intellettuale
Abstract
sfondo
streptococchi mutans (Streptococcus mutans
e S. sobrinus
) sono considerati importanti agenti eziologici della carie dentale. Utilizzando un metodo di reazione a catena della polimerasi, abbiamo rilevato quei batteri da 145 pazienti ambulatoriali (6-30 anni) con disabilità intellettiva (ID) e la loro presenza è stato confrontato con l'incidenza della carie dentale.
Metodi
campioni di placca sono stati raccolti da tutti i siti eruttato denti nei soggetti con uno spazzolino da denti sterile. Un esame dentale è stato eseguito per determinare il numero di denti cariati e pieni (punteggio DFT) in dentizione permanente con l'OMS carie criteri diagnostici. A Mann-Whitney U-test è stato utilizzato per confrontare i punteggi carie tra le combinazioni dei batteri, e con un rank test Wilcoxon utilizzato per confrontare i punteggi carie tra il basale e dopo 1 anno.
Risultati
tra tutti i soggetti, S. mutans Comprare e vendere S. sobrinus sono stati posseduti da 78,7 e 83,5%, rispettivamente, mentre il 13,1% era positivo per S. mutans
da solo, il 17,9% per S. sobrinus
da solo, e 65,6 % per entrambi gli organismi, con il 3,4% è risultato negativo per entrambi. Il punteggio medio della DFT di soggetti positivi sia per la S. mutans
e S. sobrinus
a dopo 1 anno era significativamente più alta rispetto a quella di quelli positivi per S. mutans
sola (P
& lt; 0,01 ). L'aumento delle carie incremento è stato anche significativamente maggiore nei soggetti con entrambi i batteri rilevati (P
& lt; 0,001).
Conclusione
I nostri risultati indicano che i pazienti con ID ospitare entrambi S. mutans
e S. sobrinus
hanno una significativamente più alta incidenza di carie rispetto a quelli con S. mutans
solo.
Sfondo
streptococchi mutans (Streptococcus mutans
e S. sobrinus
) sono considerati principali agenti eziologici della carie dentale negli esseri umani [1-3]. Questi batteri sono gli agenti patogeni putativi più comuni isolati dalla placca dentale umano e la loro prevalenza è stata riportata negli studi epidemiologici [4-7]. Vari metodi sono stati utilizzati per la rilevazione di agenti patogeni putativi, tra cui la microscopia diretta, la coltivazione, i test enzimatici, saggi e specie-specifico sonde di DNA immunoenzimatica. Numerosi ricercatori hanno sviluppato metodi polymerase chain reaction (PCR) e riferito loro di essere più sensibile per la rilevazione rispetto alle tecniche di coltura convenzionali [8, 9], come hanno dimostrato di essere in grado di rilevare numeri bassi (5-100) di cellule batteriche [9, 10], mentre sono anche veloce e relativamente semplice da eseguire. Inoltre, PCR sono stati trovati adatti per il rilevamento preciso e l'identificazione dei batteri cariogeni umani, tra cui S. mutans Comprare e S. sobrinus
[10, 11].
In studi trasversali e longitudinali precedenti, abbiamo riportato che i bambini in età prescolare con dentatura primaria ospitare sia S. mutans
e S. sobrinus
avuto un significativamente più alta incidenza di carie rispetto a quelli con S. mutans
solo [6, 12]. Recentemente, abbiamo anche notato che gli scolari ospitare entrambi S. mutans
e S. sobrinus
avuto un significativamente maggiore carie dentale esperienza in entrambi i denti permanenti e primari rispetto a quelli con S. mutans
da solo [13] . Così, l'identificazione e la determinazione della prevalenza di tali patogeni sono di fondamentale importanza per comprendere l'avvio e lo sviluppo della carie dentale, e per determinare migliori forme di prevenzione e trattamento. Tuttavia, pochi studi longitudinali del rapporto tra queste due specie e le attività di carie nei bambini [12, 14] o individui con disabilità intellettiva (ID) [15] e sindrome di Down [16] sono stati eseguiti.
Persone con ID che sono curati a casa con i membri della famiglia possono anche soffrire di scarsa igiene orale, come più elevate conte batteriche sono stati trovati in soggetti con ID rispetto a quelli senza disabilità [17]. I metodi disponibili per trattare e prevenire la carie dentale, e migliorare gli individui per l'igiene orale con gravi disabilità sono limitati. Tuttavia, è importante per i medici di scegliere tra le varie tecniche disponibili per la prevenzione della carie dentale nei loro pazienti con ID in base al rischio. Nel presente studio, abbiamo rilevato S. mutans
e S. sobrinus
in pazienti giapponesi con ID utilizzando un metodo PCR, e poi confrontato la loro presenza con l'incidenza della carie dentale nel corso di un periodo di 1 anno.
Metodi
cento quarantacinque pazienti ambulatoriali con ID (un quoziente di intelligenza (IQ) ≤ 70) di età compresa tra 6 a 30 anni e ciascuno con dentizione mista o permanente, che ha visitato Hiroshima University Hospital, Città di Hiroshima sono stati arruolati. I dettagli demografici dei pazienti ambulatoriali e dei dati che partecipano sul loro stato di disabilità, IQ, malattie sistemiche e la storia dei farmaci regolari (se presenti) sono stati raccolti dalle cartelle cliniche. I soggetti sono stati composti da 135 con ID e 10 con sindrome di Down, e un totale di 106 (73,1%) maschi e 39 (26,9%) femmine sono stati esaminati (Tabella 1). Il consenso per la partecipazione è stata ottenuta da almeno uno dei genitori prima dello studio secondo le linee guida etiche della Dichiarazione di Helsinki (1975) e la clearance etico è stato ottenuto dal Comitato Etico di Hiroshima University (Epidemiologia-No. 34). Ogni soggetto è stato sottoposto a visita odontoiatrica eseguita nella clinica dentale Special Care da un singolo dentista ben addestrato (MO), mentre seduto su una sedia dentale in posizione supina, con l'OMS carie criteri diagnostici per determinare i denti cariati e pieni (DFT) Indice [18]. Coloro che avevano ricevuto antibiotici nei precedenti 3 mesi o con malattie sistemiche erano excluded.Table popolazione 1 Studio per età e sesso
Age
Male
Female
Total
(years)
No.
%
No.
%
6–10
12
92.3
1
7.7
13
11–15
19
86.4
3
13.6
22
16–20
21
77.8
6
22.2
27
21–25
32
69.6
14
30.4
46
26–30
24
64.9
13
35.1
37
placca dentale è stato raccolto da tutti i denti scoppiata mediante spazzolatura con uno spazzolino da denti sterile per 1 min utilizzando un metodo precedentemente descritto [19]. Durante spazzolamento, la placca aderente allo spazzolino è stato rimosso lavando più volte in un tubo di acqua distillata sterile. I campioni di placca nel tubo sono stati immediatamente trasportati al nostro laboratorio di ricerca e conservati a -20 ° C, prima dell'estrazione del DNA genomico.
Streptococcus mutans
JCM5175 e S. sobrinus
ATCC27607 sono state usate come specie di controllo . rilevamento PCR delle specie bersaglio è stata eseguita utilizzando primer descritti da Igarashi et al. [8, 10]. primer oligonucleotidi sono stati progettati per il Dex
sequenza di DNA di S. mutans
(GenBank adesione n. D49430) e zona S. sobrinus (GenBank adesione n. M96978). Per S. mutans
, il primer in avanti, 5 'TAT GCT GCT ATT GGA GGT TC 3', è complementare alla sequenza 973-992, e il primer invertita, 5 'AAG GTT GAG CAA TTG AAT CG 3', è complementare alla sequenza 2225-2244. Per S. sobrinus
, il primer in avanti, 5 'TGC TAT CTT TCC CTA GCA TG 3', è complementare alla sequenza 134-153, e il primer invertita, 5 'GGT ATT CGG TTT GAC TGC 3', è complementare alla sequenza 1726-1743.
I primer per 16S ribosomiale eubatteri sequenza di RNA (GenBank numero di accesso M75035) sono stati utilizzati per confermare la presenza di batteri nei campioni di placca come controllo positivo [20]. Il primer in avanti, 5 'CAG GAT TAG ATA CCC TGG TAG TCC ACG C 3', è complementare alla sequenza 783-810, e il primer invertita, 5 'GAC GGG CGG TGT GTA CAA GGC CCG GGA ACG 3', è complementare alla sequenza 1378-1407. Le dimensioni del prodotto atteso PCR era 625 bp
. Campioni di placca sono stati sottoposti prima a centrifugazione a 1600 xg per 20 min
. Successivamente, il surnatante è stato scartato, e singoli pellet cellulari sono stati conservati a -20 ° C fino isolamento del DNA, per cui i pellet sono stati risospesi in 180 pl di tampone di lisi enzimatica (20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM EDTA; 1,2% Triton X-100, 20 mg /ml di lisozima). Una preparazione di DNA genomico da ogni campione di placca è stata ottenuta utilizzando un DNeasy® Sangue e Kit Tissue (Qiagen, Austin, TX, USA) per l'estrazione del DNA dei batteri Gram-positivi, a cui abbiamo aggiunto un trattamento RNasi [21]. concentrazioni di DNA nei campioni di placca dentale sono stati determinati misurando
a
260, mentre la qualità è stato stimato utilizzando il
a 260 /A
280 rapporto [22].
Polymerase chain reaction amplificazione è stata eseguita in una miscela di reazione (25 pl) composto di sfere PCR (GE Healthcare UK Limited, Little Chalfont, Buckinghamshire, UK) che contenevano un enzima (due unità di Taq DNA polimerasi
) e la necessaria reagenti, così come il 25 pmol di ciascun primer, e da 20 a 50 ng della soluzione di modello di DNA in un termociclatore (DNA motore PTC-220 DYAD TM, MJ Research, Hatoboro, PA, USA). Ciascuna serie di analisi PCR incluso un controllo negativo (blank acqua) in aggiunta al controllo positivo. La miscela di reazione è stata denaturata a 95 ° C per 3 min, seguiti da 26 cicli di denaturazione a 95 ° C per 1 minuto, appaiamento a 55 ° C per 1 min, ed estensione a 72 ° C per 1 min, con un ciclo finale di 94 ° C per 1 min, 55 ° C per 1 minuto, e 72 ° C per 5 min [8]. Dopo l'amplificazione, 15 pl di prodotti di PCR sono stati analizzati mediante elettroforesi su gel di agarosio 1,0% e, dopo colorazione con etidio bromuro, i frammenti di DNA di nuova sintesi sono state visualizzate sotto luce ultravioletta a 302 nm. Le dimensioni dei prodotti di PCR sono stati stimati dalla migrazione elettroforetica dei prodotti rispetto ad un marcatore scala 100-base (Amersham Pharmacia Biotech AB, Uppsala, Svezia). La sensibilità del metodo PCR è stata testata utilizzando quantità note di S. mutans purificati
JCM5175 e S. sobrinus
ATCC27607 come modello. Diluiti DNA è stato utilizzato anche come modello, e il limite di rilevazione è stato di 1 pg di DNA per S. mutans
(12 celle) e 100 fg di stampo di DNA per S. sobrinus
(9 celle) (dati non illustrato). & statistiche descrittive e le analisi statistiche sono state eseguite utilizzando un pacchetto statistico software (SPSS 14.0, Inc., Chicago, IL, USA). A Mann-Whitney U-test è stato utilizzato per confrontare i punteggi carie tra i soggetti in possesso delle varie combinazioni di batteri, e un test di Wilcoxon rango per confrontare i punteggi tra la linea di base e il 1 anno dopo la carie
. Risultati
Tabella 2 mostra carie prevalenza nei soggetti con ID possedere S. mutans
solo o in combinazione con S. sobrinus
al basale e dopo 1 anno. S. mutans Comprare e vendere S. sobrinus sono stati trovati in 78,7 e 83,5%, rispettivamente, dei nostri soggetti con ID. Inoltre, il 13,1% era positivo per S. mutans
da solo, il 17,9% per S. sobrinus
da solo, e il 65,6% per entrambi, mentre il 3,4% è risultato negativo per entrambi S. mutans
e S. sobrinus
. Il punteggio DFT in quelli positivi per entrambi gli organismi dopo 1 anno era significativamente più alta rispetto a quella di coloro che positivo per S. mutans
sola (P
& lt; 0,01). Inoltre, tale punteggio nei soggetti positivi per entrambi dopo 1 anno era significativamente più alta rispetto al basale (P
& lt; 0,001) e l'incremento del punteggio DFT in quelli positivi per entrambi era significativamente maggiore rispetto ai soggetti positivi per S. mutans
da sola (P
& lt; 0,01)
tabella 3 mostra i soggetti con precedenti esperienze di carie al basale e carie aumenti incrementali dopo 1 anno, insieme con la combinazione di streptococchi mutans rilevato.. Diciassette (89,5%) con S. mutans
da solo, e 86 (90,5%), con entrambe S. mutans
e S. sobrinus
avuto carie passate esperienze. Quattro (21,1%) dei soggetti con S. mutans
da solo, 9 (34,6%) con S. sobrinus solo
, e 54 (55,7%), sia con avuto aumenti di carie incremento, mentre nessuno dei soggetti possedendo né organismo ha mostrato un aumento di incremento. Inoltre, circa il 60% dei soggetti con entrambi ha avuto un aumento della carie incremento durante il periodo di studio di 1 anno, mentre circa il 20% di quelli con S. mutans
da solo ha dimostrato un tale carie prevalenza increase.Table 2 in pazienti con S. mutans
solo o in combinazione con S. sobrinus
al basale e dopo 1 anno
Oraganism presente
media (SD) DFT
Aumento della DFT
Gamma
S. mutans
S. sobrinus
No. dei soggetti (%)
Baseline
Dopo 1 anno
Media (SD)
+
-
19 (13.1)
6,47 (4,64)
6.95 (4.61) *
0.47 (1.22) *
0
-5
-
+
26 (17,9)
5,96 (5,03)
6.42 (5.33)
0,46 (0,71)
0-2
+
+
95 (65,6)
8.65 (7,60) †
10.31 (8.13) * †
1.65 (2.04) *
0-9
-
-
5 (3.4)
0.60 (1.34)
0.60 (1.34)
0.00 (0.00)
0
significatività statistica tra i due gruppi: * P
& lt; 0,01, Mann-Whitney U-test; † P
. & Lt; 0,001, Wilcoxon rank test
dati per i punteggi DFT sono presentati come media (SD)
Tabella 3 pazienti con precedenti esperienze di carie al basale e aumenti incrementali dopo 1 anno, e la combinazione di streptococchi mutans rilevato
Organismo presente
carie precedenti esperienze
carie aumento incrementale
S. mutans
S. sobrinus
No.
%
No.
%
+
-
17
89.5
4
21.1
-
+
22
84.6
9
34.6
+
+
86
90.5
54
55.7
-
-
1
20.0
0
0.0
analisi PCR con 16S rRNA primer ha confermato la presenza di DNA batterico in tutti i campioni di placca (dati non riportati)
. Discussione
individui che sono intellettualmente disabili e curati a casa con i membri della famiglia spesso soffrono di scarsa igiene orale, come sono stati segnalati per avere più elevate conte batteriche rispetto agli individui senza disabilità [17]. I metodi disponibili per trattare e prevenire la carie dentale, e anche migliorare l'igiene orale per i pazienti con gravi disabilità sono limitati, anche se è importante per i medici di scegliere una tecnica adeguata per la prevenzione della carie dentale in base al rischio del loro sviluppo nei loro pazienti con ID.
Abbiamo eseguito il presente studio longitudinale per confrontare la presenza di streptococchi mutans con l'incidenza della carie dentale nei pazienti giapponesi con ID nel corso di un periodo di 1 anno utilizzando un metodo PCR. La concentrazione media di DNA recuperato da spazzolare campioni di placca è stato di circa 700 mg /ml, che è stato ritenuto sufficiente per l'esecuzione di questa indagine PCR-based. Per garantire la presenza di un campione rappresentativo batterica in tutti i casi e l'assenza di sostanze inibenti PCR, abbiamo eseguito una vasta gamma PCR applicando primer 16S rRNA eubatteri basati e sottoponendo tutti i campioni ottenuti con il metodo spazzolamento. Ciò ha confermato la presenza di batteri e DNA batterico in tutti i campioni di placca (dati non mostrati). Questo metodo ha dimostrato di essere un mezzo più sensibili della rilevazione di microrganismi cariogeni rispetto alle tecniche di coltura convenzionali [8-11].
I presenti risultati dello studio indicano che la prevalenza di mutans streptococchi in pazienti con ID invecchiato 6 a 30 anni è del 96,6%, il che è in accordo con le indagini simili condotte con i bambini delle scuole in altre parti del mondo [23-26], mentre la prevalenza di mutans streptococchi negli adulti è stato segnalato per essere superiore al 60% [27] e 82,7% nei soggetti con sindrome di Down di età compresa tra 1-48 anni [16]. La prevalenza di S. sobrinus solo
nel presente studio è stato superiore in quegli studi. Tuttavia, questi studi impiegati metodi culturali e risultati precedenti hanno dimostrato che mitis-salivarius bacitracina agar inibisce la crescita di S. sobrinus
in misura maggiore rispetto a quella di S. mutans
[28, 29]. Pertanto, i risultati contrastanti possono essere dovute al metodo di isolamento e di rilevamento più sensibile utilizzato per S. sobrinus
nel nostro studio rispetto a quelli impiegati in passato, così come differenze di tipo e stadio di lesioni cariose in soggetti. Tuttavia, dal momento che l'attuale coorte era limitato, sono necessari ulteriori studi.
Il punteggio DFT in quelli positivi per entrambi gli organismi a dopo 1 anno era significativamente più alta rispetto a quella di quelli positivi per S. mutans
solo. Inoltre, tale punteggio nei soggetti positivi per entrambi dopo 1 anno era significativamente più alta rispetto al basale e l'incremento del punteggio DFT in quelli positivi per entrambi era significativamente maggiore rispetto ai soggetti positivi per S. mutans
solo. L'aumento incrementale della carie per i soggetti in possesso di entrambi gli organismi è stata di 3,5 volte superiore a quello per le persone con S. mutans
da solo, che indica che gli individui con ID possedere entrambi hanno alti carie attività che quelli con solo S. mutans
. Nel nostro precedente studio, l'aumento del punteggio DFT per i denti primari in bambini in età prescolare in possesso sia stato quattro volte superiore a quello di coloro che possiedono S. mutans
da solo [12]. I risultati attuali della PCR hanno dimostrato che i soggetti con ID possiedono entrambe S. mutans
e S. sobrinus
avuto un aumento incremento significativamente più alta incidenza e la carie rispetto a quelli con solo S. mutans per
dopo 1 anno, che concorda anche con i risultati di precedenti studi di scolari di età compresa tra 11-12 anni [30, 31], così come gli studi di bambini in età prescolare di età compresa tra 3-5 anni [6, 12, 32]. Al contrario, non vi era alcuna differenza significativa nel punteggio basale per DFT tra soggetti positivi per entrambe S. mutans
e S. sobrinus
e quelli con S. mutans
da solo, anche se il punteggio DFT di quelli positivi per entrambi S. mutans
e S. sobrinus
mostrato una tendenza ad essere superiore a quello di quelli con S. mutans
da solo.
Gli attuali soggetti sono stati trattati ambulatorialmente e sottoposti dal locale dentale cliniche a causa della loro cooperazione dentale povera e già avevano denti cariati non trattati. Tutti i denti cariati sono stati immediatamente trattati nella clinica dentale Special Care, quindi la carie aumento incrementale nei soggetti positivi sia con S. mutans
e S. sobrinus
era significativamente più alta rispetto a quelli con S. mutans
da solo . In studi precedenti, i soggetti che possedevano entrambi i batteri hanno avuto aumenti di carie incrementare nel corso di un periodo di 1 anno [14, 33]. I risultati di questo primo studio ha suggerito che la prevalenza di S. sobrinus
era più strettamente associato con l'attività future della carie, in particolare con un aumento della carie superficie liscia incremento, rispetto alla prevalenza di S. mutans
. Tuttavia, la popolazione soggetto nel presente studio è stato limitato, quindi sono necessari ulteriori studi. Inoltre, esso rimane sconosciuto come la colonizzazione mista aumenta il cariogenicità dei batteri, mentre gli studi quantitativi utilizzando una real-time PCR quantitativa sono necessari per comprendere i meccanismi di aumento del rischio di carie per gli studi futuri
. Diciassette (89,5%) con S. mutans
da solo, e 86 (90,5%), con entrambe S. mutans
e S. sobrinus
avuto carie passate esperienze. Quattro (21,1%) dei soggetti con S. mutans
da solo, 9 (34,6%) con S. sobrinus solo
, e 54 (55,7%), sia con avuto aumenti di carie incremento, mentre nessuno dei soggetti possedendo né organismo ha mostrato un aumento di incremento. Inoltre, circa il 60% dei soggetti con entrambi avevano una carie aumento incrementale nel corso del periodo di studio di 1 anno, mentre circa il 20% di quelli con S. mutans
da solo ha dimostrato un tale aumento.
Conclusioni
in conclusione, i risultati attuali studio longitudinale indicano che gli individui con ID ospitare entrambi S. mutans Comprare e vendere S. sobrinus hanno una significativamente più alta incidenza della carie dentale rispetto a quelli positivi per S. mutans
solo.
dichiarazioni
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concorrenti. interessi
Gli autori dichiarano di non avere interessi in competizione.
autori contributi
Yo, FH e MO desighned lo studio. MO eseguito l'esame dentale. YO e MO raccolti campioni di placca. YO e FH eseguito il test di PCR convenzionale. YO e MO sono stati responsabili per l'analisi dei dati. Tutti gli autori hanno partecipato alla lavorazione del manoscritto e approvato la versione finale.
