrapianto o un innesto composito è stato aggiunto al PRP calcificati, quindi il siero è stato aggiunto per produrre un gel PRP in presenza del materiale di innesto (Figg 9 e amp;. 10). Il tempo per la formazione di gel PRP è stato registrato e il complesso di gel-graft PRP è stato quindi posto in situ. In tutti i casi in cui sono state utilizzate membrane riassorbibili, per la consegna di fattori di crescita in situ, occlusività cellulare e /o la rigenerazione guidata dei tessuti, le membrane sono state immerse in PRP calcificato, attivato con il siero poi subito messo in situ tra osso e tessuti molli prima di gel di PRP è stata costituita. Sono stati registrati i tempi per la formazione PRP gel in situ. Quando plasma povero di piastrine (PPP) è stato utilizzato come sigillante tessuto è stato anche attivato con cloruro di siero e 10% di calcio. Dopo l'erogazione 1 ml di PPP in un dappen Chloride piatto Calcium inserito in un rapporto di 1 CaCl2: 2.5 PPP in volume (0,4 ml CaCl2: 1 ml PPP). Siero è stato poi aggiunto in un rapporto di 1 sieri: 1 PPP in volume (1,0 ml di siero: 1 ml PPP). Il complesso è stato lasciato riposare a temperatura ambiente per 10 minuti poi utilizzati per sigillare i punti linea di incisione e suture chirurgiche ingresso (Fig. 11). Si è lasciato riposare per 5 minuti in situ. Questo processo è stato realizzato anche aspirando i rispettivi volumi di calcificato PPP, 2 e il siero in una siringa da 5 ml e lasciato riposare per 10 minuti prima dell'uso
.

RISULTATI

Il volume di concentrato PRP ottenuto pari a una media di 1,1 ml /provetta. Questo rispetto favorevolmente con results.9 di Gonshor Il volume totale di PRP ottenuto dal 4 citrato provette di sangue era 4.5mls. Il volume di siero ottenuto dai 2 tubi di sangue intero coagulato dopo centrifugazione è stata di 2,5 ml. Il volume di PPP ottenuto era di 6,5 ml. Per la formazione di gel plasma ricco di piastrine in vitro (Fig. 8), l'intervallo di tempo era 5-10 minuti. La gamma è stata 30-60 secondi in situ. Completa il trattamento del sangue sono voluti circa 30 minuti. PRP gel è stato rapidamente formato in presenza di autologo (Fig. 9) e allograft (Fig. 10). Un coagulo PPP è stato formato in 10 minuti quando il siero è stato aggiunto al calcificato PPP (Fig. 11). Questo è stato usato come sigillante tessuto autologo per la linea di incisione e di immissione di sutura punti chirurgici.

DISCUSSIONE

benefici fisiologici della PRP

Al fine di raccogliere i benefici fisiologici del PRP , è molto importante che i fattori di crescita rilasciati dalle piastrine vitali, in quanto è durante l'atto di granuli esocitosi che la piastrina completa structure.2,3,9 terziaria del fattore di crescita di proteina la struttura terziaria, con la sua conformazione unica è la più biologicamente struttura attiva. La conformazione molecolare permette la proteina di presentare adeguatamente suo sito attivo ad un substrato specifico in modo che la catalisi può procedere. Anitua et al1 hanno elencato una serie di situazioni in cui hanno guidato la secrezione di prodotti piastrinici autologhi può promuovere la guarigione e la riparazione delle ferite. Le situazioni sono: chirurgia maxillo-facciale e innesti ossei, chirurgia implantare, chirurgia ortopedica e ricostruzione ossea, di plastica facciale e chirurgia estetica, ulcere della pelle, degli occhi chirurgia-retinica foro di riparazione, medicina dello sport, della cartilagine e la riparazione dei tendini. Ad oggi l'uso più diffuso di PRP è in odontoiatria, 4,5,11,12,15 dove diversi autori hanno dimostrato che la somministrazione di PRP in una varietà di siti chirurgici hanno rapidamente precipitato sia rigenerazione dei tessuti duri e molli e repair.1 , 5-7,15,16 Altri sostengono che l'uso di piastrine autologhe può influenzare positivamente il risultato quando autoinnesti, allotrapianti e xenotrapianti sono utilizzati per l'aumento alveolare cresta procedures.15,16

rigenerazione ossea richiede il reclutamento , la proliferazione e la maturazione degli osteoblasti che sono derivati ​​da cells17,18 staminali mesenchimali e uno studio suggerisce che releasates piastrine favoriscono anche la migrazione di cells.19 staminali mesenchimali Gonshor9 afferma che unisce il fattori di crescita PDGF e TGF ha dimostrato di accelerare la riparazione ossea, 20 promuovere la proliferazione dei fibroblasti, aumenta la vascolarizzazione dei tessuti, il tasso di formazione di collagene, 21,22 mitosi di cellule mesenchimali staminali, cellule endoteliali, così come osteoblasti, giocando un ruolo chiave nella velocità e il grado di formazione ossea.

una serie di 20 pazienti sottoposti a più estrazioni, coagulo di PRP è stato depositato nelle prese su un lato della bocca mentre l'altro servito come controllo. biopsie ossee sono state prese a siti di estrazione tra 10 e 16 settimane. Nella maggior parte dei pazienti con PRP coagulo, la rigenerazione ossea era abbondante e tessuto osseo era compatta con trabecole ben organizzato. Al contrario, nel gruppo di controllo la cavità è principalmente riempito con tissue.1 connettivo Utilizzando modelli animali alcuni autori hanno dimostrato che, come negli esseri umani, aggiungendo PRP-coagulo di impianti di titanio intorno irruvidite al momento del loro impianto in goats23 e minipigs24 migliorata sia la portata e la qualità della rigenerazione ossea intorno agli impianti.

ciò che viene avviato il coagulo?

e 'un fatto fisiologico noto che il sangue inizia a coagulare quando è esposto al collagene in vivo. Il fatto che un pezzo di collagene ridotto tempo di attivazione è la prova che una superficie appropriata è stata prevista l'apertura della cascata di coagulazione. I precursori e enzimi del sistema di coagulazione devono quindi essere presenti nel siero viene utilizzato così iniziare la cascata di coagulazione. La trombina non è solitamente presente nel siero dopo la coagulazione è stata completata perché la sua produzione viene fermato da antitrombina III l'inibizione dei fattori 1XA, Xa, XIa e XIIa con l'aiuto del suo eparina cofattore, e ciò che rimane è complessato con trombomodulina per fibrinolisi con la aiuto di proteina C, proteina S, attivatore tissutale del plasminogeno (tPA), urochinasi attivatore del plasminogeno del plasminogeno (uPA) e plasmina.

la ricerca deve essere fatto sulla quantificazione dei componenti precursori coagulazione ed enzimi di siero e la loro stabilità in condizioni variabili. Ulteriori studi devono anche essere realizzato sulla stabilità di fattori di crescita dopo che sono stati rilasciati dalle piastrine
.

IN SITU RISULTATI

I risultati ottenuti in situ sono simili ai risultati ottenuti da Anitua et al1 quando irrigate superfici peri-implantari con PRP calcificata mescolato con surnatante estruso da un coagulo retratto subito dopo l'inserimento dell'impianto.

risultati in vitro

I tempi di coagulazione più ottenuti in vitro potrebbe essere un'indicazione che le concentrazioni di precursori di coagulazione ed enzimi possono essere relativamente bassa nel siero e ci vuole tempo per le reazioni di sviluppare. Tuttavia, una volta che l'attivazione è stata avviata successiva coagulazione procedette rapidamente. Ciò è coerente con il /la natura paracrina autocrino di comunicazione intercellulare tramite mediatori chimici durante l'attivazione delle piastrine. Anitua et al1 afferma che la somministrazione di piastrine attivate in coagulo di fibrina o colla di fibrina fornisce un supporto adesivo che può limitare la secrezione di un sito scelto, e la presentazione di fattori di crescita attaccato alle piastrine e /o fibrina può provocare aumento dell'attività over proteine ​​ricombinanti . Estesa in tempi di attivazione in vitro potrebbe essere vantaggioso quando autogeno dell'osso, allotrapianti e xenotrapianti devono essere mescolati con PRP prima del posizionamento in situ per innesti cresta di aumento, innesti cresta di manutenzione, innesti di rialzo del seno, riparazione di membrana di Schneider, nonché una rapida guarigione dei tessuti molli e la maturazione.

in conclusione,

la procedura qui presentata mostra come la trombina autologa nel siero del paziente può essere utilizzato per attivare le piastrine. Si dovrebbe fornire un'alternativa sicura per uso terapeutico. La pronta disponibilità di PRPgel autologo con il rilascio del fattore di crescita e di colla di fibrina autologa come sigillante dei tessuti dimostra che la trombina autologa nel siero dei pazienti in grado di attivare in modo efficace le piastrine e, quindi, fornire un'alternativa per continuare la stimolazione della rigenerazione dei tessuti, la riparazione e la maturazione in odontoiatria e medicina .

Attenzione

* livelli di fattore di crescita, conta piastrinica e tempi di attivazione variano da individuo a individuo, così come con l'età e lo stato di salute.

* L'invecchiamento del siero e PRP possono influenzare i tempi di attivazione dal momento che le proteine ​​sono molto labili in vitro.

* Quando si utilizza questa procedura, devono essere prese misure per garantire che un ambiente sterile, al massimo è previsto per la raccolta del sangue, il trattamento PRP e l'attivazione.

Dr. Smith è stato in uno studio privato per 25 anni a New Westminster, BC. Nel 2004, ha inventato una procedura specifica per paziente per l'attivazione della trombina autologa di piastrine nel plasma ricco di piastrine (PRP).

salute orale accoglie questo articolo originale.
< p> Riconoscimenti

Vorrei ringraziare il Dr. Aron Gonshor di Montreal, il Dr. Ross MacGillivray, dottor ed Pryzdial, e il Dr. Dana Devine del Centro per la ricerca del sangue, University of British Columbia, per la loro inestimabili discussioni.

La divulgazione

L'autore sostiene di avere alcun interesse finanziario in una società o uno qualsiasi dei prodotti citati in questo articolo.

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