Abstract
Background
E 'ben noto che l'uso di detergenti per protesi può ridurre Candida albicans l'accumulo di biofilm
; Tuttavia, l'efficacia di detergenti per protesi acido citrico è incerta. Inoltre, l'efficacia a lungo termine di questo protesi detergente non è ben definita, e il loro effetto sulla biofilm residue è sconosciuta. Questo vitro
studio ha valutato l'efficacia di acido citrico trattamento protesi detergente in C. albicans biofilm
ricolonizzazione di poli (metacrilato di metile) (PMMA) di superficie.
Metodi
C. albicans biofilm
sono stati sviluppati per 72 h su provini di resine PMMA (n = 168), che sono stati assegnati in modo casuale a 1 dei 3 trattamenti di pulizia (CTS) durante la notte (8 ore). TA incluso acqua depurata come controllo (CTC) e due gruppi sperimentali che hanno usato sia una diluizione 1: 5 di protesi acido citrico detergente (CT5) o di una diluizione 1: 8 della protesi acido citrico detergente (CT8). biofilm residui che aderiscono ai campioni sono stati raccolti e quantificati in due punti di tempo: subito dopo CTS (TIC) e dopo la pulizia e la ricolonizzazione biofilm residua (RT). biofilm residui sono stati analizzati attraverso la quantificazione delle cellule vitali (CFU /ml), e l'architettura biofilm è stata valutata da microscopio confocale a scansione laser (CLSM) e microscopia elettronica a scansione (SEM). trattamenti detergente protesi e periodi di valutazione sono stati considerati i fattori di studio. I dati sono stati analizzati utilizzando ANOVA a due vie e differenza significative di Tukey (HSD) di prova (α = 0,05).
Risultati
Subito dopo i trattamenti, le soluzioni di pulizia acido citrico protesi (CT5 e CT8) hanno ridotto il numero di cellule vitali rispetto al controllo (p & lt; 0.01). Tuttavia, dopo 48 ore, entrambi i gruppi CT (CT5 e CT8) hanno mostrato biofilm ricolonizzazione (p & lt; 0,01). Residua biofilm ricolonizzazione è stato rilevato anche da CLSM e l'analisi SEM, che ha rivelato una biomassa superiore e spessore medio di biofilm per il gruppo CT8 (p & lt; 0,01).
Conclusione
citrico detergenti protesi acido in grado di ridurre C. albicans
accumulo di biofilm e vitalità cellulare. Tuttavia, questo non ha impedito CT biofilm ricolonizzazione
Parole chiave albicans
biofilm protesi igiene protesi Detergenti Candida
Poli (metacrilato di metile) materiale supplementare elettronica
La versione online di questo articolo (doi:. 10. 1186 /1472-6831-14-77) contiene materiale supplementare, che è disponibile per gli utenti autorizzati.
Sfondo
Candida
spp. è uno dei principali organismi causativi di stomatite protesi indotta, che è principalmente dovuta alla sua capacità di aderire e formare biofilm su orale tessuti cavità e superfici dentiera, nonché per la sua resistenza agli agenti antifungini [1-4]. Questo biofilm cresce ampiamente su materiale in resina protesi in resina e la sua rimozione efficace è una sfida significativa con entrambi i metodi chimici e meccanici [2-5].
Molti detergenti protesi chimiche che contengono enzimi, ipoclorito di sodio, perossido di alcalina e soluzioni acide sono disponibili per l'uso con spazzolatura meccanica per rimuovere il biofilm residua attaccato alle superfici protesiche [5-8]. soluzioni per la pulizia della protesi hanno proprietà antimicrobiche, come dimostrato da numerosi studi [7-12]; Tuttavia, nessuno di questi metodi sembrano rimuovere efficacemente il biofilm e prevenire ricolonizzazione sulla superficie della protesi [6, 7].
Un altro tipo di protesi detergente contiene acido citrico ed è disponibile come una soluzione concentrata, che può essere usato quotidianamente ( diluizione 1: 5) o settimanale (diluizione 1: 8) dopo opportuna diluizione (come indicato dal produttore). Questo detergente agisce come un agente chemioterapico che può compromettere in modo efficace biofilm attraverso un meccanismo di sequestrare con gli ioni di calcio [13]. Questo meccanismo permette di acido citrico per rompere i ponti di calcio e successivamente interrompere la matrice biofilm, che può portare ad attività anti-biofilm [14, 15].
Soluzioni di acido citrico sono stati valutati per la loro capacità di decontaminare le superfici implantari [16], dimostrando una riduzione del numero di specie patogene. Anche se le soluzioni di acido citrico sono efficaci anche contro Streptococcus mutans
biofilm e biofilm derivano da molteplici specie che si sviluppano su superfici in titanio [16], non è ancora stato riportato l'effetto di detergenti acido citrico contro Candida
biofilm su superfici di protesi.
Sebbene l'uso continuo di detergenti di acido citrico per 3 mesi ha mostrato effetti avversi con maggiore rilascio di ioni di lega di Co-Cr [17, 18], senza effetti nocivi sono stati dimostrati con materiali protesi in generale [19]. Al contrario, altri detergenti per protesi, soprattutto quelli contenenti ipoclorito di sodio, potrebbero aumentare la rugosità superficiale, diminuire la durezza, e, infine, cambiare il colore di resine acriliche e fodere protesi [19-21]. Pertanto, detergenti di acido citrico potrebbe essere adatto per protesi rimovibili e apparecchi ortodontici e per la rimozione di biofilm e prevenire la loro ricolonizzazione.
Pertanto, considerando la scarsità di studi che hanno esaminato l'efficacia dei detergenti di acido citrico per la rimozione di biofilm da materiali per protesi, il presente studio valutato l'efficacia dei detergenti acido citrico su Candida albicans
biofilm ricolonizzazione di poli (metacrilato di metile) (PMMA).
Metodi
design sperimentale
Questo vitro
studio utilizzato un design randomizzato in cieco . C. albicans
biofilm sono stati sviluppati per 72 h su provini di resine PMMA (n = 168) e poi assegnati in modo casuale a 1 dei 3 trattamenti di pulizia (CTS): acqua depurata, utilizzati come controllo (CTC); Diluizione 1: 5 di acido citrico protesi detergente (CT5); o 1: 8 diluizione citrico detergente protesi acido (CT8). biofilm residui che aderiscono agli esemplari sono stati raccolti e quantificati in due punti temporali diversi: subito dopo la pulizia trattamenti (gruppo ICT) o 48 ore dopo la pulizia, quando residua biofilm ricolonizzazione (gruppo RT) si sarebbe verificato. biofilm residui sono stati analizzati determinando il numero di cellule vitali (CFU /ml). architettura biofilm è stata valutata mediante microscopio confocale a scansione laser (CLSM) e microscopia elettronica a scansione (SEM). I fattori di studio sono stati i trattamenti detergente protesi e periodi di valutazione (TIC o RT). Le variabili di risposta erano il numero di cellule vitali e l'architettura di C. albicans biofilm
residue. Uno schema del disegno sperimentale è illustrato nei supplementari file 1. esemplari
resina
provini a forma di disco (10 mm di diametro, spessore 2 mm, e 219,8 mm
2) zona di microonde-polimerizzato PMMA ( Onda Cryl; Artigos Odontológicos Clássico Ltd, San Paolo, Brasile) sono stati realizzati secondo le istruzioni del produttore. Dopo la polimerizzazione, i dischi sono stati immersi in acqua purificata a 37 ° C per 48 h per il rilascio di monomero residuo [22]. I campioni sono stati poi PMMA terra con una lucidatrice orizzontale (modello APL-4; Arotec, San Paolo, Brasile) e l'utilizzo di carte di ossido di alluminio progressivamente più fini (320-, 400- e 600-grana) di standardizzare rugosità superficiale a 0.34 ± 0.02 micron. Prima di sviluppare il biofilm, i dischi sono stati ultrasuoni puliti (Thornton T 740; Thornton-Inpec Eletrônica Ltda, Vinhedo, Brasile) con il 70% di alcol e sterilizzati acqua ultra-purificata (20 min) per rimuovere i contaminanti e manufatti dalla superficie [23] . L'assenza di contaminazione è stata confermata da immergendo un campione dei campioni in terreni di coltura sterile
I campioni sono stati assegnati in modo casuale a 1 dei 3 gruppi di trattamento, che sono stati ulteriormente suddivisi nei punti di tempo valutati:. Subito dopo il trattamento (TIC) e 48 ore dopo la pulizia e la ricolonizzazione biofilm residua (RT). Il numero di campioni in ogni gruppo (n = 12) è stato determinato con prove preliminari, che ha confermato la dimensione del campione ha prodotto una potenza adeguata (80%) per rilevare differenze statisticamente significative.
Formazione pellicola salivare su campioni
Prima di sviluppare i saggi biofilm, campioni PMMA pulite sono stati rivestiti con la saliva di imitare l'ambiente cavità orale. tutta la saliva umana è stato donato da un volontario sano, che ha fornito il consenso informato scritto. Il Comitato per la ricerca e l'etica di Piracicaba Dental School, Università Statale di Campinas, ha approvato questo studio. Il campione di saliva è stato raccolto alla stessa ora del giorno, per ogni esperimento, e il volume di raccolta è stato limitato a 50 ml per periodo di raccolta
tutta la saliva umana è stato raccolto dalla stimolazione masticatoria con pellicola flessibile (Parafilm M;. American Can Co , Neenah, WI). La saliva è stato chiarito per centrifugazione a 3.800 g
per 10 minuti a 4 ° C. Il supernatante è stato raccolto e sterilizzata per filtrazione (22 micron) per uso immediato. Per ogni disco, una pellicola salivare è formata sulla superficie dopo incubazione per 30 minuti, a 37 ° C e 75 rpm, in un agitatore orbitale
. Condizioni inoculo e crescita
un'ansa di coltura di lievito di C. albicans
(ATCC 90028) è stato riattivato e incubata per 24 ore a 37 ° C. Successivamente, le cellule sono state raccolte, sospesi in Yeast Nitrogen Base (YNB) brodo (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ) integrato con 100 mM di glucosio. densità cellulare era spettrofotometricamente (Spectronic 20; Bausch & amp; Lomb, Rochester, NY) standardizzato per una densità di 0,25 ottica a 520 ηm, che corrispondeva a 1 × 10 6 CFU /ml inoculo [24]
test biofilm.
PMMA dischi saliva rivestite sono stati collocati verticalmente in polistirolo piastre di coltura da 24 pozzetti. Successivamente, 2 ml di sospensione cellulare standardizzato (1 × 10 6 CFU /ml di C. albicans
in YNB integrato con glucosio 100 mm) è stato aggiunto a ciascun pozzetto. Biofilm è stata sviluppata a 37 ° C, e sotto 75 rpm in un agitatore orbitale per 72 h, per consentire biofilm maturazione. Il mezzo è stato cambiato ogni 24 ore. saggi di biofilm sono stati eseguiti in triplicato in 3 esperimenti indipendenti
. protocolli di trattamento
Dopo la crescita di biofilm per 72 ore, i campioni sono stati assegnati in modo casuale a 1 dei 3 TA durante la notte (8 ore). detergente acido citrico (CURADEN BDC 105, Curaprox, Svizzera) è stato diluito in acqua purificata, secondo le istruzioni del produttore, in 1: 5 e 1: 8 soluzioni, che sono raccomandati per l'uso settimanale o giornaliera, rispettivamente. Ogni campione è stato posto in un beaker sterile contenente 8 ml di soluzione di trattamento.
Seguenti trattamenti detergente (8 ore), i campioni sono stati rimossi e lavati due volte in 2 ml di PBS sterile (PBS) soluzione (pH 7.4) . I biofilm residui che aderiscono alle esemplari sono stati subito raccolti (ICT) o permesso di crescere nelle stesse condizioni per 48 ore (gruppo RT) [10].
Quantificazione di cellule vitali da biofilm residuo
biofilm residui sono stati interrotti e rispettati microrganismi sono stati rimossi da campioni mediante ultrasuoni (7 W per 30 s). Le soluzioni sonicato sono stati diluiti in PBS e placcato (20 mL) in triplice copia su Sabouraud destrosio agar. Le piastre sono state incubate a 37 ° C in condizioni aerobiche per 48 h. CFU sono stati contati utilizzando uno stereomicroscopio, ed i risultati sono espressi in unità formanti colonia per ml (CFU /ml)
analisi architettura biofilm:. SEM
campioni con biofilm annessi sono stati sciacquati con PBS sterile e posto in 1% tetrossido di osmio per 1 ora. I campioni sono stati successivamente lavati in acqua purificata, disidratati in una serie di lavaggi etanolo (70% per 10 min, 95% per 10 minuti, e 100% per 20 min) e aria essiccati in un essiccatore prima del rivestimento a polverizzazione oro [24, 25]. Successivamente, i campioni sono stati montati su mozzi alluminio e rivestiti con oro. Le caratteristiche della superficie di biofilm sono stati visualizzati con SEM (JSM 5600LV, JEOL, Tokyo, Giappone) a 1.500 × in una modalità ad alta vuoto a 15 kV
biofilm analisi architettura:. CLSM
biofilm formati su superfici in PMMA sono state colorate con il kit live /Morto BacLight Viabilità, che comprende SYTO-9 e ioduro di propidio (PI). Prima degli esami CLSM, campioni sono stati protetti dalla luce e incubate a 37 ° C per 20 min [24, 25]. Immagini di biofilm macchiati sono stati catturati utilizzando un sistema CLSM (LEICA - TCS SP5, Leica Microsystems, Wetzlar, Germania). Una serie di immagini sono stati ottenuti a intervalli di 1 micron nella sezione z per una vista tridimensionale del biofilm. Almeno, cinque campi ottici rappresentativi sono stati esaminati per ogni campione.
Software COMSTAT è stato utilizzato per analizzare le immagini CLSM. Le proprietà di architettura di biofilm analizzati dal COMSTAT incluso il Biovolume (micron 3 /micron 2), spessore medio (micron), e coefficiente di scabrezza.
Analisi statistica
dati sono stati analizzati utilizzando il software statistico ( SAS v 9.0;. SAS Institute, Inc, Cary, NC), con un livello di significatività fissato al 5%. Le ipotesi di uguaglianza delle varianze e normale distribuzione degli errori sono stati valutati per ogni variabile. Quando la normalità è stato violato, i dati sono stati trasformati in modo logaritmico. I fattori che interferiscono nelle variabili di risposta (C. albicans
cellule vitali, CFU /ml), bio-Volume (μm3 /μm2), spessore medio (micron) e coefficiente di scabrezza) sono stati analizzati con ANOVA a due vie (tipo e valutazione periodo). i confronti post-hoc sono state eseguite utilizzando Onestamente differenza significativa di Tukey prova (HSD).
Risultati
Le due vie comparazioni ANOVA hanno mostrato che entrambi i fattori di studio "trattamenti" (CTC, CT5, e CT8) e "periodi di valutazione" (ICT e RT) colpiti la quantificazione di cellule vitali (p & lt; 0,01); ma non sono state riscontrate interazioni statistiche. Tuttavia, per i parametri di architettura biofilm (bio-volumi, spessore medio, e rugosità), le due vie ANOVA confronti hanno mostrato una significativa interazione statistica (p & lt; 0,001). Tra i fattori oggetto di studio
L'uso di detergenti acido citrico ci sono risultati che conta di cellule vitali subito dopo i trattamenti per entrambi i gruppi sperimentali (CT5 e CT8) (p & lt; 0,01), come mostrato nella Tabella 1. Tuttavia, 48 ore dopo i trattamenti, C. albicans
una conta sono stati rilevati nel quantificazione delle cellule vitali, a dimostrazione che i biofilm residue potrebbero ricolonizzare i campioni di superficie PMMA. Anche se l'acido citrico CTS non erano efficaci entro 48 ore (p & lt; 0,01), queste soluzioni di pulizia hanno mostrato minor numero di conteggi CFU se confrontato con il gruppo di controllo (p & lt; 0,01), sia a tempo di valutazione points.Table 1 C. albicans praticabile quantificazione delle cellule (media ± SD) in base a diversi trattamenti e periodo di valutazione
conteggio delle cellule vitali (106 CFU /ml)
pulizia trattamento
periodi di valutazione
Subito dopo i trattamenti (TIC)
ammessi a ricolonizzare (RT)
CTC - H2O
1.01 ± 8.59Aa
11.1 ± 12.30Ba
CT5 - 1: 5
0AB
1.92 ± 3.64Bb
CT8 - 1 : 8
0AB
3.63 ± 4.12Bb
diverse lettere maiuscole indicano differenze statisticamente significative (p & lt; 0,01) tra i periodi di valutazione [Immediatamente trattati (ICT ) e ha permesso di ricolonizzare (RT)]. lettere minuscole distinti indicano differenze statisticamente significative (p & lt; 0,01). tra i trattamenti (CTC, CT5, e CT8) Architettura analisi
Biofilm sono presentati nella tabella sono stati rilevati 2. differenze statisticamente significative per i periodi di valutazione (p & lt; 0,01) e per i trattamenti detergente protesi (p & lt; 0,05). Subito dopo trattamenti (ICT), biofilm trattati con CT5 erano più colpiti rispetto a quelli trattati con CT8 ed i gruppi di controllo, che mostra un bio-basso volume e spessore medio di quelli per gli altri gruppi (p & lt; 0,05). Inoltre, il gruppo CT8 ha mostrato un coefficiente di scabrezza alto, indicando il biofilm era meno compattato (p & lt; 0,05). Dopo il periodo di ricolonizzazione (RT), biofilm trattati con soluzione di pulizia quotidiana (CT8) ha mostrato un aumento del bio-volume e in spessore medio rispetto a quelli per la diluizione 1: 5 (CT5) e di controllo (acqua) trattamenti (p & lt ; 0,05) .Anche se non vi erano differenze statistiche nella architettura del biofilm trattati con acqua o CT5 (p & gt; 0,05), sono stati rilevati differenze di biofilm visualizzati da SEM e CLSM tra i gruppi (figure 1 e 2). Mentre le cifre indicano, biofilm dei gruppi di controllo e di acido citrico hanno mostrato diversi livelli metabolici dopo ogni TA sia per la valutazione periods.Figure 1 presenta immagini rappresentative SEM di biofilm trattati con acqua purificata, CT5, e CT8 al ICT e periodi di valutazione RT. Per quanto riguarda il trattamento di controllo (acqua purificata), non sono stati rilevati cambiamenti nella struttura di biofilm. Ife sono stati osservati dopo trattamenti di acido citrico (Figura 1B e C). Abbiamo osservato una drastica riduzione del numero di cellule per il gruppo CT8 immediatamente dopo trattamenti (Figura 1C). Inoltre, abbiamo osservato una lieve riduzione del numero di cellule per CT5 in entrambi i punti temporali (Figura 1B ed E), rispetto al controllo. Biofilm sono stati identificati per tutte le dopo il periodo ricolonizzazione (Figura 1D, E e F) e più grande numero di cellule sono stati osservati per il gruppo CT8 a RT (Figura 1F) .table 2 Bio-disponibilità (micron 3 /um 2), media spessore (micron), e il coefficiente di rugosità (media ± SD) di C. albicans biofilm secondo i diversi trattamenti e periodo di valutazione
Bio-volumi
spessore medio
coefficiente di rugosità
Trattamenti
periodi di valutazione
periodi di valutazione
valutazione periods
ICT
RT
ICT
RT
ICT
RT
CTC
10.77 ± 1.5aa
1.30 ± 1.2Ba
12,25 ± 2.1Aa
1.53 ± 1.4Ba
0,11 ± 0.1Aa
1.41 ± 0.4Ba
CT5
12.61 ± 3.1Aa
1.14 ± 0.6Ba
11.97 ± 3.1Aa
1.04 ± 0.6Ba
0,21 ± 0.2Aa
1.73 ± 0.1Ba
CT8
3.87 ± 2.8Ab
9.71 ± 2.7Bb
4,88 ± 3.7Ab
11.69 ± 3.3Bb
1.17 ± 0.3Ab
0.30 ± 0.2Bb
diverse lettere maiuscole indicano differenze statisticamente significative (p & lt; 0,01) tra i periodi di valutazione all'interno di trattamenti [trattata immediatamente (TIC); e ha permesso di ricolonizzare (RT)]. lettere minuscole distinti indicano differenze statisticamente significative (p & lt; 0,05). tra i trattamenti (CTC, CT5, e CT8) all'interno di periodi di valutazione
figura 1 Rappresentante microscopia elettronica a scansione (SEM) immagini (1500 ×) di C. albicans biofilm in base a diversi trattamenti e periodi di valutazione: a, gruppo CTC (TIC); B, gruppo CT5 (TIC); C, gruppo CT8 (TIC); D, gruppo CTC (RT); E, gruppo CT5 (RT); F, gruppo CT8 (RT). Si noti la ifale (frecce) formazione subito dopo entrambi i trattamenti soluzione di acido citrico nelle TIC e la ricolonizzazione dopo 48 h (RT).
Figura 2 rappresentante microscopio confocale a scansione laser (CLSM) di C. albicans biofilm secondo i diversi trattamenti e valutazione periodi nei trattamenti e periodi valutati: a, gruppo CTC (TIC); B, gruppo CT5 (TIC); C, gruppo CT8 (TIC); D, gruppo CTC (RT); E, gruppo CT5 (RT); F, gruppo CT8 (RT). Barre rappresentano il 12,5 micron. Nota bassa densità cellulare in ICT, per entrambi i gruppi CT5 e CT8 (B e C), in confronto al controllo (A). Nota la densità cellulare inferiore per il gruppo CT5 rispetto al gruppo CT8 in RT. Lieve riduzione della densità delle cellule per il gruppo di controllo può essere dovuto ad un eccesso di biofilm di maturazione.
Discussione
Nel presente studio, abbiamo valutato l'efficacia di acido citrico protesi detergente per rimuovere o uccidere il C. albicans
biofilm formato sulla superficie dei campioni PMMA. Un effetto a lungo termine di altre soluzioni detergenti protesi è stata dimostrata in studi precedenti [7, 9], che comprendeva anche la valutazione della soluzione (ipoclorito di sodio) gold standard. Nel presente studio, solo acqua purificata è stato usato come controllo. Considerando che è ben noto che l'ipoclorito di sodio è efficace contro Candida
biofilm, il nostro studio prova a mostrare eventuali differenze, tra l'acido citrico protesi detergente e l'assenza di trattamento chimico. Il presente studio ha mostrato che il trattamento con acido citrico è stato più efficace rispetto all'assenza di trattamento; tuttavia il confronto con una soluzione standard di riferimento rimangono da testare.
L'acido citrico protesi detergente utilizzato nel presente studio era una miscela di acqua ultra-purificata e acido citrico in atossico, acqua soluzione chimica solubile, bassa viscosità, che può rompere i ponti di calcio ioni di litio che fungono da legame chimico siti che collegano le catene polimeriche EPS [13]. Sulla base della letteratura, acido citrico è l'agente chemioterapico con il più alto potenziale per la rimozione di biofilm da superfici contaminate titanio in vitro
, anche se non ha raggiunto la completa rimozione [14, 16].
Nel presente studio, abbiamo osservato un fenomeno biofilm ricolonizzazione in entrambi i gruppi sperimentali quando i campioni puliti sono stati mantenuti per 48 ore più in un terreno di coltura addizionato con glucosio. Pertanto, abbiamo scoperto che l'acido citrico interrotto i biofilm, ma non del tutto rimuoverle. Questo risultato porta a supporre che tale protesi detergente può essere un metodo efficace per la rimozione complementare biofilm volta permette detriti per essere più facilmente rimosso dalla superficie della protesi. Pertanto, si prevede che l'acido citrico presenta un effetto più coerente rimozione biofilm quando associato con un metodo meccanico, come ad esempio spazzolatura, per rimuovere completamente il biofilm maturo dal dentiere [14, 16, 26].
Sebbene il numero di cellule vitali è stato nullo immediatamente dopo trattamenti sia con detergenti acido citrico, va notato che il numero di cellule vitali identificati mediante saggio CFU ha una bassa sensibilità quando un piccolo numero di cellule sono vitali. Nel tentativo di spiegare questi risultati, abbiamo utilizzato CLSM come metodo ausiliario per il saggio CFU analizzando biofilm con le loro strutture tridimensionali conservate, che mostravano anche redditività. Pertanto, la presenza di biofilm residuo è stato confermato da SEM e analisi CLSM, ed era possibile osservare cellule vitali ricordano e strutture biofilm in ICT. Questi biofilm residue contribuito ad emergere ricolonizzazione dopo 48 h, come è stato osservato in RT
Il presente studio ha valutato l'1:. 5 e 1: 8 diluizioni di acido citrico detergente acido per simulare l'uso settimanale e giornaliera. Queste soluzioni probabilmente non hanno influito completamente gli strati basali dei biofilm. Questo fenomeno può essere dovuto alla presenza di una matrice extracellulare, che proteggeva il biofilm dal detergente, e le cellule che ricordano in quiescenza metabolica, che rappresentano la ricolonizzazione dopo 48 ore [1, 27]. . Pertanto, una singola esposizione ad acido citrico protesi detergente non è in grado di rimuovere Candida
biofilm, o prevenire il loro ricolonizzazione
Confrontando i risultati di quantificazione delle cellule vitali e l'analisi dell'architettura biofilm, abbiamo scoperto che i trattamenti con 1: 5 e 1: 8 diluizioni delle soluzioni di acido citrico potrebbe avere un effetto ritardato sulle cellule biofilm. Anche se molte cellule vitali sono stati visti nelle immagini CLSM, questi non sono stati rilevati dalla valutazione di cellule vitali. Ciò può essere spiegato dal fenomeno noto come effetto post-antifungini (PAFE), in cui le sostanze memorizzati all'interno vacuoli possono uccidere le cellule nel corso del tempo [4].
Secondo PAFE, l'assorbimento di acido citrico da parte delle cellule di Candida
durante i trattamenti contribuito all'assenza di CFU nella valutazione di cellule vitali, nonché la riduzione della densità delle cellule per i 1: 5 e 1: 8 gruppi, rispetto al controllo. Per quanto riguarda i biofilm visualizzate in RT, una biomassa maggiore è stata osservata per il gruppo CT8 rispetto al gruppo CT5. Questa differenza può essere correlato a differenze di danni provocati dai due detergenti a RT, il che significa che il trattamento CT8 permesso maggiore ricolonizzazione biofilm al periodo di valutazione RT.
Secondo il PAFE e dei risultati ottenuti con le immagini CLSM, biofilm trattati in il 1: gruppo 5 ha mostrato danni maggiori rispetto a quelli del 1: gruppo 8. strati basali dei biofilm trattati con la diluizione 1: 5 sembravano mostrare una maggiore risposta alle ICT. Questo perché il trattamento 1.5 diluizione determinato un biofilm bio-basso volume e spessore medio a RT. Inoltre, il 1: trattamento di diluizione 8 non ha influenzato profondamente biofilm, consentendo loro ampiamente ricolonizzazione dopo 48 ore
I risultati di questo studio dimostrano che l'acido citrico protesi detergente è efficace nel ridurre la C. albicans
vitalità cellulare in. un biofilm maturo, subito dopo i trattamenti. Tuttavia, questa soluzione detergente non rimuove completamente il biofilm e non impedisce la sua ricolonizzazione dopo 48 h. Pertanto, questo studio presenta importanti risultati per quanto riguarda l'effetto anti-biofilm di citrico detergente protesi acido.
I risultati di questo studio dovrebbero essere interpretati con cautela a causa della natura in vitro
delle 72 h formato biofilm non pienamente corrispondere l'ambiente della cavità orale. Inoltre, durante le prime 72 ore di formazione di biofilm iniziale, utilizzati per simulare un biofilm maturo, ci sarebbero diverse successioni microbici nel tempo, che potrebbe essere un po 'una limitazione del presente studio. Tuttavia, i risultati forniscono dati importanti su come i C. albicans biofilm
comporta con quotidiani e settimanali trattamenti con acido citrico protesi detergente utilizzati nella pratica clinica. Sono necessari ulteriori studi con altri Candida
specie in un singolo o mista biofilm, che sono sempre più implicati nelle protesi stomatite a lungo termine. Inoltre, questi biofilm devono essere utilizzati per confronti tra l'efficacia a lungo termine di tali trattamenti con acido citrico ed una soluzione gold standard (ipoclorito di sodio), che potrebbero beneficiare gli approcci di trattamento clinico.
Conclusione
nei limiti questo studio, abbiamo trovato che l'acido citrico detergenti protesi riducono la vitalità delle cellule, ma non hanno impedito biofilm ricolonizzazione entro 48 h.
Dichiarazioni
Ringraziamenti
Gli autori ringraziano Stato di San Paolo ricerca a sostegno della Fondazione (Fundação de Amparo un Pesquisa fare Estado de São Paulo) per le borse di studio per YWC e MMB (elabora 12 /07.436-6 e 12 /21.011-8)
materiale supplementare elettronica
12903_2014_404_MOESM1_ESM.pdf sui file. 1: Schema del disegno sperimentale eseguita in questo studio. (PDF 727 KB) degli autori fascicoli presentati originali per
di seguito sono riportati i link ai degli autori fascicoli presentati originali per immagini. 'file originale per la figura 1 12903_2014_404_MOESM3_ESM.tif Autori 12903_2014_404_MOESM2_ESM.tif autori file originale per la figura 2 interessi in competizione
Gli autori dichiarano di non avere interessi in gioco.
contributi degli autori
FF, LRP, WJS, e AADBC concepito e progettato lo studio. FF, LRP, e WJS raccolti i dati. YWC e MMB interpretati e analizzati i dati. FF, YWC, MMB, e LRP redatto il manoscritto. WJS e AADBC eseguito la revisione finale del manoscritto. Tutti gli autori hanno letto e approvato la versione finale di questo manoscritto.
