Abstract
sfondo
Data l'alta prevalenza di candidosi orale e il numero limitato di agenti antifungini disponibili per controllare l'infezione, questo studio ha indagato in vitro
attività antifungina di aceto di alcool sulla Candida
spp. e il suo effetto sulle proprietà fisiche delle resine acriliche
. Metodi
Test per determinare la minima concentrazione inibente (MIC) e minima fungicida concentrazione (MFC) di alcool aceto (0,04 g /ml di acido acetico) e nistatina ( di controllo) sono stati eseguiti. L'attività antifungina di aceto alcool è stato valutato mediante crescita microbica saggi cinetici e l'inibizione di Candida albicans
adesione alla resina acrilica a diversi intervalli di tempo. rugosità della superficie e il colore della resina acrilica sono stati analizzati utilizzando un dispositivo misuratore di rugosità e analizzatore di colore.
Risultati
aceto di alcol hanno mostrato MIC
75% e MFC 62,5% di 2,5 mg /ml, con fungicida effetto da 120 min, a differenza di nistatina (p & lt; 0,0001), che ha mostrato effetto fungistatico. aceto di alcol ha causato una maggiore inibizione della C. albicans
adesione alla resina acrilica (p ≤ 0,001) rispetto a nistatina e non ha modificato i parametri di rugosità e il colore del materiale.
Conclusione
aceto alcool ha mostrato proprietà antifungine contro Candida
ceppi e non ha comportato variazioni fisiche alla resina acrilica.
Parole
candidosi orale Candida albicans
acido acetico protesi dentale Sfondo
Dato l'aumento della speranza di vita e un maggiore accesso della popolazione a servizi di cure dentistiche, non vi è una maggiore prevalenza di utenti che indossano protesi a causa della significativa perdita dei denti tra gli anziani, sia nei paesi sviluppati o in via di sviluppo [1,2].
associati con l'uso di protesi dentarie, l'insorgenza di infezioni causate da specie fungine, in particolare Candida
, è comune e per lo più riportati in individui con cattive condizioni di salute generale e immunosoppressione [3]. Queste infezioni sono chiamati protesi stomatite e possono essere clinicamente identificati in base ai diversi gradi di eritema presenti sulla mucosa sottostante base di protesi parziali o totali. Tra i fattori eziologici più comuni, sono: scarsa igiene orale; dentiere mal attrezzate; indebolimento del sistema immunitario; uso indiscriminato di antibiotici; e la proliferazione di Candida spp
. [4].
Uno dei principali fattori che contribuiscono alla colonizzazione di Candida spp
. risiede nella loro adattabilità a una varietà di crescita "habitat" tramite la formazione di comunità microbiche collegati ad una matrice extracellulare polisaccaridi, comprese le proteine salivari. Candida
può colonizzare rapidamente la base della resina acrilica, fornendo una maggiore stabilità per l'infezione fungina nell'ospite [5].
Infezioni fungine Come della cavità orale da Candida
spp. sono superficiali, è stato raccomandato l'uso topico di nistatina e miconazolo. In caso di mancata risposta positiva a questi agenti terapeutici, altre sostanze come il fluconazolo e ketoconazolo possono essere prescritti per uso sistemico [6,7]. Tuttavia, l'uso indiscriminato di convenzionali risultati agenti antifungini nella selezione di ceppi resistenti, specialmente in pazienti immunodepressi e in quelli con malattie sistemiche gravi [8]. Questo fatto giustifica lo sviluppo di nuove terapie per l'uso nella pratica clinica quotidiana [9]. Va inoltre ricordato che molti Candida
spp. sono in grado di penetrare la resina acrilica usata nella fabbricazione di dispositivi protesici a profondità variabile da 1 a 2 ìm [10], evidenziando così la necessità di un prodotto che consente di rimuovere il biofilm senza danneggiare le proprietà meccaniche della resina. Vale la pena notare che tra le proprietà richieste di materiali utilizzati nella fabbricazione di protesi, quelli relativi alla rugosità, tensione superficiale, interazioni elettrostatiche e durezza sono di importanza clinica, poiché possono influenzare accumulo biofilm e il cambiamento di colore. La rugosità superficiale provoca l'adesione e ritenzione di C. albicans
, che è di particolare importanza per l'insorgenza di stomatite [11].
In questo contesto, si ipotizza che l'aceto alcool può controllare e prevenire stomatite da protesi grazie alla sua azione disinfettante sulla resina acrilica usata nella produzione di protesi. Un basso potenziale di idrogeno che porta alla diffusione di acido acetico e la sua possibile interazione con enzimi coinvolti nella formazione di ergosterolo, un componente principale delle membrane plasmatiche fungine, può spiegare la nota attività antimicrobica di aceto alcool, in particolare anti-Candida
proprietà. Inoltre, ha un basso costo e facile accesso [12,13]. Questo studio ha lo scopo di valutare gli effetti in vitro
in antifungini su aceto di alcool su Candida
spp., E di verificarne l'effetto sulle proprietà fisiche della resina acrilica da rugosità superficiale e cambiamento di colore.
Metodi
marchio aceto alcool Minhoto® lotto L281D (Ind. Reunidas Raymundo da Fonte SA, Paulista, PE, Brasile) è stato utilizzato come prodotto di prova, contenente acido acetico al 4% (0,04 g /ml) nella sua composizione. Il prodotto è stato testato per la minima concentrazione inibente (MIC), minima concentrazione fungicida (MFC), cinetica di crescita microbica, l'inibizione della Candida
spp. adesione alla superficie di resina acrilica ed effetti su di rugosità superficiale e parametri di colore. Nistatina (Sigma - Aldrich Brasil, São Paulo, SP, Brazil) è stato utilizzato come controllo positivo. Durante le prove, controlli per la vitalità del lievito sono stati eseguiti anche
I seguenti ceppi sono stati utilizzati:. Candida albicans ATCC
76.485, Candida albicans
LM 21, Candida albicans
MI03, Candida albicans
LM 615, Candida albicans
LM 13, Candida tropicalis
, ATCC 13803, Candida tropicalis
LM 33 e Candida tropicalis
LM 70. Le colonie sono state sospese in 5 ml di soluzione fisiologica sterile, 0,145 mol /L ( 0,85% NaCl). La sospensione risultante è stata posta in un vortex (Phoenix ®) per 15 secondi, e la densità cellulare è stata regolata usando uno spettrofotometro a 0,5 scala McFarland alla lunghezza d'onda di 530 nm.
Attività antimicrobica (MIC e MFC)
MIC è stato determinato mediante la tecnica microdiluizione con 96 pozzetti [14]. Un totale di 100 microlitri di 2 volte concentrato Sabourand Dextrose Broth (SDB) (Difco Laboratories, Detroit, Mich., USA) è stato distribuito in ciascun pozzetto, seguito da 100 ml di sostanza in esame (aceto alcool o nystatin a concentrazioni iniziali di 40.000 ug /ml e 100 pg /ml, rispettivamente). Un'aliquota di 100 microlitri è stato raccolto dalla prima bene e poi preparata nel seguente, per procedere con una diluizione seriale a 2 volte. Circa 10 ml di inoculo sono stati dispensati in ogni pozzetto. I test sono stati eseguiti in triplicato e piastre sono state incubate a 35 ° C per 48 ore. MIC è stata considerata come la più bassa concentrazione in grado di inibire la crescita visibile dei ceppi. Per confermare la presenza di microrganismi vitali o non vitali, 10 ml di TTC dye (2,3,5 trifeniltetrazolo cloruro) è stato utilizzato, che riflette l'attività degli enzimi deidrogenasi coinvolti nella respirazione cellulare, colorazione campioni vivi in [red ,,,0],15]. Dopo 24 ore di incubazione, lettura visiva è stata eseguita.
MFC è stato determinato dopo lettura della MIC raccogliendo aliquote di 10 microlitri da sottoculture corrispondenti a MIC, MICx2 e MICX4 e mescolandoli a 100 ml di SDB in 96 pozzetti micropiastre. Dopo incubazione per 24 ore a 35 ° C, lettura visiva è stata eseguita, considerando la formazione di gruppi di cellule al fondo dei pozzetti [14]. Per maggiore chiarezza dei risultati, sono stati aggiunti 10 ml di TTC, e MFC stata caratterizzata come la più bassa concentrazione del prodotto di prova in grado di inibire la crescita dei ceppi [14].
Cinetica di crescita microbica
C. albicans
LM 615 è stato scelto per presentare la migliore crescita microbica ottenendo MIC e MFC. Per il saggio, 0,5 ml di sospensione di lievito è stato inoculato in 4,5 ml di SDB con la sostanza in esame (aceto di alcool o nistatina) a concentrazioni adeguati alle MIC, MICx2 e MICX4. Ad intervalli di tempo corrispondenti a 0 (t0), 30 (t1), 60 (t2), 120 (t3) e 180 minuti (T4), 10 aliquote microlitri sono stati raccolti dalla sospensione e coltivate su Sabourand Dextrose Agar (SDA) (Difco laboratori, Detroit, Michigan., USA) piatti. Dopo incubazione a 35 ° C per 24 ore, il numero di unità formanti colonie (CFU) è stato contato. I risultati sono presentati come curve morte microbiche.
Preparazione di campioni di resine acriliche
Per verificare l'inibizione dell'adesione fungina alla resina acrilica, così come i cambiamenti nella rugosità superficiale e colore, 78 campioni circolari erano fatte di resina acrilica auto-polimerizzato (Vip Flash ®, Vipi prodotti dentali, Pirassununga, San Paolo, Brasile), il dimensionamento di 12 mm di diametro e 7 mm di spessore. I campioni sono stati sottoposti a finire con la smerigliatrice di tungsteno (1508 Edenta AG, Haupistrasse, Svizzera), e lucidatura con carborundum carta vetrata di differenti granulometrie (220, 330, 600 e 1200) e si sentivano i dischi incorporati in acqua pietra pomice pasta /distillato, seguita da risciacquo e sterilizzazione
. inibizione di adesione funghi alla superficie della resina acrilica
Diciotto esemplari sono stati collocati in provette contenenti 2,5 ml di SDB e 0,5 ml di sospensione di lievito (C. albicans
LM 615) a 35 ° C per 48 h. I campioni sono stati divisi casualmente in tre gruppi: GI (n = 6) - Controllo negativo (nessuna sostanza antifungino, garantendo C. albicans
adesione alla resina acrilica), GII (n = 6) - aceto alcool e GIII (n = 6) -. nistatina
una quantità sufficiente di aceto di alcool o soluzione nistatina sono stati aggiunti nelle provette contenenti sospensione SDB /lievito in GII e GIII gruppi, con conseguente concentrazioni finali corrispondenti al MIC, MICx2 e MICX4. Dopo il periodo di incubazione, i campioni sono stati sciacquati e poste in provette contenenti 5 ml di soluzione fisiologica (NaCl 0,85%), e agitata per 60 s. Poi, 10 ml di questa soluzione sono state coltivate su piastre SDA, che sono state incubate a 35 ° C per 48 h per ulteriore lettura e conteggio batterica, in triplice copia
. Prova di variazioni di rugosità superficiale e parametri di colore della resina acrilica
Nei gruppi esposti all'effetto di aceto alcool, concentrazioni corrispondenti alla MIC (n = 6), MIC × 2 (n = 6) e MIC × 4 (n = 6) sono stati utilizzati. Sei campioni sono stati esposti a nystatin e altri sei per nessun agente antifungino. I campioni sono stati segnati sulla regione centrale, 1 mm a destra e 1 mm verso sinistra, e sottoposti ad un dispositivo misuratore di rugosità (SJ -201 Mitutayo - Giappone, parametro di rugosità Ra: 0.8 cut-off
mm) per eseguire valutazione iniziale (t = 0) nei tre punti. rugosità superficiale (Ra) è stato istituito come gli F-valori medi dei tre punti. I campioni sono stati immersi nella soluzione per 30, 60, 120 e 180 minuti, lavato con acqua distillata, essiccati su carta assorbente e sottoposto ad analisi rugosimetric.
Con lo scopo di misurare le variazioni di colore della resina acrilica, 30 campioni sono stati divisi casualmente in tre gruppi, come precedentemente menzionato. Nei gruppi corrispondenti all'aceto alcol e nistatina, le stesse concentrazioni come prima sono stati usati. I campioni sono stati esposti agli stessi intervalli di tempo (0, 30, 60, 120 e 180 minuti). L'analisi del colore è stato determinato per mezzo di un dispositivo a colori analizzatore (Modello ACR-1023, Instrutherm Instrumentos de medição Ltda, San Paolo, Brasile; display a cristalli liquidi di 59 millimetri × 34 mm Geometria di misurazione: 45 ° /0 °; intervallo spettrale 400-700 nm, sensore di colore di tre trasmettitori foto di colore rosso, verde e blu), utilizzando il sistema RGB.
analisi statistica
I dati sono stati registrati in un database sul GraphPad Prism 2004. l'attività antifungina è stata valutata dal due analisi della varianza (ANOVA), seguita da post-test di Tukey, con livello di significatività del 5%. Per valutare i cambiamenti causati da aceto di alcol sulla rugosità della superficie e il colore della resina acrilica, Kruskal-Wallis e post-test di Dunn sono stati utilizzati.
Risultati
il microfono e MFC risultati di alcol aceto contenente 0,04 g /ml di acido acetico, e nistatina (controllo positivo) sono mostrate in Tabella 1. Tutti i ceppi testati sono risultati essere sensibili all'azione di aceto alcool, con MIC 75% pari a 2500 ug /ml. C. tropicalis
ATCC 13803 e C. tropicalis
LM 33 erano ancora più sensibile alle aceto di alcool, mostrando MIC di 1250 mcg ml. Tuttavia, questi ceppi (25%) hanno richiesto alte concentrazioni di prodotto test per stabilire attività fungicida, con il valore MFC di 10 mg /ml. Gli altri ceppi (62,5%) hanno mostrato valori MFC pari a 2500 mg /ml, lo stesso del MIC. Per quanto riguarda nistatina, tutti i ceppi sono stati inibiti ad una concentrazione di 3,12 mg /ml, che è stato utilizzato come controllo in un altro tests.Table 1 MIC e risultati MFC di aceto di alcol e nistatina su specie di Candida
aceto alcool
Nistatina
Ceppi
MIC (mg /ml)
MFC (mg /ml)
MIC (mcg /mL)
MFC (mg /ml)
C. albicans
LM 21
2500
2500
3.12
6,25
C. albicans
MI03
2500
2500
3.12
12.5
C. albicans
LM 615
2500
5000
3.12
12,5
C. albicans
LM 13
2500
2500
3.12
3.12
C. albicans
ATCC 76.485
2500
2500
3.12
6,25
C. tropicalis
ATCC 13803
1500
10000
3.12
12,5
C. tropicalis
LM 33
1500
10000
3.12
3.12
C. tropicalis
LM 708
2500
2500
3.12
3.12
la figura 1 mostra le curve di mortalità microbica in presenza di aceto di alcol a concentrazioni corrispondenti a MIC, MIC × 2 e MIC × 4 in funzione del tempo. È stato osservato che le concentrazioni prima menzionati, c'era attività fungistatica da 0 a 180 minuti. Tuttavia, per MIC × 4, attività fungistatica del prodotto da testare è stato rilevato da 0 a 120 minuti, seguita da effetti fungicidi. Il controllo positivo (nistatina) al MIC, MIC × 2 e MIC × 4 hanno mostrato effetti fungistatici a tutti gli intervalli di tempo. è stata osservata Figura 1 Curva microbica morte in funzione del tempo per l'aceto di alcool al MIC, MIC × 2 e MIC × 4 concentrazioni
differenza statisticamente significativa tra l'effetto di alcol e aceto nistatina (p & lt; 0,05)., ed anche in relazione alla il controllo negativo, rappresentato dall'assenza di agente antimicotico. Questa deduzione può essere verificato in figura 2, in particolare nei tempi 120 a 180 minuti, marcatamente l'inizio dell'attività fungicida di aceto alcool. Figura 2 microbica morte contro
curva tempo, che mostra il rapporto tra alcol aceto (acido acetico) e nistatina, utilizzato a MIC × 4, e il controllo (assenza di sostanze antimicotico) (2 - Way ANOVA, p & lt; 0,0001, Turchia , p. & lt; 0,05)
Figura 3 mostra i dati sull'efficacia di aceto alcool nella inibizione della adesione di C. albicans
LM 615 agli esemplari resina acrilica, evidenziando l'azione di acido acetico e nistatina (p & lt; 0,05). Il primo era in grado di ridurre l'adesione microbica presso il MIC e MIC × 2, e completamente evitare che al MIC × 4. La figura 3 Test di adesione e CFU contare dopo l'azione di aceto di alcool, nistatina e controllo (assenza di sostanza antimicotico).
la rugosità superficiale (Ra) analisi ha mostrato alcuna variazione significativa (superiore a 0,2 micron) per campioni esposti ad aceto alcool (Tabella 2) .table 2 rugosità superficiale (Ra) in micron di campioni sottoposti all'azione di aceto alcool nel tempo
Tempo (min)
alcol aceto
nistatina
controllo
MIC
MIC × 2
MIC × 4
0
0.16
0.14
0.11
0.11
0.09
30
0.17
0.13
0.12
0.77
0.11
60
0.16
0.15
0.12
1.1
0.11
120
0.15
0.14
0.16
1.2
0.09
180
0.16
0.13
0.16
1.2
0.1
è stata osservata alcuna differenza significativa tra i due gruppi (p & gt; 0,05 - Kruskal Wallis Test).
Per quanto riguarda i possibili cambiamenti di colore, i risultati hanno indicato che l'aceto di alcool non ha influenzato il colore dei campioni esposti ad intervalli di tempo da 0 a 180 minuti a diverse concentrazioni, come si vede nella tabella 3.Table 3 colori (valori espressi in scala RGB) dei campioni dopo l'esposizione all'azione di aceto di alcool
tempo di esposizione (min)
Nystatin
0
60
120
180
alcool aceto MIC
2 2 4 1 6 9 (a) 1 4 4
(a)
(a)
(a)
aceto di alcool MIC x 2
(a)
(a)
(a)
(a)
alcol aceto MIC x4
(a)
(a)
(a)
(a)
Nystatin
(a)
(a)
(a)
(a)
Control
(a)
(a)
(a)
(a)
(A) Rappresenta valori identici.
Discussione
I risultati del nostro studio indicano che l'aceto di alcol ha effetti fungistatici e fungicidi sui ceppi testati di Candida
. Studi precedenti hanno già verificato l'attività antifungina di aceti [16], anche se valori di MIC e MFC non sono espressi secondo la tecnica microdiluizione, che è a basso costo e rapido metodo che fornisce risultati riproducibili e richiede piccole quantità di sospensione e coltura microbica supporti [14,17,18].
il meccanismo di azione di acido acetico, il componente principale di aceto alcool, è probabilmente collegato ad un potenziale ridotto all'idrogeno, facilitando così la diffusione dell'acido attraverso la membrana plasmatica di cellule fungine [ ,,,0],18]. La letteratura ha segnalato effetto inibitorio di acido acetico on-14α lanosterolo-demetilasi, un importante enzima coinvolto nella formazione dell'ergosterolo, che è essenziale per mantenere l'integrità della membrana plasmatica fungina [19,20].
Riguardo nystatin , i valori di MIC e MFC ottenuti per tutti i ceppi testati sono in accordo con la letteratura [21]. Nystatin è stato scelto come controllo perché è un antimicotico standard ampiamente utilizzato per il trattamento topico delle infezioni fungine nella cavità orale [22]. Il suo meccanismo di azione è legata alla inibizione di enzimi coinvolti nella formazione dell'ergosterolo e, di conseguenza, la permeabilità della membrana cellulare [23].
Cinetica di crescita microbica è una variabile importante per valutare l'micostatica o attività fungicida di una particolare sostanza , nonché per determinare l'influenza del tempo di esposizione al processo di morte cellulare [24]. Le cinetiche microbiche di aceto alcool mostravano attività fungistatica a MIC e MICx2 per l'intervallo di tempo tra 0 e 120 minuti, e da quel momento, c'era attività fungicida a MICX4 (10 mg ml). attività fungicida è considerata tale quando il prodotto è in grado di ridurre di tre unità logaritmiche in base 10, e quando queste modifiche sono coerenti con il comportamento fungistatica.
Riconosciuto come un processo dinamico utilizzato per valutare nuovi agenti antimicrobici, la morte microbica contro curva tempo
non è stato menzionato in studi precedenti che coinvolgono l'aceto di alcol [25], ostacolando la standardizzazione dei risultati e il confronto tra di loro. Questi studi hanno dimostrato i tempi di azione che sembrano essere stati adottati in modo casuale, che vanno da 10 minuti a otto ore, senza alcun riferimento metodologico basato su cinetiche microbiche [17,26].
Usato come antifungina, nistatina è stato testato anche per la morte microbica rispetto alla curva tempo
. Studi precedenti hanno mostrato attività fungistatica di nistatina [23,27], avvalorando i risultati del presente studio, anche se l'attività fungicida può essere visto a concentrazioni superiori.
Durante la selezione di un agente disinfettante, si dovrebbe valutare la sua compatibilità con orale tessuti, nonché con i materiali che compongono la base di protesi dentali [28]. L'adesione di Candida spp
. alla superficie della resina acrilica è solitamente il primo passo nella colonizzazione dei tessuti che vengono a contatto con la protesi rimovibile, e tende a formare un biofilm spesso resistenti alla terapia antifungina convenzionale [29]. C. albicans
specie sono descritte come quelli con una maggiore capacità di aderire alle cellule della mucosa orale e alla superficie della resina acrilica [30], che è il motivo per cui C. albicans
è stata la specie per determinare MIC e MFC selezionati . Studi precedenti hanno dimostrato che una soluzione di aceto di alcool non diluito è stato in grado di inibire l'adesione dei microorganismi, compreso C. albicans,
resina acrilica [31], che è stata anche osservata in questo studio. Tuttavia, altre indagini hanno dimostrato che l'aceto di alcool non è stato in grado di inibire l'adesione di C. albicans
cellule di resina acrilica [32].
Nessuna variazione significativa è stata osservata nella rugosità superficiale media del materiale, confermando precedenti risultati [31,33]. Modifiche sulla rugosità superficiale individuati dopo esposizione a diverse concentrazioni aceto alcool non hanno superato il valore di soglia di 0,2 micron, sopra il quale è previsto influenza della rugosità superficiale sulla adesione dei microorganismi, in quanto irregolarità superficiali servono come una nicchia microbiologico, proteggendo agenti infettivi da l'azione meccanica del dente spazzolatura [34].
Questo studio non ha mostrato cambiamenti di colore della resina acrilica, dopo un periodo di 180 minuti di esposizione per l'aceto di alcool e nistatina, confermando i risultati precedenti [35]. Il colore originale di una resina può essere alterata dalla ingestione di grandi quantità di coloranti, assorbimento di liquido e di immersione in soluzioni disinfettanti che influenzano la rugosità superficiale, danneggiando l'estetica del materiale [36]. Uno studio ha mostrato usando aceti cambiamento di colore in resina acrilica dopo un intervallo da 12 a 30 giorni di immersione [31]. Anche considerando l'importanza di conoscere l'effetto dell'esposizione prolungata di resina acrilica all'azione dei disinfettanti, tempi più brevi come quelli utilizzati in questo studio devono essere utilizzati, in quanto simulano il momento in cui i dispositivi protesici sono al di fuori della cavità orale. Precedenti studi hanno valutato l'effetto di soluzioni disinfettanti sulle proprietà fisiche della resina acrilica. Etanolo, in concentrazioni variabili, possono produrre effetti sulla rugosità e colore [33]. La rugosità superficiale della resina acrilica è stata maggiore con l'uso di perborato di sodio 3,8% e inferiore con 2% clorexidina gluconato [31].
I risultati di questo test hanno mostrato evidenza scientifica sul significativo effetto antimicotico di aceto alcool contro Candida
specie, nonché l'assenza di influenza negativa sulla resina acrilica. Questi risultati supportano l'eventuale uso del prodotto, che dovrebbe passare attraverso ulteriori studi di laboratorio che studiano i suoi effetti sulla formazione di biofilm multispecie, microdurezza di resina acrilica; studi clinici dovrebbero essere considerati per determinare la sicurezza, la tollerabilità e l'efficacia clinica di questa sostanza.
Conclusione
aceto alcool ha mostrato in vitro
attività contro la Candida
ceppi coinvolti con protesi stomatite, con l'azione fungicida dopo 120 minuti di esposizione ad una concentrazione di 10 mg /ml. E 'stato anche in grado di prevenire l'adesione di C. albicans
resina acrilica e non ha provocato cambiamenti sulla rugosità della superficie e il colore della resina acrilica, dopo due ore di esposizione
. Dichiarazioni
Ringraziamenti
ringraziamo il programma post-laurea in Odontoiatria, Università federale di Paraíba, per il sostegno finanziario per questa ricerca.
interessi concorrenti
Gli autori dichiarano di non avere interessi in gioco.
contributi degli autori
RDC concepito dello studio, e partecipato alla sua progettazione e coordinamento e ha contribuito a redigere il manoscritto. ACLGM effettuato il dosaggio microbiologico e test di alterazione della superficie della resina acrilica. EOL partecipato alla progettazione dello studio e di coordinamento e ha contribuito a eseguito il test microbiologico. AUDB partecipato alla progettazione dello studio e dell'esecuzione dell'analisi statistica. JAO partecipato alla preparazione di esemplari in resina acrilica e ha contribuito alla redazione del manoscritto. ALC effettuato il test di cambiamento di colore nei campioni di resina acrilica. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.
