Abstract
sfondo
rapida guarigione delle ferite dei tessuti molli orale può ridurre la possibilità di infezione e il disagio dei pazienti. Studi precedenti hanno dimostrato che il miglioramento della angiogenesi è un modo efficace per accelerare la riparazione della ferita. In questo studio, per migliorare l'angiogenesi e la guarigione delle ferite palatali, dimethyloxalylglycine (DMOG) è stata applicata a un modello di ratto ferita palatale. DMOG è noto per inibire la degradazione di ossigeno-dipendente di ipossia inducibile fattore-1 alfa (HIF-1α), che può portare a up-regolazione di marcatori angiogenesi, favorendo ferita riparazione. Abbiamo anche valutato gli effetti della DMOG sulla migrazione delle cellule e l'espressione di HIF-1α di cellule (RP) ratto palatali. Inoltre, mRNA e l'espressione della proteina del fattore di crescita vascolare endoteliale (VEGF) sono stati analizzati nelle cellule RP DMOG-trattati.
Metodi
colture primarie di ratto palatale (RP), le cellule sono state ottenute da Sprague-Dawley (SD) ratti. Effetti di DMOG sulla vitalità cellulare e la migrazione delle cellule RP sono state valutate usando un inserto formazano e cultura rispettivamente. VEGF mRNA è stato osservato da PCR in tempo reale, e VEGF e HIF-1α proteine sono stati rilevati mediante Western blotting. Per lo studio animale, ferite escissionale, 3 mm di diametro, sono state effettuate nella parte centrale del palato di ratti SD. DMOG con l'unguento acido ialuronico è stato applicato per via topica tre volte per 1 settimana, e poi la chiusura della ferita sono state quantificate fotograficamente e istologicamente.
Risultati
DMOG era citotossici alle cellule RP a concentrazioni superiori a 2 mm e non hanno influenzato la migrazione delle cellule a Le concentrazioni non citotossiche. mRNA e proteina espressione di VEGF erano significativamente stimolato da un trattamento DMOG. Il livello di proteine di HIF-1α è stato anche stabilizzato nelle cellule RP da DMOG. Nello studio degli animali, i gruppi trattati con 1 mg /ml DMOG hanno mostrato un aumento di ratto palatali contratture ferita.
Conclusioni
DMOG migliorato la guarigione delle ferite di ratto palato mucose, che era probabilmente a causa dell'effetto angiogenico dell'agente.
Parole
Dimethyloxalylglycine ipossia-inducibile fattore 1 alfa vascolare fattore di crescita endoteliale palatale mucosa la guarigione delle ferite Sfondo
tessuti molli orali sono inevitabilmente danneggiato durante autogeno innesto gengivale, la chirurgia parodontale, o la chirurgia implantare. Recupero di tessuto molle da lesioni dipende dalle dimensioni della ferita, posizione, condizioni di igiene orale, e il livello di immunità. La somministrazione orale o l'applicazione topica di antibiotici è raccomandata come una scelta di cura delle ferite orale per prevenire l'infezione batterica. Nel caso di grandi dimensioni difetti che possono essere causati da innesti autogeni gengivali, materiali di finitura vengono utilizzati per proteggere siti donatori danneggiati e per aiutare il processo di guarigione della ferita. Destinato guarigione rapida delle ferite può anche ridurre la possibilità di infezione e il disagio dei pazienti. In uno studio precedente, accelerazione del palato riparazione mucosa è stata ottenuta con una impalcatura collagene gelatina mantenendo il fattore di crescita basico dei fibroblasti (bFGF), un potente induttore angiogenesi [1]. β timosina
4 (Tβ 4), un oligopeptide che può sequestrare i monomeri G-actina, promuove anche la guarigione delle ferite della mucosa ratto [2]. Miglioramento della migrazione cellulare e l'angiogenesi è probabilità di essere coinvolti nella guarigione delle ferite da Tβ 4. Umeki et al. hanno dimostrato che la guarigione delle ferite della mucosa orale viene accelerata dalla leptina, un ormone anti-obesità circolanti, con miglioramento dell'angiogenesi [3]. Questi studi implicano che la valorizzazione di angiogenesi è un modo efficace per accelerare ferita riparazione orale.
Angiogenesi può essere stimolata da diversi fattori di crescita come il fattore di crescita dei fibroblasti (FGF) [4], fattore di crescita vascolare endoteliale (VEFG) [5] , il fattore di crescita derivato dalle piastrine (PDGF) [6, 7], e fattore di crescita trasformante β (TGF-β) [8, 9]. Diversi peptidi sono stati segnalati anche per promuovere l'angiogenesi [10-12]. Considerando l'importanza dell'angiogenesi nella guarigione delle ferite, l'applicazione di proteine e peptidi angiogenici alle ferite dovrebbe accelerare la riparazione del danno tissutale orale se le molecole sono correttamente consegnati ai siti ferita. Tuttavia, la stabilità e l'attività di proteine e peptidi non possono essere certi nell'ambiente orale in cui la temperatura e pH sono variabili a causa di mangiare e bere. Invece, angiogenici piccole molecole che sono chimicamente stabili possono essere più appropriato per le dure condizioni del cavo orale.
Dimethyloxalylglycine (DMOG), con piccolo peso molecolare, è un inibitore non specifica cellula-permeabile di idrossilasi prolyl (dottorati) [13 ]. In condizioni normossiche, PHD2 è noto per idrossilare residui di prolina specifici in HIF-1α, che poi porta alla degradazione di HIF-1α dal pathway ubiquitina-proteasoma [14-16]. Pertanto, l'inibizione della PHD2 da DMOG può impedire la degradazione di HIF-1α, creando un ambiente simile a quello che si trova nelle cellule ipossiche. Inoltre, vari geni correlati alla riparazione dei tessuti, come l'angiogenesi sovraregolati. Un precedente studio ha mostrato che DMOG migliorato la produzione di VEGF in cellule di fibroblasti parodontali [17]. Inoltre, Botusan et al. ha dimostrato che DMOG stabilizza HIF-1α e migliora la guarigione delle ferite cutanea nei topi diabetici [18]. In questo studio, l'effetto di DMOG sulla guarigione delle ferite orale è stato studiato in un modello di topo ferita palatale. Abbiamo anche valutato gli effetti della DMOG sulla migrazione delle cellule e l'espressione di HIF-1α di cellule (RP) ratto palatali. Inoltre, mRNA e l'espressione della proteina del fattore di crescita vascolare endoteliale (VEGF) sono stati analizzati nelle cellule RP DMOG-trattati.
Metodi
Agenti chimici e coltura cellulare
terreno di coltura cellulare e gli antibiotici sono stati acquistati da WELGENE Inc. ( Daegu, Corea). Siero fetale bovino (FBS) è stata acquistata da Lonza (Basilea, Svizzera), e altri reagenti sperimentali sono stati ottenuti da Sigma-Aldrich Co. (Saint Louis, MO, USA), se non diversamente specificato.
Cellule RP sono state isolate dal tessuti palatali di ratti 5 settimane di età maschi Sprague-Dawley (SD). tessuti palatali isolati sono stati lavati con tampone fosfato salino (PBS) (pH 7,4), in modo asettico macinata in pezzi, e poi immersi in terreno Dulbecco modificato Eagle (DMEM) contenente 10% FBS e soluzione antibiotica (100 U /ml di penicillina G e 100 pg /ml di streptomicina) a 37 ° C in un incubatore umidificato (5% CO 2/95% di aria). Dopo 20 giorni di coltura con cambiamenti medi con intervalli di 3 giorni, le cellule sono state raccolte e RP sub-coltivate nelle stesse condizioni. Passaggi da tre a cinque sono stati utilizzati per questo studio. Anche se non abbiamo identificare il tipo di cellule palatali a livello molecolare, le caratteristiche morfologiche delle cellule isolate sotto il microscopio hanno indicato dominio distinto di cellule di fibroblasti-like.
Citotossicità
cellule RP incubate fino a 80% confluenti sono stati rimossi e sub-coltivate a 0,8 × 10 5 cellule per ml in piastre da 96 pozzetti e incubate a 37 ° C con 5% di CO 2 in aria per 24 ore, e poi le cellule sono state trattate con DMOG a varie concentrazioni che vanno da 0,1 a 10 mM. Dopo il trattamento per 24 ore, le vitalità cellulare sono stati quantificati utilizzando il cellulare di conteggio Kit-8 (WST-8) (Dojindo Laboratories, Kumamoto, Giappone). Le cellule sono state incubate in 100 ml di soluzione di WST-8 per 1 ora a 37 ° C in atmosfera umidificata (5% CO 2/95% di aria). L'assorbanza è stata misurata alla lunghezza d'onda di 450 nm utilizzando un lettore di piastre (Alba, TECAN, Salisburgo, Austria). La densità ottica delle cellule non trattate è stata designata come 100%, e la vitalità cellulare delle cellule trattate è stata espressa come percentuale del controllo negativo non trattato.
Migrazione cellulare dosaggio
Per la vitro
dosaggio nella migrazione cellulare, una cultura inserire (Ibidi GmbH, Martinsried, Germania) è stato utilizzato per creare una ferita in coltura cellulare. L'inserto cultura è stato posto su un piatto di coltura, e 70 ml di sospensione cellulare RP (5 × 10 5 cellule /ml) è stato aggiunto in entrambi i pozzetti dell'inserto. Le cellule RP sono state incubate a 37 ° C per 48 ore e poi esposti a DMOG (0, 0,1, 0,5, 1, 2 mM) in terreni di coltura contenente 2% FBS per l'analisi migrazione cellulare. Chiusura della ferita è stata osservata e registrata ad intervalli sotto un microscopio a contrasto di fase (Olympus, Tokyo, Giappone). Per quantificare la migrazione delle cellule, l'area scoperta in cui non erano presenti cellule è stata misurata utilizzando il programma ImageJ, e il rapporto di area scoperta tra il controllo non trattato e gruppi trattati è stato ottenuto.
Analisi di espressione dell'mRNA mediante real-time PCR
Il effetto DMOG sull'espressione di VEGF mRNA è stata studiata mediante saggio real time PCR (RT-PCR). Dopo il trattamento con DMOG a 0, 0,1, 0,5, 1, e 2 mM per 24 ore, l'RNA totale è stato isolato usando estrazione dell'RNA reagente (WelPrep Total RNA Isolation Reagent, WELGENE Inc.). Dalla RNA totale, cDNA è stato preparato utilizzando un kit di sintesi del DNA (Potenza cDNA Synthesis Kit, introne Biotecnologie, Sungnam, Corea), e RT-PCR è stata effettuata in un ABI PRISM 7500 Sequence Detection System Cycler termico (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA), con volumi di reazione di 20 microlitri contenente 10 ml SYBR premiscelato Ex Taq (Takara Bio, Otsu, Giappone), 0,4 ml ROX Reference Dye II (Takara Bio), cDNA, e primer. I primer per l'amplificazione genica sono stati i seguenti: senso VEGF, 5'-GAGTATATCTTCAAGCCGTCCTGT-3 '; VEGF antisenso, 5'-ATCTGCATAGTGACGTTGCTCTC-3 '; GAPDH (deidrogenasi gliceraldeide-3-fosfato) senso 5'-TGTGTCCGTCGTGGATCTGA-3 '; GAPDH antisenso, 5'-CCTGCTTCACCACCTTCTTGAT-3 '. Le condizioni di PCR erano 95 ° C per 30 s, seguita da 40 cicli di denaturazione a 95 ° C per 5 s e ricottura a 63 ° C (34 s) per VEGF. Tutte le reazioni sono stati eseguiti in triplicato. espressione genica è stata valutata sulla base del ciclo di soglia (valore CT) e normalizzati per l'espressione del gene GAPDH.
analisi Western blot
analisi Western blot è stata eseguita per esaminare l'espressione proteica di HIF-1α e VEGF in DMOG trattati con cellule palatali. Dopo il trattamento con DMOG a varie concentrazioni per 24 ore, le cellule sono state lisate in tampone di estrazione contenente 50 mM Tris base-HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 0,5% Triton-X 100, e una compressa di cocktail di inibitori delle proteasi (1 compressa /10 ml, Roche Applied Science, Mannheim, Germania) per 45 min in ghiaccio. Gli estratti che contengono la stessa quantità di proteine sono stati eseguiti su 10% sodio dodecil solfato gel poliacrilammide e trasferiti membrane polivinildenfluoruro. Le macchie sono state incubate con anticorpi policlonali di coniglio contro VEGF, HIF-1α, o GAPDH in PBST (PBS contenente 0,1% di Tween 20) per 1,5 ore, lavato tre volte con PBST, e poi sondato con anticorpi secondari di capra anti-coniglio coniugato con rafano perossidasi. Le bande proteiche sono state visualizzate utilizzando un kit chemiluminescenza (WEST-ZOL più Western Blot Detection System, introne Biotechnology). Chemiluminescenza è stato rilevato utilizzando il LAS 1000 plus luminescenti Immagine Analyzer (Fuji Photo Film, Tokyo, Giappone). Tutti gli anticorpi sono stati acquistati da Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA).
Rat palatale la guarigione delle ferite saggio
Dopo aver confermato l'effetto angiogenesi di DMOG sulle cellule RP, l'effetto di DMOG sulla guarigione delle ferite dei tessuti del palato era eseguita in un modello di ratto ferita palatale. Tutti i ratti sono stati alloggiati sotto specifici (SPF) condizioni di assenza di patogeni presso il centro sperimentale animale di Seoul National University Dental School. Diciotto 13 settimane di età ratti maschi SD (sei ratti per ogni gruppo), di peso 300-350 g, sono stati utilizzati in questo studio. Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dal Comitato Istituzionale Animal Care e Usa (SNU-130123-8-1) di Seoul National University (Seoul, Corea). In anestesia generale, ferite perforate sono state fatte in una zona centrale di palato duro con una usa e getta a 3 mm di diametro biopsia punzone (Kai Industries Ltd., Gifu, Giappone), esponendo una superficie circolare di osso nudo. Acido ialuronico (HA) pomata (20 mg /ml) contenente 0, 0,5, o 1 mg /ml (5,7 mm) DMOG è stato applicato alla zona ferita. Dopo l'intervento chirurgico, gli animali sono stati alimentati con una dieta standard di pellet e acqua con enrofloxacina. Gli agenti sono stati nuovamente applicati nei giorni 2 e 4 sotto anestesia per ridurre lo stress, ed i ratti sono stati sacrificati al giorno 7. Il palato duro è stato separato, e l'area della ferita è stata osservata con un microscopio stereoscopico (Nikon, Tokyo, Giappone) e mediante analisi istologica. L'area della ferita sulle immagini microscopiche è stato calcolato utilizzando il software CellSense Dimension 1.6 (Olympus, Tokyo, Giappone). esemplari palatali sono stati presi per la valutazione istomorfometrica e campioni sono stati colorati con ematossilina ed eosina (H & amp; E) colorazione. Più di dieci diapositive per ogni campione sono state preparate, e abbiamo selezionato una sezione che espone il diametro più largo della ferita per l'analisi istologica. Le sezioni sono state esaminate al microscopio ottico (Olympus), e la distanza dei margini della ferita in ogni sezione è stata misurata con un micrometro oculare calibrato.
Analisi statistica
Per l'analisi statistica, ogni esperimento è stato eseguito in triplicato se non diversamente specificato . I dati sono espressi come media ± deviazione standard. Le analisi statistiche sono state determinate mediante ANOVA per lo studio in vivo e dosaggio migrazione cellulare. t di Student spaiato
-test è stato utilizzato per l'altro in vitro
risultati. A P
-value & lt; 0.05 è stato
considerato statisticamente significativo. Risultati
vitalità cellulare e la migrazione delle cellule di ratto palatali DMOG trattati
per studiare gli effetti di DMOG sulla vitalità delle cellule, le cellule di ratto palatali sono stati esposti a DMOG per 24 h. La citotossicità di DMOG stato dimostrato a concentrazioni superiori a 2 mM. La vitalità cellulare è stata ridotta al 60% a 4 mM, ed era quasi compromessa a 8 mm (Fig. 1). La migrazione cellulare è stata osservata in terreni di coltura contenenti 2% FBS per attenuare motilità cellulare. In assenza di FBS, cellule non trattate palatali non mostravano alcun movimento per 48 h (dati non mostrati). In 2% FBS medio, un leggero movimento delle cellule è stato mostrato a 12 h, e circa una metà dell'area vuoto è stato riempito con celle penetrato a 48 h. La migrazione cellulare durante le 48 ore non è stata influenzata dalla DMOG a concentrazioni non citotossiche (0-2 mm) (Fig. 2). Fig 1 Effetto della DMOG sulla vitalità delle cellule RP. cellule RP sono state trattate con DMOG a concentrazioni che vanno da 0 a 10 mm per 24 h. Dati e di errore barre indicano media ± SD di tre esperimenti indipendenti. * Dimostra un aumento statisticamente significativo (P
& lt; 0,05) differenza tra controllo e cellule trattate
Fig.2 cellulare migrazione delle cellule RP DMOG-trattati. (A) microfotografie rappresentativi di un test di migrazione cellulare. cellule RP sono stati trattati con DMOG a differenti concentrazioni in terreni di coltura contenente 2% FBS per il saggio migrazione cellulare con 40X ingrandimento. (B) Analisi quantitativa della migrazione delle cellule. La migrazione cellulare è stata quantificata calcolando il rapporto tra una superficie cellulare esente e cellula-occupata all'interno dello spazio ferita. Differenze statisticamente significative sono apparsi tra tutti i gruppi allo stesso punto di tempo (P
& lt; 0,05)
mRNA e l'espressione della proteina del gene VEGF ed i livelli di proteina HIF-1α nelle cellule DMOG-trattati
mRNA e di proteine espressione di VEGF è stato quantificato per studiare gli effetti di DMOG sulla angiogenesi a livello molecolare. Come mostrato in Fig. 3A, DMOG maggiore espressione genica del VEGF dose-dipendente in cellule RP. Il trattamento con DMOG a 0.5 mM ha mostrato un aumento della quantità di VEGF mRNA che era significativamente più alta di quella del gruppo di controllo, e 2 mM DMOG causato un aumento di 2,3 volte nei livelli di mRNA (Fig. 3A). L'espressione della proteina del VEGF è stato anche up-regolati da DMOG a concentrazioni superiori a 0,5 mm. A differenza del modello dose-dipendente di espressione mRNA in cellule DMOG-trattati, un livello 3,4 volte più alto di proteine è stata mantenuta a concentrazioni DMOG tra 0,5 e 2 mm (Fig. 3B). Fig 3 mRNA espressione del gene VEGF e proteine espressione di VEGF e HIF-1α nelle cellule DMOG-trattati. cellule RP sono state trattate con DMOG a concentrazioni comprese tra 0 e 2 mM per 24 h. Dati e di errore barre indicano media ± SD di tre esperimenti indipendenti. * Dimostra mRNA (A) e di proteine di espressione (B) i livelli che sono significativamente diversi da quelli delle cellule di controllo non trattate (P
& lt; 0,05)
La stabilità della proteina HIF-1α nelle cellule RP risente anche DMOG . Grandi quantità di proteine HIF-1α sono stati rilevati in cellule trattate con DMOG anche a 0.1 mM che non provocano una variazione del livello proteico di VEGF (Fig. 3B). Un aumento di 2,6 volte dei livelli di proteina HIF-1α è stato dimostrato in cellule che sono stati trattati con 0,5 mM DMOG. Nessun ulteriore significativo aumento dei livelli di proteina è stato mostrato a concentrazioni più elevate, che indica che 0,5 mM di DMOG è sufficiente a stabilizzare l'intera quantità di proteina HIF-1α nelle cellule.
Gli effetti di DMOG su palatale la guarigione delle ferite nei ratti
In un modello di ratto ferita palatina, DMOG stato applicato a due concentrazioni: 0,5 e 1 mg /ml. Il gruppo DMOG trattato non ha mostrato alcun sintomo di anormalità fisiologica durante il periodo sperimentale. Come mostrato in Fig. 4A, l'area ferita non è stato completamente epithelized a 1 settimana, ed è stato facilmente distinguibili dalle tessuto intatto non danneggiato che era rosa pallido a colori. La superficie media della superficie della ferita nel gruppo di controllo è stata del 2,4 mm 2. Nel gruppo trattato con test di DMOG a 1 mg /ml, la ferita è stata ridotta a 1,8 mm 2, che è modesto ma ancora una diminuzione statisticamente significativa. A 0,5 mg /ml, DMOG non ha influenzato la chiusura della ferita. Fig 4 Effetti della DMOG sulla guarigione delle ferite palatale. (A) le immagini microscopio stereoscopico di ferite palatali 1 settimana dopo l'intervento chirurgico. DMOG stato topicamente applicata a gruppi di prova (b1
-b6
: 0,5 mg /ml, c1-C6
: 1 mg /ml), e il veicolo è stato applicato (20 mg /ml HA) ai gruppi di controllo (A1
-A6
) (bar Scala: 1 mm). (B) ferita calcolata dalle immagini microscopio stereoscopico. * Indica una differenza significativa nella zona palatale della ferita rispetto a quello dei gruppi di controllo non trattati (P
& lt; 0,05)
Per confermare i risultati mostrati nella Fig. 4A, la distanza massima della regione unepithelized (distanza di margine della ferita) è stata misurata in sezioni istologiche della ferita. La distanza è stato ridotto in ratti che sono stati trattati con 1 mg /ml DMOG, mentre non vi era alcuna differenza statisticamente significativa nella distanza del margine della ferita tra controllo e 0,5 mg /ml gruppi DMOG trattati (Fig. 5). Pertanto, DMOG chiaramente accelerato palatale guarigione delle ferite nei ratti ad una certa concentrazione. osservazione Fig 5 istologico. (A) ematossilina Rappresentante e eosina (H & amp; E) la colorazione fotografie (
a: strato corneo, b
: epitelio, c
: il tessuto connettivo, d
: mascelle) (bar Scala: 500 micron). (B) I valori medi di larghezza massima palatale ferita calcolato dalle sezioni HE-colorate. * Indica una differenza significativa nella palatale larghezza ferita di gruppi DMOG trattati rispetto a quello dei gruppi di controllo non trattati (P
& lt; 0,05)
Discussione
HIF idrossilasi prolyl inibitori sono stati studiati per trovare un nuovo farmaco per il trattamento di anemia, malattie renali e insufficienza cardiaca [19, 20]. La promozione di angiogenesi è un mirato effetto terapeutico dei farmaci di nuova in via di sviluppo, in quanto l'angiogenesi è un passo inevitabilmente necessaria la rigenerazione dei tessuti e la guarigione delle ferite.
Abbiamo osservato l'effetto di DMOG, un inibitore prolyl idrossilasi HIF-1α, sulla guarigione delle ferite di ratto mucosa del palato. Per in vitro
studi, la citotossicità e la capacità di regolare VEGF e HIF-1α nelle cellule provenienti da tessuti palatali ratto sono stati studiati. La citotossicità di DMOG contro le cellule palatali ratto apparve a concentrazioni relativamente elevate (Fig. 1). L'accumulo di proteine HIF-1α non è probabilmente una causa diretta di morte cellulare perché il livello intracellulare di HIF-1α è stato già saturo a 0,5 mm e non è stato alterato fino a 2,0 mm. Un precedente studio ha riportato l'arresto del ciclo cellulare mediante inibitori di dottorato [21], che fornisce una possibile spiegazione per gli effetti tossici dei DMOG. Dal momento che la citotossicità senza dubbio può disturbare la riparazione dei tessuti, le concentrazioni DMOG per gli studi in vivo dovrebbero essere scelti con cura per suscitare un effetto di guarigione delle ferite. Marchbank et al. ha dimostrato che DMOG stimola la migrazione di stomaco umano e cellule di carcinoma del colon [22]. Tuttavia, una diminuzione della migrazione cellulare singola è stata osservata nello stato ipossia di alcune cellule di fibroblasti [23]. Pertanto, l'effetto di accumulo ipossia o HIF-1α sulla migrazione delle cellule è tipo cellulare specifico. La motilità delle cellule di ratto palatali in questo studio non è stato promosso da DMOG (Fig. 2), il che suggerisce che la migrazione delle cellule palatali fibroblasti, come non è stato un fattore determinante nella guarigione delle ferite delle cellule palatali DMOG-trattati.
Precedenza, è stato dimostrato che gli inibitori PHD up-regolare l'espressione di VEGF in vari tipi di cellule, comprese le cellule endoteliali [24], cellule epiteliali [25], fibroblasti gengivali e legamenti parodontali [17]. In accordo con i risultati di questi studi, il presente studio ha inoltre confermato la capacità di DMOG di up-regolare l'espressione di VEGF (Fig. 3) su cellule di fibroblasti come ratto palatali. DMOG anche indotto la stabilizzazione della proteina HIF-1α, e la gamma di concentrazioni efficaci è stata sovrapposta ad eccezione di 0,1 mM in cui è stato up-regolati solo proteine HIF-1α ma non VEGF. Ciò indica che VEGF non può essere indotta in assenza di ovvi aumenti la quantità di HIF-1α. Inoltre, la stabilizzazione di HIF-1α è noto anche per indurre trasportatore di glucosio-1 e fosfoglicerato chinasi-1, che può migliorare la guarigione delle ferite, migliorando la riepitelizzazione [26].
Causa della condizione umida della cavità orale nell'esperimento animale, è stato richiesto di impiegare un mezzo per estendere la durata residua del farmaco nella zona della ferita. Come veicolo per la consegna di DMOG per mucosa orale in questo studio, è stato utilizzato un idrogel di acido ialuronico a causa della sua elevata viscosità ed eccellente biocompatibilità; meno citotossico e senza effetti infiammatori o allergici. Tuttavia, l'ambiente orale è estremamente dinamico. Il cibo, la saliva, e l'acqua potabile in grado di rimuovere rapidamente gli idrogel per uso topico. Nel presente studio, la struttura porosa del idrogel acido ialuronico non è stato osservato sulle sezioni colorate HE, indicando che l'acido ialuronico e incorporato DMOG era stato lavato via dalla ferita prima del sacrificio nel giorno 7. Pertanto, non è stato possibile stimare un importo valido di DMOG per la guarigione delle ferite. In questo studio, è stato applicato DMOG a 0.5 e 1 mg /ml. Un modesto ma statisticamente significativa riduzione dell'area della ferita e la distanza verificata soltanto a 1 mg /ml (Figg. 4 e 5). Un veicolo più durevole e una maggiore concentrazione di DMOG potrebbero ulteriormente accelerare la guarigione della ferita palatale. Tuttavia, i risultati di questo studio hanno dimostrato che HIF-1α è un obiettivo potente di guarigione delle ferite nei tessuti orali.
Conclusioni
L'espressione di VEGF mRNA nelle cellule RP è stato arricchito da DMOG. VEGF e l'espressione della proteina HIF-1α sono stati anche aumentato in modo significativo da un trattamento con DMOG. L'applicazione topica di 1 mg /ml DMOG con pomata acido ialuronico significativamente accelerato la guarigione delle ferite palatali nei ratti. Questi risultati dimostrano l'utilità di DMOG per la promozione della guarigione delle ferite dei tessuti molli orali
Abbreviazioni
DMEM:.
Modificata mezzo di Eagle Dulbecco
DMOG:
Dimethyloxalylglycine
HA:
L'acido ialuronico
HIF-1α:
ipossia inducibile fattore-1 alfa
dottorati:
prolyl idrossilasi
RP:
Rat palatale
TGF- β:
Trasformare il fattore di crescita β
VEGF:
fattore di crescita vascolare endoteliale
Dichiarazioni
Ringraziamenti
Questo studio è stato sostenuta da una sovvenzione della Corea Salute Technology R & amp; D progetto, Ministero della Salute & amp; Welfare, Repubblica di Corea (HI12C0735).
Concorrenti interessi
Gli autori dichiarano di non avere interessi in gioco.
Contributi degli autori
YHC contribuito alla pianificazione e progettazione dello studio. ZT eseguita la maggior parte del lavoro di laboratorio e analisi dei dati. PHC e SKM partecipato allo studio degli animali. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.
