Abstract
sfondo
Candida albicans è un lievito
diploide che in alcune circostanze può causare infezioni orali o orofaringeo. Questa indagine mirava a studiare la prevalenza di Candida
spp. e di analizzare i genotipi ABC di 76 isolati clinici di C. albicans
ottenuto dalla cavità orale dei pazienti sottoposti a trapianto di rene da due regioni geografiche distinte del Brasile.
Metodi
abbiamo digitato 48 ceppi con ABC genotipizzazione e Microsatelitte utilizzando Primer M13 e testati tre fattori di virulenza in vitro:. attività fosfolipasi, la morfogenesi e la capacità di evadere dai neutrofili polimorfonucleati fagocitosi
Risultati
C. albicans
era la specie più diffuse (86,4%), seguita da C. tropicalis
(4,5%). C. albicans
genotipo A è stato il più diffuso (58 isolati; 76,4%), seguita da genotipo C (15 isolati; 19,7%) e il genotipo B (3 isolati; 3,9%). Quando è stata applicata la tecnica dei microsatelliti con primer M13, l'80% degli isolati del sud sono stati collocati all'interno dello stesso cluster. La maggior parte dei ceppi di genotipo C sono stati raggruppati in due gruppi differenti. Il genotipo C è stato
considerato più resistente agli attacchi PMN di genotipi A e B. ceppi isolati dal Sud del Brasile hanno mostrato anche una migliore capacità di combattere PMN fagocitosi. Conclusioni
Abbiamo trovato un alto tasso di C. albicans
genotipo C ceppi isolati dalla cavità orale di questo gruppo di pazienti. Questo studio caratterizzato orali C. albicans
ceppi isolati da pazienti sottoposti a trapianto di rene e contribuiranno ad una migliore comprensione della patogenesi della candidosi orale.
Fattori Parole chiave
Candida spp
Orale candidosi rene trapiantati di genotipizzazione di virulenza materiale elettronico supplementare
la versione online di questo articolo (doi:. 10 1186 /1472-6831-14-20) contiene materiale supplementare, che è disponibile per gli utenti autorizzati
Sfondo
Nonostante il fatto. che Candida
spp. appartengono alla normale microbiota orale, che vivono sulla lingua, gengive, palato e la saliva di individui sani come i lieviti commensali, possono causare infezioni orali o orofaringei [1, 2]. Candida
spp. sono stati isolati dal 40 al 60% di bocche sane, mentre la candidosi orale è più comune nelle persone immunodeficienti, quelli con malattie di base gravi, e portatori di protesi superiori [3, 4].
Nonostante il fatto che altri meno virulenta Candida
specie come C. glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei e C.
dubliniensis
sono stati anche isolati dalla saliva di pazienti con o senza candidosi orale, C. albicans
è ancora la specie più frequenti associati alle lesioni orali [5].
Diversi fattori possono contribuire alla transizione dalla lieviti commensali a forme patogeni che sono collegati al sistema immunitario dell'ospite alterato associato con la virulenza del microrganismo. I principali fattori di virulenza di C. albicans
includono gemma to-ife transizione (chiamato anche morfogenesi), adesione epiteliale umano e cellule endoteliali, la formazione di biofilm, la capacità di secernere enzimi idrolitici (principalmente proteinasi e fosfolipasi), commutazione fenotipica (transizione bianco-opaco), così come l'evasione delle cellule del sistema immunitario ospite [6, 7].
Alcuni studi hanno valutato C. albicans
genotipi ABC isolate dalla cavità orale di diversi individui ed i risultati sembrano essere molto variabile secondo la popolazione valutata. Per esempio, uno studio con 11 pazienti diabetici con parodontite ha rivelato che il 51,6% subgengivali C. albicans
di isolare appartenevano al genotipo B [8], il genotipo mentre altra indagine ha trovato A come predominante [9]. La prevalenza di
candidosi orale in pazienti sottoposti a trapianto renale descritte nelle gamme letteratura dal 9,4% al 46,7% [10-12]. Uno studio condotto in Messico da De La Rosa-Garcia et al [11], riporta il 18,7% dei casi di candidosi orale in un totale di destinatari trapiantati 90 renali.
Il nostro gruppo ha già pubblicato un confronto tra alcuni fattori di virulenza (biofilm la produzione, l'adesione alle cellule epiteliali buccali umane e attività proteinasi) tra C. albicans
e non C. Candida albicans
isolati ottenuti dalla cavità orale di pazienti sottoposti a trapianto di rene da Natal, Rio Grande do Norte, Brasile [13]. Questo studio è un follow-up di questa pubblicazione precedente compresi gli altri ceppi appartenenti ad un'altra regione geografica del Brasile. Inoltre, altri attributi di virulenza sono stati studiati. Pertanto, gli obiettivi di questo studio erano di determinare Candida
distribuzione delle specie e genotipicamente caratterizzare 48 C. albicans
ceppi isolati dalla cavità orale di 154 destinatari rene trapiantato da due diverse regioni geografiche del Brasile (Nord-Est e del Sud ). Inoltre, i ceppi sono stati caratterizzati fenotipicamente per la capacità di esprimere i seguenti fattori di virulenza in vitro. La secrezione di fosfolipasi, la transizione da cellule di lievito di ife (morfogenesi) e la capacità di resistere alla fagocitosi da parte dei neutrofili polimorfonucleati
Metodi
Ceppi selezione
Nel corso di un periodo di 3 mesi-, 154 pazienti provenienti da due diverse aree geografiche del Brasile (111 da Natal, Rio Grande do Norte e 43 da Maringa, Paranà) sono stati sottoposti ad esame clinico del cavo orale per diagnosi candidosi, secondo i criteri stabiliti per lesioni del cavo orale in pazienti affetti da HIV raccomandati dalla CE-Clearinghouse e classificazioni Organizzazione mondiale della sanità [14]. Solo i pazienti che hanno accettato di partecipare a un sistema di sorveglianza di studio riservate, in accordo con la commissione Etica della ricerca locale dall'ospedale Onofre Lopes Università, approvato con il numero 152/07, sono stati arruolati in questo studio. I ceppi isolati da colonizzazione orale (senza sintomi) o durante gli episodi di candidosi orale sono stati valutati in questo studio. Per gli studi di genotipizzazione e virulenza, abbiamo selezionato in modo casuale 48 ceppi clinici di C. albicans
(38 da Natal, Rio Grande do Norte e 10 da Maringa, Paranà). Tutti gli isolati sono descritti in Tabella 1. I campioni sono stati stoccati in YPD glicerolo (10 g /L di estratto di lievito, 20 g /L peptone, 20 g /L di destrosio e 3% glicerolo) a -80 ° C al Laboratório de Micologia Médica e molecolare, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Brasile. C. albicans
ATCC90028 e SC5314 sono stati inclusi in questo studio come riferimento strains.Table 1 I dati demografici dei pazienti sottoposti a trapianto di rene da Natal, RN e Maringa, PR, Brasile, secondo il sesso, l'età e la malattia sottostante
Variabili
Natal (n,%)
Maringa (n,%)
totale (n,%)
Sex
Maschio
64 (73,6)
23 (26,4)
87 (100)
femminile
47 (70,1)
20 (29,9)
67 (100)
Età
12-18 anni
6 (85,7)
1 (14.3)
7 (100)
19-34 anni
44 (81,5)
10 (18,5)
54 (100)
35-64 anni
59 (64,8)
32 (35,5)
91 (100)
65 anni o più
2 (100)
0 (0)
2 (100)
sottostante malattia
nefropatia diabetica
8 (66,7)
4 (33,3)
12 (100)
ipertensione arteriosa
47 (85,4)
8 (14,6)
55 (100)
glomerulonefrite
23 (76,7)
7 (23.3)
30 (100)
malattie del rene policistico
6 (66,7)
3 (33,3)
9 (100)
Altro
27 (56.25)
21 (43.75)
48 (100)
campioni raccolta e lieviti identificazione
campioni contenenti 2 ml di saliva sono stati raccolti da tutti i pazienti, dalla stimolazione precedente, con gomme da masticare. Quando le lesioni erano presenti, un tampone sterile è stato strofinato sulla superficie della mucosa della cavità orale. Successivamente, 100 microlitri di cellule sospensioni sono state inoculate sulla superficie di Sabouraud Dextrose Agar (SDA, Oxoid, UK) aggiunti 300 mg /ml di cloramfenicolo (Park-Davis), utilizzando un ciclo Drigalsky. Le piastre sono state incubate a 37 ° C per 48 h. colonie di lievito sono stati piastrati su CHROMagar Candida® (CHROMagar Microbiologia, Parigi, Francia) per verificare la purezza e lo screening per le diverse colonie di colore. identificazione di specie era basata sulle caratteristiche delle cellule osservate al microscopio dopo coltura su agar cornmeal aggiunto Tween 80, così come l'assimilazione e test fermentazione e ID32C System (bioMérieux Marcy l'Etoile, France), qualora fosse necessario [15]. I ceppi appartenenti alla Candida parapsilosis
specie complesse sono state identificate in precedenza con metodi molecolari [13].
C. albicans
estrazione del DNA
C. albicans
cellule sono state coltivate durante la notte in YPD mezzo liquido ( destrosio 20 g /L, peptone 20 g /L, estratto di lievito 10 g /L) incubato a 30 ° C ruotare a 200 rpm in un shaker rotatorio (TE-420, Tecnal ® Piracicaba, Brasile). DNA è stato estratto utilizzando la preparazione del reagente PrepMan Ultra campione (Applied Biosystems, Foster City, CA) secondo le istruzioni del produttore. concentrazione di DNA genomico e purezza sono state controllate con uno strumento NanoDrop (Thermo Scientific; Amersham Pharmacia Biotech, Wilmington, DE, USA).
microsatelliti digitando PCR e genotipizzazione ABC
microsatelliti tipizzazione è stata effettuata utilizzando il primer M13 (5 'GAGGGTGGCGGTTCT --3 ') (IDT) come precedentemente descritto [16]. ABC genotipica è stata effettuata con i seguenti primers: CAINT- L (5'-ATAAGGGAAGTCGGCAAAATAGATCCGTAA-3 ') e CA-INT-R (5'-CCTTGGCTGTGGTTTCGCTAGATAGTAGAT-3') [17]. Brevemente, 1,0 ml di DNA 40 ng /ml è stato aggiunto al 29 PCR Master Mix (Promega) per un volume finale di 25 microlitri. I campioni sono stati amplificati in un termociclatore (Amplitherm TX96, USA) utilizzando i seguenti parametri bicicletta: un ciclo iniziale di 94 ° C per 3 min seguita da 30 cicli di 1 minuto a 94 ° C, 1 min a 57 ° C, 1 min a 72 ° C e un ciclo finale di 5 min a 72 ° C. Per microsatellite battitura, 1,0 ml di DNA 40 ng /ml, 2,5 ml di 10 × tampone PCR (100 mM Tris-HCl, pH 8.3, 500 mM KCl, 3,5 mm MgCl
2), 5 ml di dNTPmix (100 mM ciascun dNTP), 1,0 ml di ciascun primer (50 pmol /mL), 0,13 ml di tween 20 e 1,0 unità di Taq DNA polimerasi sono state aggiunte ad un volume finale di 25 microlitri. Quarantacinque cicli di amplificazione sono state eseguite utilizzando gli stessi parametri ciclismo descritti in precedenza, tranne che la temperatura di ricottura era 36 ° C per la tipizzazione microsatellite. I prodotti di PCR sono stati size-separati mediante elettroforesi su gel di agarosio, e il gel è stato colorato in 0,5 mg /ml di bromuro di etidio soluzione tampone (TAE).
Analisi dei dati microsatelliti assistita da computer
immagini gel sono stati analizzati con il GelCompar II software, versione 4.5 e BioNumerics (Applied Maths, Kortrijk, Belgio). Le somiglianze tra i profili sono stati calcolati utilizzando il coefficiente di dadi per generare le matrici di coefficienti di somiglianza con dendrogram costruzioni. Per il profilo di clustering, il metodo non ponderata coppia di gruppo con le medie aritmetiche è stato utilizzato con una tolleranza del 2%.
I test per la formazione ife
un importo iniziale di 10 6 cellule /ml in YPD + 20% FBS (siero fetale bovino, Sigma-Aldrich®, Brasile) è stata incubata a 37 ° C, con gyratory agitazione a 200 rpm. Dopo 3 h di incubazione, i campioni delle colture sono stati mescolati con un volume uguale di formaldeide al 10% per arrestare l'ulteriore sviluppo e l'indice medio morfologia (MI) è stata determinata [18]. Valori vicini a 1 indicano una popolazione di cellule di lievito sferoidali e valori prossimi al 4 indicano una popolazione di cellule ifali veri, con valori compresi tra 1 e 4 indicano morfologie misti o pseudohyphal.
Fosfolipasi saggio
attività fosfolipasi è stato stimato dalla metodo di tuorlo d'uovo agar [19], con inoculi preparati da una notte NGY (Neopeptone (Difco, Detroit, MI) 1 g /l, il glucosio 4 g /L ed estratto di lievito 1 g /L) culture standardizzato al 2 × 10 5 cellule /ml.
Candida albicans
uccidere da polimorfonucleati neutrofili PMN
appena isolati da campioni di sangue di un singolo volontario sano, il giorno dell'esperimento [20] sono stati sospesi in mezzo essenziale minimo di Eagle (Gibco) + 20 mM HEPES, pH 7.2, e standardizzato 8 × 10 5 PMN /mL. C. albicans
cellule coltivate durante la notte in NGY lavate e risospese a 5 × 10 6 lieviti /ml in HEPES-buffered mezzo essenziale minimo dell'aquila contenente volume di un decimo di plasma umano fresco. Volumi uguali di PMN e lievito sospensioni sono stati miscelati e incubati a 37 ° C per 3 h con rotazione a 50 rpm. La fagocitosi di C. albicans
sono state stabilite contando in triplice copia il numero di lieviti all'interno o collegati in 100 PMN [21].
Analisi statistica
dati sono stati analizzati utilizzando il software statistico "GraphPad", versione 3.0 . I risultati sono stati presentati come media ± deviazione standard, e le differenze sono stati analizzati con il test di Mann-Whitney. Per tutte le analisi, P è stato considerato un valore di default di 0.05 e l'intervallo di confidenza del 95%.
Risultati
pazienti i dati clinici e demografici dati demografici
del paziente sono riassunti nella tabella 1. Per entrambe le regioni, la maggior parte dei pazienti ha avuto ipertensione arteriosa, come la malattia di base più frequente. Inoltre, la classe di età più frequente è 35 ei 64 anni (Tabella 1).
Microbiologia profiling di Candida
spp. a Orale candidosi
Dai ceppi ottenuti da Natal, RN (nord-est), è stato possibile isolare i lieviti da 70 di 111 pazienti (63,1%), mentre da Maringa, 12 su 43 (27,5%) Candida
colture positive spp sono stati ottenuti. Distribuzione delle specie per entrambe le regioni è descritto nella Tabella 2. C. albicans
è stata la specie più predominanti si trovano in entrambe le città, seguito da C. tropicalis
. In un solo paziente Maringa è stato possibile isolare tre ceppi appartenenti a diverse Candida
specie (C. albicans
, C. glabrata
, C. tropicalis
) .table 2 Specie distribuzione di Candida spp. isolata della cavità orale di trapianto di rene da due diverse regioni geografiche del Brasile: Natal, RN e Maringa, PR
Specie
Natal (n,%)
Maringá (n,% )
totale (n,%)
Candida albicans
59 (77,6)
17 (22,4)
76 (100)
Candida dubliniensis
2 (100)
0 (0)
2 (100 )
Candida glabrata
2 (66,7)
1 (33.3)
3 (100)
Candida tropicalis
3 (75)
1 (25)
4 (100)
Candida orthopsilosis
2 (100)
0 (0)
2 (100)
Candida metapsilosis
Pagina 2 (100)
0 (0)
2 (100)
totale
69 (78.4)
19 (21,6)
88 (100)
di nota, un solo campione da ciascun paziente è stato raccolto, ad eccezione di tre diversi pazienti provenienti dalla regione sud del Brasile. Da paziente 37, deformazione 06S è stato ottenuto dalla saliva, mentre ceppo 06 L da lesione orale. Il paziente 38 aveva due ceppi di C. albicans
raccolti dalla stessa lesione, che mostra due chiare fenotipi diversi (10S, liscio e 10R, con colonie grezzi). Paziente 40 ha due lesioni diverse e due ceppi sono stati ottenuti, uno dalla lingua e un'altra dalle gengive (15 T e 15G, rispettivamente) in aggiunta a un ceppo ottenuto dalla saliva (15S).
ABC tipizzazione di Candida albicans
DNA da tutti i 76 ceppi di C. albicans
ei ceppi di riferimento ATCC90028 e SC5314 è stata presentata alla ABC di battitura. Genotipo A era il più diffuso con 58 isolati (76,4%), seguiti da genotipo C, con 15 ceppi (19.27%) e il genotipo B, con 3 isolati (3,9%; Tabella 3). La stessa tendenza è stata osservata quando i ceppi ottenuti da ogni regione sono stati analizzati separatamente: Nel Nord-Est del Brasile, C. albicans
genotipo A è stata la più diffusa, con 42 isolati (71,2%), seguita da genotipo C (n = 14 isolati; 23,7%) e il genotipo B, con 3 ceppi (5.1%). La maggiore incidenza di genotipo A è stata trovata anche nel sud del paese con 16 isolati (94,1%), seguiti da genotipo C (n = 1 isolato; 5,9%). C. albicans
genotipo B non è stato osservato per gli isolati ottenuti da questa regione (tabella 3) .table 3 pazienti arruolati in questo studio, regione geografica ABC genotipizzazione e la virulenza attributi di Candida albicans
Isolare numero
condizione clinica
Procedence
ABC di battitura
attività fosfolipasi PZ (cm)
Morfologia Index (MI)
No di C. albicans cellule fagocitati da 100 PMN * (%)
1
Colonizzazione
Natal
B
0.6 ± 0,07
2.46 ± 0.70
134 ± 15,3
2
Colonizzazione
Natal
Un
0,55 ± 0,04
3,43 ± 0,77
115 ± 14,6
3
Colonizzazione
Natal
Un
0.48 ± 0.06
3.22 ± 0.64
66 ± 7.9
5
L'infezione
Natal
C
0.58 ± 0.02
2.23 ± 0.57
98 ± 6.7
Pagina 6
Colonizzazione
Natal
Un
0.53 ± 0.01
2.24 ± 0.51
100 ± 12.5
8
Colonizzazione
Natal
Un
0.57 ± 0.04 ± 1.86
0.43
130 ± 19
10
infezione
Natal
B
0,56 ± 0,12
2.17 ± 0.62
166 ± 8.4
11
Colonizzazione
Natal
C
0,58 ± 0,08
2,15 ± 0,77
28 ± 3,5
12
infezione
Natal
Un
0.54 ± 0.02
2.46 ± 0.56
150 ± 11,1
13
La colonizzazione
Natal
C
0,6 ± 0,03
2.17 ± 0.65
126 ± 31,6
17
Colonizzazione
Natal
Un
0.52 ± 0.03
3.63 ± 0.63
98 ± 20,2
20
Colonizzazione
Natal
Un
0,44 ± 0,01
2.85 ± 0.81
86 ± 21,2
21
Colonizzazione
Natal
Un
0,4 ± 0,06
2.78 ± 0.92
114 ± 21,5
23
Colonizzazione
Natal
C
0.53 ± 0.09
2.45 ± 0.67
101 ± 11,4
24
infezione
Natal
Un
0.51 ± 0.10
3.05 ± 0.74
132 ± 13,9
28
infezione
Natal
Un
0,55 ± 0,04
2,84 ± 0,80
165 ± 9.5
30
Colonizzazione
Natal
C
0.52 ± 0.04
2.17 ± 0.62
119 ± 20
31
Colonizzazione
Natal
Un
0.49 ± 0.03
2.64 ± 0.82
129 ± 15
32
Colonizzazione
Natal
Un
0.49 ± 0.12
2.81 ± 0.65
123 ± 13,2
34
Colonizzazione
Natal
Un
0.52 ± 0.07
2.36 ± 0.64
156 ± 16,5
37
Colonizzazione
Natal
B
0.57 ± 0.01
3,38 ± 0,80
124 ± 19,1
40
infezione
Natal
Un
0.51 ± 0.06
3.7 ± 0.56
142 ± 15,9
41
colonizzazione
Natal
Un
0.54 ± 0.03
2.7 ± 0.69
172 ± 21,1
44
infezione
Natal
Un
0.48 ± 0.03
2,8 ± 0,77
176 ± 11,6
46
Colonizzazione
Natal
Un
0.46 ± 0.04
2.81 ± 0.77
172 ± 20,1
50
Colonizzazione
Natal
Un
0.54 ± 0,04
3.24 ± 0.88
157 ± 36,6
51
Colonizzazione
Natal
Un
0.51 ± 0.02
2 ± 0,43
130 ± 19,5
53
Colonizzazione
Natal
C
0.53 ± 0.09
2.79 ± 0.71
132 ± 15,9
54
La colonizzazione
Natal
Un
0.47 ± 0.02
1.8 ± 0.40
132 ± 9.2
60
Colonizzazione
Natal
C
0.57 ± 0.03
2.15 ± 0.36
146 ± 9
61
Colonizzazione
Natal
Un
0.49 ± 0.01 ± 2.48
0.75
142 ± 9.2
70
Colonizzazione
Natal
C
0.51 ± 0.03
2.99 ± 0.50
140 ± 12,7
72
Colonizzazione
Natal
C
0.46 ± 0.04
2.31 ± 0.61
136 ± 9
82
Colonizzazione
Natal
C
0.55 ± 0.03
3.36 ± 0.93
130 ± 13,2
85
La colonizzazione
Natal
C
0,56 ± 0,04
3.15 ± 0.83
144 ± 9.5
107
Colonizzazione
Natal
C
0.57 ± 0.01
2.39 ± 0.63
156 ± 10,1
06A
Colonizzazione
Maringá
Un
0.5 ± 0.02
2.34 ± 0.71
80 ± 17,4
06 L
infezione
Maringá
Un
0.56 ± 0.07
2.94 ± 0.58
75 ± 8.7
10Li
Colonizzazione
Maringá
A
0.55 ± 0.01
2.42 ± 0.70
176 ± 6.1
10S
Colonizzazione
Maringá
A
0,64 ± 0,01
2,54 ± 0,76
105 ± 14,7
12A
Colonizzazione
Maringá
Un
0.49 ± 0.02
3,3 ± 0,79
59 ± 16,8
12 L
infezione
Maringá
Un
0.51 ± 0.05
3.2 ± 0.68
90 ± 13.2
15A
Colonizzazione
Maringá
Un
0.42 ± 0.02
2.96 ± 0.83
116 ± 27,1
15G
infezione
Maringá
Un
0.42 ± 0.03
3.13 ± 0.81
86 ± 21,9
15 L
infezione
Maringá
A
0,47 ± 0,08
2.58 ± 0.68
76 ± 16,5
18A
Colonizzazione
Maringá
C
0.56 ± 0.11
3.05 ± 0.67
102 ± 11,2
111 L
La colonizzazione
Natal
C
0.55 ± 0.03
2,6 ± 0,70
80 ± 17,4
111R
Colonizzazione
Natal
C
0,6 ± 0,15
4 ± 0.00
11 ± 3.2
ATCC90028
riferimento
Un
0,7 ± 0,08
3.82 ± 0.5
158 ± 17,5
SC5314
riferimento
Un
0.52 ± 0.04
3.28 ± 0.81
137 ± 20,6
Gli isolati sono stati ottenuti dalla cavità orale di pazienti sottoposti a trapianto di rene da Natal, RN e Maringa, PR, Brasile.
Candida albicans
tipizzazione microsatellite vs ABC genotipizzazione
Abbiamo selezionato in modo casuale 48 isolati di C. albicans
tra cui alcuni ceppi appartenenti al genotipo a (21 da Natal e 10 da Maringa) un tutti gli altri ceppi appartenenti a genotipi B e C da entrambe le regioni ed eseguiti genotipizzazione microsatelliti. Il DNA genomico di tutti i 48 isolati è stato amplificato con successo con il primer M13, che si rivolge genoma sequenze ripetitive. L'amplificazione del DNA ha generato modelli di fascia ben definiti, che vanno da 100 pb a 2 kb. La tecnica dei microsatelliti ha mostrato potere discriminatorio sufficiente per riconoscere la variazione intraspecifica (Figura 1). Come previsto, le tensioni di controllo esterni di C. albicans
, SC5314 e ATCC90028, sono stati collocati in completamente diversi cluster dall'analisi dendrogramma eseguito utilizzando GelCompar II, dimostrando l'efficienza della tecnica nel separare ceppi isolati da differenti aree geografiche. Questi ceppi di controllo mostravano 75% di somiglianza e sono stati messi insieme in un diverso gruppo di tutti gli altri isolati clinici (Figura 1). Figura 1 Metodo non ponderati coppia di gruppo con le medie aritmetiche Dendrogramma con il 2% di tolleranza di 50 ceppi di Candida albicans isolati clinici.
Non abbiamo potuto rilevare alcun particolare gruppo di una colonizzazione o di infettare ceppi. Inoltre, in entrambi i casi, ceppi con 100% di somiglianza ottenuti da pazienti differenti trovato. Per quanto riguarda i confronti di parentela genetica all'interno delle due diverse regioni geografiche del Brasile, abbiamo potuto osservare un cluster arricchito per Maringa (Sud), dove l'80% dei ceppi sono stati collocati insieme. Inoltre, essi variavano dal 80% fino al 93% di somiglianza tra loro.
Altro dato interessante è associato con un certo grado di correlazione osservata tra il tipo ABC di C. albicans Comprare e l'alta percentuale di somiglianza tra questi isolati quando è stato utilizzato microsatelliti fondo M13. Nella maggior parte dei casi, ceppi con percentuale identica di somiglianza determinata con primer M13, aveva anche la stessa A o C genotipo (tranne per i ceppi 02 e 85 da Natale nonché 15 T e 18A da Maringa, A e C genotipi sia casi). Inoltre, C. albicans
ceppi genotipo C da Natale venivano collocati all'interno di due gruppi separati ben definiti con elevata parentela dimostrato (oltre il 90% di somiglianza all'interno dello stesso cluster). In relazione al genotipo B, due dei tre ceppi ha mostrato una somiglianza del 94%, essendo posto nello stesso cluster (Figura 1).
Inoltre, quando diversi ceppi sono stati ottenuti da diversi campioni dello stesso paziente, tutti avevano lo stesso genotipo ABC (genotipo A). Tuttavia, microsatelliti utilizzando innesco M13 ha mostrato maggiore potenza discriminatorio, perché questi ceppi non sono stati considerati identici con l'ultima tecnica, mostrando un certo grado di variabilità genetica, quando è stato utilizzato questo metodo.
Virulenza attributi di Candida albicans
A, B e C genotipi
per tutti i fattori di virulenza testati, abbiamo effettuato solo l'analisi statistica per il confronto tra i ceppi appartenenti a genotipi a e C, a causa del basso numero di isolati appartenenti al genotipo B trovato. In relazione alla fosfolipasi produzione, tutti i ceppi erano in grado di produrre l'enzima, indipendentemente dal fatto che sono stati ottenuti da episodi di colonizzazione o infezione. Per genotipo A, una media Pz di 0,51 ± 0,04 è stato ottenuto, mentre per il genotipo C, una media di 0,55 ± 0,05, mentre per il genotipo B, Mean Pz era 0.57 ± 0.07. Nessuna differenza statistica sono stati trovati quando sono stati confrontati ceppi appartenenti a genotipi A e C (Tabella 3).
Quando l'indice morfologia (MI) è stato utilizzato per segnare cellule morfologia, non sono chiare differenze potrebbero essere osservate per i tre diversi A, B o genotipi C. La capacità dei ceppi di modificare la morfologia da cellule gemma di ife se coltivate in presenza di YPD + 20% FBS è stata verificata per i ceppi appartenenti alle tre genotipi cui. Le cellule sono state prevalentemente trovati come pseudoife, con una media che va da MI 2.66 ± 0.61 (genotipo C) a 2.77 ± 0.69 (genotipo A). La media MI isola del genotipo B era 2,67 ± 0,71. Nessuna differenza statistica è stata osservata tra gli isolati (Tabella 3).
Abbiamo anche studiato la capacità dei diversi ceppi di resistere alla fagocitosi da PMN. Pertanto, il numero di C. albicans
cellule fagocitati da 100 PMN è stata determinata dopo tre ore di co-incubazione di entrambe le celle. C. albicans
genotipo C era più resistente agli attacchi PMN. I ceppi appartenenti al genotipo B avevano una media di 141.33 ± 14.27 cellule fagocitati dai 100 PMN. I ceppi appartenenti al genotipo C erano significativamente più resistenti all'attacco dei fagociti che gli isolati appartenenti al genotipo A (media di 109.93 ± 12.29 vs 121.67 ± 16.06, rispettivamente; Tabella 3). Attribuisce
virulenza di Candida albicans
ceppi ottenuti da due diverse regioni geografiche del Brasile (Nord-Est e Sud).
Quando i fattori di patogenicità sono stati confrontati tra tutti i ceppi ottenuti dalle due regioni geografiche, i ceppi ottenuti da Maringa (Sud) hanno espresso in modo più efficiente tutti i fattori di virulenza valutata in vitro. Questa differenza è stata considerata statisticamente significativa per la resistenza alla fagocitosi da PMN (Tabella 4). È interessante notare che il 40% degli isolati ottenuti da Maringa sono stati ottenuti da lesioni, mentre solo il 18,4% degli isolati da Natal sono stati infettando (tabelle 3 e 4) gli attributi .table 4 virulenza di Candida albicans isolati ottenuti dalla cavità orale di pazienti sottoposti a trapianto di rene 0.05.
