Abstract
sfondo
Considerando che il tessuto gengivale innestato potrebbe dover essere adattato alla zona del recettore e che i fibroblasti hanno la capacità di risponde agli stimoli batteriche attraverso il rilascio di varie citochine, questo studio ha valutato se i fibroblasti dalla mucosa del palato si comportano diversamente quando innestata sul margine gengivale per quanto riguarda la secrezione di citochine
. Metodi
biopsie dalla mucosa del palato sono stati raccolti al momento della chirurgia del trapianto gengivale libero, e dopo quattro mesi ri-raccolta è stata effettuata su un intervento chirurgico per la copertura della radice. I fibroblasti sono stati isolati dalla tecnica espianto, colta e stimolati con Porphyromonas gingivalis
(Pg
) ed Escherichia coli
(Ec
) LPS per 24 o 48 ore per la valutazione comparativa della secrezione di citochine e chemochine, come iL-6, iL-8 /CXCL8, MIP-1α /CCL3, TGF-β, VEGF e CXCL16. cellule non stimolate sono stati utilizzati come gruppo di controllo. Le cellule sono state testate per la vitalità attraverso saggio MTT, e la secrezione di citochine e chemochine è stata valutata nei sopranatanti cellulari di immunoenzimatici (ELISA).
Risultati
fibroblasti dalla mucosa palatina mantenuto lo stesso modello di secrezione di IL -6 quando innestato il margine gengivale. Al contrario, fibroblasti dalla innesto gengivale marginale hanno mostrato un aumento della secrezione di IL-8 /CXCL8 anche in assenza di stimolazione. È interessante notare che la secrezione di MIP-1α /CCL3 da parte dei fibroblasti dalla innesto gengivale marginale è risultata significativamente aumentata dopo 48 ore di stimolazione con PG
LPS e dopo 24 ore con Ec
LPS. Solo fibroblasti dalla innesto gengivale marginale hanno mostrato la secrezione di TGF-β. VEGF e CXCL16 secrezione non sono stati rilevati da entrambi i sottoinsiemi di fibroblasti.
Conclusione
fibroblasti dalla mucosa palatina sembra essere adattate alle condizioni locali del sito microambiente quando innestati zona marginale gengivale. Questa evidenza supporta l'effettiva partecipazione dei fibroblasti nell'omeostasi del parodonto marginale attraverso la secrezione di modulazione di importanti mediatori dell'infiammazione.
Parole
fibroblasti gengivali Parodontite citochine chemochine Infiammazione elettronico materiale supplementare
La versione online di questo articolo (doi :. 10 1186 /1472-6831-14-21) contiene materiale supplementare, che è disponibile per gli utenti autorizzati
Sfondo
l'esposizione del tessuto gengivale di placca batterica può causare infiammazione dei tessuti con segni clinici di cambiamento di colore. , dimensione, forma, consistenza e sanguinamento con la possibilità di perdita di osso alveolare a causa di progressione della malattia parodontale [1]. L'effetto cumulativo e gli eventi patologici ripetitivi al tessuto gengivale può portare al verificarsi e la progressione della recessione gengivale, specialmente nei casi con banda stretta o l'assenza di gengiva aderente [2-4].
Secondo l'American Academy of Periodontology, parodontale la chirurgia plastica può essere indicata per aumentare la larghezza gengivale, creando un vestibolo profondo in siti con attacco frenulo anormale e inadeguata gengiva aderente [5]. Anche se la larghezza della mucosa cheratinizzata e gengiva sono determinate geneticamente, possono essere influenzati dalla presenza di placca batterica associata a infiammazione o da interventi meccanici [6].
È stato dimostrato che i fibroblasti, oltre ad essere le cellule più importanti la manutenzione e il rimodellamento della matrice extracellulare del tessuto connettivo, sono coinvolti nella risposta dell'ospite immunitaria e infiammatoria malattia parodontale, in quanto sono le cellule strutturali predominanti nelle infezioni parodontali da batteri anaerobici come Porphyromonas gingivalis (Pg) Comprare e possono essere stimolate a rilasciare citochine infiammatorie su Pg
e la sua sfida sottoprodotti [7-11]. Oltre ad essere sensibile alle proprie citochine e fattori di crescita, che possono interagire direttamente con i batteri ed i loro fattori di virulenza, tra cui lipopolisaccaride (LPS) nelle lesioni parodontali [12]. Per quanto riguarda il ruolo
fibroblasti gengivali in risposta a Pg
LPS attraverso citochine rilascio, è stato precedentemente dimostrato che queste cellule mostrano un comportamento differenziale da legamento parodontale dagli stessi donatori, confermando l'individualità della regione anatomica nel determinare la risposta cellulare [9]. In particolare, per IL-6 e IL-8 /CXCL8, una chemochina noto richiesto per neutrofili assunzione, è stato riportato che queste cellule sono in grado di secernere grandi quantità quando stimolato da Pg
LPS [8, 13-15] . Inoltre, i fibroblasti gengivali anche secernono la chemochina MIP-1α /CCL3 implicando sui monociti chemiotassi in malattia parodontale [16], così come TGF-β che induce l'espressione di pro-collagene di tipo I [17]. VEGF è un'altra citochina legato alla eziologia della malattia parodontale dovuta alla capacità di aumentare la permeabilità vascolare che contribuisce alla diffusione di infiammazione, permettendo il rilascio di mediatori infiammatori dalle cellule nel tessuto infiammato e consentendo la formazione di nuovi vasi sanguigni [18]. Inoltre, il CXCL16 chemochine è indotta da altre citochine che promuovono fibroblasti gengivali proliferazione e la migrazione dei leucociti nei tessuti infiammati aiutando i tessuti parodontali rimpasto [19, 20]. Per quanto a nostra conoscenza, nessun lavoro precedente ha affrontato il profilo secrezione delle citochine suddette confronto i fibroblasti da palatale mucosa (di solito usato come un sito donatore autologo per le procedure di innesto gengivale) con le cellule provenivano da zona gengivale marginale.
Innestato tessuto gengivale potrebbe dover essere adattato alla zona recettore e c'è un grande corpo di prove che fibroblasti gengivali sono in grado di reagire a vari stimoli attraverso citochine e chemochine rilascio, che a sua volta giocano un ruolo importante nella risposta infiammatoria. Pertanto, questo studio ha lo scopo di verificare se la secrezione di citochine e chemochine, tra cui riparazione mediatori da parte dei fibroblasti gengivali umani sarebbe modulata quando innestato dalla mucosa del palato alla zona margine gengivale in una procedura di innesto gengivale libero.
Metodi
raccolta e fibroblasti campioni coltura primaria
Dopo l'approvazione da parte del comitato Etico della Scuola Bauru di Odontoiatria, Università di San Paolo, # 055/2011, tre sistemica e parodontalmente individui sani (28, 38 e 50 anni di età, 3 femmine) sono stati selezionati in Parodontologia cliniche, i quali necessaria copertura della radice in zone con scarsa mucosa cheratinizzata. Non avevano segni di infiammazione gengivale, nessun sanguinamento al sondaggio o critico profondità di sondaggio. Tutti gli individui sono stati sottoposti ad anamnesi, esame clinico parodontale e gli esami radiografici. I criteri di inclusione erano soggetti con mucosa cheratinizzata carente, sia in termini di quantità e qualità, senza complicazioni sistemiche che possano controindicare le procedure chirurgiche, e quelle fornite il consenso informato scritto a partecipare allo studio.
Il esemplari mucosa palatali, di dimensioni 3x3 mm, sono stati immediatamente ottenuto quando un innesto di tessuto epiteliale-connettivi è stato rimosso dal sito donatore palatina sulla zona premolari durante l'intervento chirurgico di innesto gengivale libero [21]. Dopo quattro mesi, i campioni da innesto gengivale sono stati ottenuti dalla zona marginale, in una seconda procedura chirurgica per la copertura della radice. I fibroblasti sono stati isolati mediante la tecnica di espianto come precedentemente descritto [8-11]. In breve, i campioni sono stati elaborati immediatamente in media di Dulbecco modificato Eagle (DMEM; Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) integrato con il 20% di siero fetale bovino (FBS, Gibco, Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). Lo strato epiteliale è stato rimosso ed i campioni sono stati tritata più piccolo possibile. frammenti di tessuto di mucosa palatina o di innesto gengivale sono state seminate separatamente in piastre di Petri e coperti con DMEM supplementato con il 20% FBS e antibiotici (600 microlitri /ml di penicillina, 300 microlitri /ml gentamicina solfato e 100 l /ml amfotericina B). Gli espianti sono stati collocati in 25 cm
2 boccette e incubate a 37 ° C in atmosfera umidificata al 5% CO 2. Il mezzo (DMEM 10% FBS) è stato cambiato ogni 2-3 giorni e le culture sono stati mantenuti fino fibroblasti raggiunto confluenza. Dopo confluenza, i fibroblasti sono stati raccolti e utilizzati tra il quarto e ottavo passaggi [8-11]
. Stimolazione fibroblasti
Le cellule sono state seminate in piastre da 24 pozzetti ad una densità di 2 × 10 4 cellule /bene e incubate a 37 ° C in atmosfera umidificata al 5% CO 2 durante 18 ore in DMEM 1% FBS. Dopo l'adesione durante la notte, DMEM contenente 1 mg /ml di Pg
LPS (Invivogen, San Diego, CA, USA) o EC
LPS (Invivogen) è stato aggiunto ai pozzetti per 24 o 48 ore. Le cellule non stimolate sono stati usati come controlli. Entrambi Pg
LPS e Ec
LPS erano ultrapura e acquistato da Invivogen.
Caratterizzazione fenotipica dei fibroblasti
cellule coltivate dalla mucosa del palato e innesto gengivale sono stati caratterizzati come i fibroblasti per la loro morfologia e colorazione con la superficie dei fibroblasti proteine (FSP, ab 11333, Abcam, Cambridge, UK) mediante immunocolorazione [11]. Le cellule sono state seminate in una piastra 8 pozzetti con 1 × 10 4 cellule per pozzetto e incubate a 37 ° C con 5% di CO 2 durante 18 ore per aderire in subconfluence. Successivamente, i pozzi sono stati divisi in gruppi (controllo, Pg
LPS, EC
LPS e controllo negativo, che è stato eseguito senza l'anticorpo primario) in duplice copia, alla cella stimolazione. Le cellule sono state fissate con paraformaldeide al 4% (15 min) e sono stati lavati 3 volte con PBS 1x e incubate con PBS BSA 3% (30 min a temperatura ambiente) seguita da incubazione anticorpo monoclonale primario fibroblasti marcatore di superficie diluito 1: 100 (2 ug /ml concentrazione finale), e infine con l'anticorpo secondario coniugato fluoresceina (1: 400) (Abcam) a 37 ° C al buio per 1 ora. Vetrini sono stati montati con Media mezzo di montaggio Vectashield Hard-Set di montaggio contenente 49,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI, H-1500, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) e analizzati da scansione laser microscopio confocale (modello TCS, SPE , Leica Mannheim, Germany).
vitalità cellulare
vitalità cellulare è stata analizzata da un'attività enzimatica con un saggio colorimetrico MTT [3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolio bromuro]. Brevemente, le cellule sono state lavate con 1 × PBS per rimuovere terreno di coltura e MTT (5 mg /ml) è stato aggiunto ai gruppi (controllo, Pg
LPS e Ec
LPS) o pozzi privi di cellule (bianco). La piastra è stata incubata per 4 ore a 37 ° C con 5% di CO 2. Dopo l'incubazione, la piastra è stata centrifugata (200 g
per 7 minuti a 21 ° C) e la soluzione di MTT è stato rimosso per aggiungere dimetilsolfossido (DMSO; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). La densità ottica dei pozzetti è stato determinato utilizzando un lettore di piastre (Fluostar Optima, BMG Labtech, Ortenberg, Germania) nella lunghezza d'onda di 570 nm.
Immunoenzimatico (ELISA)
ELISA è stata effettuata a seguito del produttore le istruzioni per determinare i livelli di proteina di iL-6 (R & amp; S sistema, Minneapolis, MN, EUA), iL-8 /CXCL8 (R & amp; D di sistema, Minneapolis, MN, EUA), MIP-1α /CCL3 (R & amp; D sistema, Minneapolis, MN, EUA), TGF-β (eBioscience, San Diego, CA, USA), VEGF (Peprotech, Londra, Regno Unito) e CXCL16 (Peprotech, Londra, Regno Unito). Brevemente, piastre da 96 pozzetti sono stati incubati con anticorpo di cattura anti-IL-6, IL-8 /CXCL8, MIP-1α /CCL3, TGF-β, VEGF o CXCL16 diluito in tampone PBS 1x. Dopo aver bloccato per 1 ora per evitare il legame non specifico, 100 ml di standard di IL-6, IL-8 /CXCL8, MIP-1α /CCL3, TGF-β, VEGF e CXCL16 e sovranatanti sono stati collocati. Le citochine sono stati rilevati da rafano perossidasi anticorpo monoclonale per ogni destinazione dopo aggiunta di 100 microlitri anti-IL-6, IL-8 /CXCL8, MIP-1α /CCL3, TGF-beta, VEGF e CXCL16 anticorpi biotinilati sono stati posti in ciascun pozzetto e incubati per 2 ore a temperatura ambiente. La micropiastra è stato lavato per rimuovere gli anticorpi marcati con enzima non legati. La quantità di perossidasi di rafano legato a ciascun pozzetto è stato determinato mediante l'aggiunta di 100 microlitri soluzione di substrato. La reazione è stata bloccata con l'aggiunta di 100 ml di acido solforico 1 M, e le piastre sono stati letti a 450 nm (Synergy ™ MX monocromatore Based micropiastre multi-mode Reader, BioTek Instruments, Inc., Winooski, VT, USA). Le concentrazioni di IL-6, IL-8 /CXCL8, MIP-1α /CCL3, TGF-β, VEGF e CXCL16 sono stati determinati per interpolazione da una curva standard e presentati come pg /mL per saggi duplicati di campioni duplicati di ciascuno degli condizioni testato.
analisi statistica
confronti di redditività attraverso MTT tra campioni sono stati eseguiti utilizzando a una via di test ANOVA seguito dal test di Tukey. ELISA normalità dati sono stati verificati con il metodo di Kolmogorov-Smirnov. Le differenze statistiche sono state determinate mediante tre vie ANOVA seguita dal test di Tukey. Le analisi statistiche sono state effettuate con STATISTICA (versione 11.0; StatSoft Inc). valori e lt P; 0.05 sono stati considerati significativi. I risultati sono stati espressi come media e una deviazione standard della media.
Risultati
caratterizzazione fenotipica dei fibroblasti
colorazione cellulare con un marcatore di superficie dei fibroblasti (FSP) è stata eseguita per confermare il fenotipo fibroblastica. I fibroblasti sono stati analizzati mediante immunofluorescenza in tutti i gruppi (di controllo, Pg
LPS, EC
LPS e controllo negativo). La colorazione positiva è stata osservata per tutti i gruppi (Figura 1), con Pg
LPS (Figura 1C) e Ec
gruppi LPS (Figura 1B) essendo leggermente superiore. Per il gruppo di controllo negativo (Figura 1D), che non hanno ricevuto anticorpo primario, è stato rilevato alcun segnale. Questo risultato conferma la caratterizzazione delle cellule coltivate come fibroblasti. Figura 1 Cellule caratterizzazione da proteine di superficie dei fibroblasti colorazione. cellule in coltura sono stati immunostained per le proteine di superficie dei fibroblasti (FSP) e analizzati da un microscopio confocale a un aumento di 63x. (A) di controllo; (B) stimolata da EC
LPS; (C) stimolato dal Pg
LPS e (d) controllo negativo, nuclei etichettati in blu (DAPI).
Vitalità cellulare
vitalità cellulare è stata valutata dopo 24 e 48 ore, nel controllo (non stimolata ) e gruppi di test (stimolato con PG
LPS e Ec
LPS). Non c'era alcuna differenza nelle cellule viabilità con gli stimoli utilizzati dopo 24 e 48 ore (Figura 2). Figura 2 celle vitalità. I fibroblasti vitalità sfidato con PG
LPS ed EC
LPS valutati a 24 e 48 ore nel controllo (non stimolato) e gruppi di prova (stimolate con Pg
LPS e Ec
LPS) attraverso test MTT
. secrezione di citochine confrontando fibroblasti dalla mucosa del palato con le cellule gengivale marginale innestate
Quando gli obiettivi di questo studio sono stati confrontati tra i due sottopopolazioni di fibroblasti, iL-6 secrezione era statisticamente significativa dopo 24 e 48 ore di Pg stimolazione
LPS (Figura 3A e B) da entrambi i sottotipi di fibroblasti (da mucosa palatina e innesto gengivale nella zona marginale), e la differenza è stata maggiore con 48 h (Figura 3B). D'altra parte, la secrezione dopo Ec
stimolazione con LPS era statisticamente significativa dopo 48 h, da entrambi i sottotipi di fibroblasti (Figura 3D). Inoltre, IL-6 era maggiore secrezione dai fibroblasti non stimolate dal marginale innesto gengivale (Figura 3). Figura 3 IL-6 secrezione da fibroblasti umani in coltura da palatale mucosa e marginale innesto gengivale. A-D: colture cellulari primarie sono stati ottenuti da tessuti parodontali da tre soggetti sani e, dopo il quarto passaggio, sono state stimolate con LPS da P. gingivalis Comprare e da E. coli
in una concentrazione di 1 mg /mL. Terreno di coltura senza stimoli stato usato come controllo. ELISA è stata eseguita per la quantificazione delle citochine sui supernatanti di coltura cellulare. figura rappresentativa della media di tre esperimenti indipendenti, n = 3. * P & lt; 0,05 è stato considerato significativamente differenti. PMF = fibroblasti mucosa Palatino. GMF = marginali fibroblasti gengivali.
Fibroblasti dalla mucosa palatina secreta più IL-8 /CXCL8 di fibroblasti dalla innesto gengivale marginale quando sono stimolati da Pg
LPS con una differenza statisticamente significativa a 48 ore (Figura 4A e B) . Inoltre, per quanto riguarda questo chemochina, fibroblasti dalla mucosa del palato hanno mostrato un aumento in entrambe le 24 ore e 48 ore quando sono stimolati da Ec
LPS (Figura 4C e D), che non è stato osservato dalle cellule dal innesto gengivale marginale. Figura 4 IL-8 /secrezione CXCL8 da fibroblasti umani in coltura da palatale mucosa e marginale innesto gengivale. A-D: colture cellulari primarie sono stati ottenuti da tessuti parodontali da tre soggetti sani e, dopo il quarto passaggio, sono state stimolate con LPS da P. gingivalis Comprare e da E. coli
in una concentrazione di 1 mg /mL. Terreno di coltura senza stimoli stato usato come controllo. ELISA è stata eseguita per la quantificazione delle citochine sui supernatanti di coltura cellulare. figura rappresentativa della media di tre esperimenti indipendenti, n = 3. * P & lt; 0,05 è stato considerato significativamente differenti. PMF = fibroblasti mucosa Palatino. GMF = marginali fibroblasti gengivali.
In questo studio, MIP-1α /CCL3 è stato osservato per essere costitutivamente secreta da entrambi i fibroblasti sottotipi (Figura 5). Inoltre, non vi era alcuna differenza statisticamente significativa in MIP-1α /secrezione CCL3 tra fibroblasti non stimolate (gruppo di controllo) e fibroblasti stimolati con Pg
o EC
LPS dalla mucosa palatale (Figura 5). Tuttavia, una differenza statisticamente significativa è stata osservata in MIP-1α /secrezione CCL3 dopo 48 ore quando fibroblasti dalla innesto gengivale marginale sono state stimolate con LPS Pg (Figura 5B) e dopo 24 ore
quando sfidato da Ec
LPS (Figura 5C). Figura 5 MIP-1α secrezione /CCL3 da fibroblasti umani in coltura da palatale mucosa e marginale innesto gengivale. A-D: colture cellulari primarie sono stati ottenuti da tessuti parodontali da tre soggetti sani e, dopo il quarto passaggio, sono state stimolate con LPS da P. gingivalis Comprare e da E. coli
in una concentrazione di 1 mg /mL. Terreno di coltura senza stimoli stato usato come controllo. ELISA è stata eseguita per la quantificazione delle citochine sui supernatanti di coltura cellulare. figura rappresentativa della media di tre esperimenti indipendenti, n = 3. * P & lt; 0,05 è stato considerato significativamente differenti. PMF = fibroblasti mucosa Palatino. GMF = marginali fibroblasti gengivali.
Quando la secrezione di TGF-β è stata valutata, fibroblasti dalla mucosa palatina non ha mostrato livelli rilevabili anche in presenza di Pg
LPS (Figura 6A e B) o EC
LPS (Figura 6C e D). Al contrario, fibroblasti dalla innesto gengivale marginale mostravano una secrezione TGF-β costitutiva e non vi era alcuna differenza statisticamente significativa tra cellule stimolate e non stimolate, sia a 24 he 48 h (Figura 6). VEGF e CXCL16 secrezione non è stato rilevato sia su fibroblasti surnatante colta dalla mucosa del palato né dal tessuto gengivale marginale, indipendentemente dalla stimolazione Pg
o Ec
LPS. Figura secrezione 6 TGF-β da fibroblasti umani in coltura da palatale mucosa e marginale innesto gengivale. A-D: colture cellulari primarie sono stati ottenuti da tessuti parodontali da tre soggetti sani e, dopo il quarto passaggio, sono state stimolate con LPS da P. gingivalis Comprare e da E. coli
in una concentrazione di 1 mg /mL. Terreno di coltura senza stimoli stato usato come controllo. ELISA è stata eseguita per la quantificazione delle citochine sui supernatanti di coltura cellulare. figura rappresentativa della media di tre esperimenti indipendenti, n = 3. * P & lt; 0,05 è stato considerato significativamente differenti. PMF = fibroblasti mucosa Palatino. GMF = marginali fibroblasti gengivali.
Discussione
fibroblasti non sono una cellula unica tra le diverse regioni anatomiche [9, 22-24]. Sono le cellule predominanti nel tessuto connettivo parodontale [12], e sono coinvolti nella risposta immunitaria attraverso il rilascio di citochine infiammatorie [7] e riparazione mediatori [25, 26]. Per quanto a conoscenza dell'autore, questo è il primo studio per analizzare e confrontare il profilo dei mediatori secrezione da fibroblasti umani in coltura da non marginale della mucosa del palato con la gengiva marginale innestato tessuto, indicando le differenze o analogie tra queste cellule nel contribuire per citochine secrezione alla stimolazione LPS batterico.
Nel presente studio, è stato osservato che entrambi i fibroblasti derivati da palatale mucosa e marginale innesto gengivale secreti iL-6 citochina simile quando sono stimolati da Pg
o Ec
LPS. Sappiamo che sarebbe stato utile per studiare l'espressione di mRNA per comprendere meglio se i livelli di trascritto sarebbero diverse tra loro. Questo ci potrebbe dare qualche informazione su possibili modificazioni post trascrizionali che possono alterare la produzione di citochine. Studi precedenti [8, 14, 15, 27, 28] hanno dimostrato che i fibroblasti esposti a stimoli batterici come LPS hanno mostrato un significativo IL-6 espressione, indicando l'importanza di questa citochina nella risposta immunitaria e infiammatoria in periodontite ospitante, ma il presente inchiesta ha inoltre rivelato un aumento della secrezione di IL-6 a 48 h per entrambi i sottotipi di fibroblasti. Qui, c'è stato IL-6 secrezione costitutiva da cellule non stimolate dalla mucosa palatina e anche dal innesto gengivale marginale, essendo statisticamente significativa per quest'ultimo. Scheres et al. [14] hanno dimostrato che i fibroblasti non-stimolata gengivale espresso e secreto più IL-6 di fibroblasti del legamento parodontale. Questo ha suggerito che i fibroblasti gengivali hanno un più alto stato di attività, perché sono più suscettibili di avere contatti con gli agenti patogeni parodontali e qui siamo in evidenza questo ruolo importante per entrambi i sottotipi di cellule gengivali.
È qui dimostrato che i fibroblasti dalla mucosa palatina solo secreto IL-8 /CXCL8 chemochine quando stimolati con LPS batterici. Quando queste cellule sono stati innestati sulla zona margine gengivale, dopo 4 mesi secrezione di IL-8 /CXCL8 chemochine è stata osservata anche in assenza di LPS stimoli. Questo cambiamento nel profilo di espressione può essere correlato al contatto più stretto delle cellule con fattori di virulenza batterica, come Pg
LPS, sul parodonto marginale. Studi precedenti [9, 13-15, 29] hanno dimostrato che i fibroblasti stimolati da PG
LPS sono in grado di produrre IL-8, e fibroblasti provenienti da diverse regioni anatomiche mostrano eterogeneità sul profilo chemochine secrezione [14]. Pertanto, si sottolinea inoltre che la secrezione eterogenea di IL-8 /CXCL8 nello studio corrente può essersi verificato dall'influenza ambientale sulla secrezione di mediatori fibroblasti innestate su una nuova regione anatomica, in cui vi è l'adattamento e la proliferazione di queste cellule.
quando la chemochina MIP-1α /CCL3 stata studiata, è stato osservato che quando fibroblasti da mucosa palatina stati innestati sulla gengiva marginale, sono mantenuti simili cytokine secrezione costitutiva in assenza di stimolazione batterica. Tuttavia, i fibroblasti dalla innesto gengivale marginale mostravano una secrezione più elevato rispetto a fibroblasti del palato mucosa solo dopo 48 ore quando sono stimolati da Pg
LPS, mostrando un'espressione dipendente dal tempo. Ancora una volta, l'aumento della secrezione di chemochine, in questo caso MIP-1α /CCL3, dai fibroblasti dal innesto gengivale marginale potrebbe essersi verificato dovuto alla stimolazione prima nella zona marginale placca dentale nel solco, suggerendo che queste cellule presentano un comportamento adattivo quando innestato sul margine gengivale. Un precedente lavoro del nostro gruppo [9] ha dimostrato che gengivali e parodontali fibroblasti del legamento si sono comportati in modo diverso su MIP-1α /secrezione CCL3 quando sono stimolati da Pg
LPS, e anche mostrato un aumento del MIP-1α /secrezione CCL3 quando le cellule sono stati sfidati da Pg
LPS in basse concentrazioni, come 0,1 mg /ml, che sono aumentati nel corso del tempo.
per quanto riguarda la secrezione di TGF-β, colture di fibroblasti dalla mucosa del palato e per l'innesto gengivale marginale ha mostrato un comportamento eterogeneo. I fibroblasti dalla mucosa del palato non hanno mostrato la secrezione di TGF-β anche contro gli stimoli batterici applicati. Al contrario, fibroblasti dalla innesto gengivale marginale secreti TGF-β, senza alcuna differenza tra cellule stimolate e non stimolate. Uno studio [30] ha dimostrato che fibroblasti da legamento parodontale espressi TGF-β, ma la sua produzione non è stata influenzata da LPS batterici, suggerendo che TGF-β si accumulano in condizioni infiammatorie sopprimere la funzione immunitaria cellulare, ma senza portare alla distruzione dei tessuti attraverso la stimolazione con batteri LPS. Un altro studio di confronto legamento periodontale e cellule gengivali [8] pensa che la secrezione TGF-β dipende dalla concentrazione stimolo, soprattutto per i fibroblasti gengivali, essendo maggiore quando provocati con 10 ug /ml di LPS, mentre la concentrazione di 1 mg /mL usati nel corso di studio, non hanno mostrato differenze significative rispetto ai fibroblasti non-stimolata. L'aumento della secrezione di TGF-β trovato qui da cellule innestate marginali potrebbe essere legato alla riparazione dei tessuti e potrebbe essersi verificato dalla necessità di riparazione continua, dal momento che la presenza costante di dentale microbiota solco induce cambiamenti marginali.
Infine, i risultati hanno indicato che né fibroblasti dalla mucosa del palato né dal margine gengivale trapianto VEGF secreto né CXCL16, secondo stimoli impiegati. Studi precedenti [31, 32] hanno dimostrato che i fibroblasti gengivali umani stimolati da LPS, vescicole e proteine da Pg
e Aa
membrana extracellulare sono stati in grado di produrre VEGF quando stimolato da tali agenti. Forse in questo studio il tempo e la concentrazione di LPS utilizzati non erano sufficienti per l'induzione di VEGF. Per quanto riguarda CXCL16, è stato riferito che questa espressione è stata indotta da altre citochine come IFN-γ e TNF-α, e la loro secrezione è stato mediato da ADAM 10 recettore di membrana, che regola la funzione CXCL16 su tessuti infiammati [33]. Un altro lavoro [19] ha mostrato che l'espressione CXCL16 dai fibroblasti gengivali era controllata da diverse citochine come IL-1β, TNF-α e IFN-γ. In effetti, si potrebbe ipotizzare che la secrezione di CXCL16 non è stato rilevato in questo studio perché fibroblasti sono stati stimolati solo da LPS batterici, e potrebbe essere necessaria l'azione di altre citochine o altri stimoli per la secrezione di CXCL16 da parte dei fibroblasti gengivali [19, 33].
la secrezione eterogenea di mediatori infiammatori e riparazione può indicare che i fibroblasti innestate su una nuova regione (margine gengivale) anatomica possono essere influenzate dal microambiente momentaneamente queste cellule sono in contatto con i prodotti batterici, partecipando più efficacemente nel contesto la risposta infiammatoria.
Conclusioni
fibroblasti dalla mucosa palatina presentano un comportamento adattivo per quanto riguarda le citochine secrezione quando innesta il margine gengivale, che mostra la differenza nella secrezione di importanti mediatori infiammatori per l'omeostasi parodonto marginale.
Abbreviazioni
Pg:
Porphyromonas gingivalis
Ec:
Escherichia coli
ELISA :
enzyme-linked test immunoenzimatico
LPS:
lipopolisaccaride
DMEM:
modificata mezzo di Eagle Dulbecco
FBS:
siero fetale bovino
FSP:
proteina di superficie dei fibroblasti
BSA:
bovino albumina sierica
DAPI:
49,6-diamidino-2-phenylindole
DMSO:
Dimetisulfossido
MTT:.
[3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-diphenyltetrazolium bromuro
dichiarazioni
Ringraziamenti
non ci sono conflitti di interesse associati a questo studio. Questo studio è stato sostenuto in parte da San Paolo Research Foundation (FAPESP; Concessione # 2010 /01.230-1 di CFS) e il Consiglio Nazionale per la Scienza e lo sviluppo tecnologico (CNPq; concedere # 480.160 /2013-9 a CFS) <. br> autori fascicoli presentati originali per
di seguito sono riportati i collegamenti ai file degli autori presentati originali per immagini. 'file originale per la figura 1 12903_2013_366_MOESM2_ESM.tif Autori 12903_2013_366_MOESM1_ESM.tif autori file originale di' file originale per la figura 3 12903_2013_366_MOESM4_ESM.tif Autori figura 2 12903_2013_366_MOESM3_ESM.tif Autori file originale per la figura 4 file originale 12903_2013_366_MOESM5_ESM.tif degli autori per la figura 5 12903_2013_366_MOESM6_ESM.tif autori file originale per la figura 6 Conflitto di interessi
Gli autori dichiarano di non avere interessi in gioco.
autori contributi
FPA, CCGP, CRS, CFS e scorie concepita e progettata al progetto. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.
