Abstract
Background
carie dentale sviluppa come risultato del metabolismo dei carboidrati da batteri cariogeni presenti in un biofilm complesso. Il presente studio ha lo scopo di esaminare se i batteri in campioni di placca sopragengivali pool quantificati tramite un "scacchiera ibridazione DNA-DNA" Pannello a base di batteri carie-correlati, potrebbe riflettere la carie esperienza in un modo simile a campioni di saliva analizzati utilizzando un metodo di sedia-side in una precedente inchiesta.
Metodi
un totale di 86 madri e dei loro figli di età compresa tra 4-6 anni e 12-16 anni hanno partecipato. Carie esperienza (DMFT /DMFT; decaduto, denti mancanti e pieno di denti permanenti e primaria) è stato registrato clinico e radiografico. Carie è stato registrato presso il D
3 livelli (carie nella dentina). La componente D /D è stato diviso in tre categorie. Un campione di placca sopragengivale in pool per partecipante è stata ottenuta da siti approssimali posteriori. Le analisi di 15 specie batteriche sono state eseguite con la tecnica a scacchiera DNA-DNA ibridazione.
Risultati
Nessuna relazione significativa è stata trovata tra i punteggi batteriche e DMFT /DMFT né d /D di Gruppi. Conclusioni
differenza i campioni di saliva e il metodo di sedia-side, interprossimali campioni di placca pool analizzati utilizzando la "tecnica di ibridazione DNA-DNA a scacchiera" non sono emersi relazioni significative tra la conta batterica e l'esperienza di carie.
Anette Carlén, Guglielmo Campus e Peter Lingström contribuito in maniera uguale a questo lavoro.
Sfondo
la carie dentale è una malattia multifattoriale avviato e influenzato da una serie di fattori chiave [1]. Inoltre, la saliva gioca un ruolo importante nel mantenimento dell'integrità denti tamponando acidi prodotti dai batteri cariogeni e proteggere i denti dalla carie. La saliva può influenzare la microflora orale adsorbimento alla superficie del dente formando la pellicola acquisita, che determina quali microrganismi sono in grado di attaccare e colonizzare [2]. La saliva è stato convenzionalmente utilizzato come strumento diagnostico per determinare l'attività di carie individuale e del rischio [3, 4]. Tale valutazione include la registrazione di capacità del buffer salivari e conta dei batteri cariogeni soprattutto streptococchi mutans e lattobacilli utilizzano test sedia-side.
Sebbene l'analisi salivare può fornire una panoramica generale dell'ecologia orale che riflette il rischio di carie, carie dentale è principalmente un biofilm indotta malattia [5]. La visione di questa biofilm (placca dentale) come un ecosistema microbico complesso ha migliorato la comprensione del suo ruolo nello sviluppo della carie e la progressione [6]. placche cariogeni risultato quando specie batteriche acidogenici e aciduric aumentare a seguito di esposizione di carboidrati ad alta frequenza. Il metabolismo microbico di tali carboidrati comporterà l'acidificazione del biofilm, che a sua volta può portare a demineralizzazione indotta da acido dei tessuti duri dentali [6]. Una delle tecniche molecolari che hanno dimostrato la diversa composizione microbica del biofilm dentale è il "DNA-DNA tecnica scacchiera ibridazione" [7, 8]. Tuttavia, nessun pannello specifici carie è ancora stato proposto. Sarebbe quindi interessante utilizzare la tecnica di ibridazione scacchiera DNA-DNA con una carie pannello specifico per indagare il rapporto tra esperienza individuale della carie e dei conti di diversi batteri della placca sopragengivali carie-correlati.
Il presente studio è stato condotto come parte di una serie di studi sulle madri sauditi ei loro figli. Una parte volto a descrivere la carie esperienza in relazione a vari fattori legati carie e una chiara associazione tra sedia-side salivari conta batterica e carie esperienza è stata trovata [9]. Un'altra parte è stato progettato per determinare se un pool di campioni di placca interprossimali analizzati utilizzando la "tecnica di ibridazione scacchiera DNA-DNA" potrebbe riflettere l'esperienza di carie.
L'ipotesi di questo studio trasversale è che carie più elevate esperienze sono associati a più alti capi d' batteri carie legati in placca sopragengivale. Lo scopo del presente studio è stato quindi di esaminare se i batteri in campioni di placca sopragengivali pool quantificati tramite un "scacchiera ibridazione DNA-DNA" Pannello a base di batteri carie-correlati, potrebbe riflettere la carie esperienza in un modo simile a campioni di saliva analizzati utilizzando un metodo sedia a fianco in una precedente inchiesta.
Metodi
Soggetti
lo studio è stato dato l'approvazione etica dalla Facoltà di Odontoiatria presso l'Università king Abdulaziz di Jeddah, Arabia Saudita. Le impronte dentali ai Dental Salute e di emergenza Cliniche presso la Facoltà di Odontoiatria sono stati sottoposti a screening per identificare i candidati idonei di famiglia. Lo studio comprendeva 86 famiglie volontarie. Da ogni famiglia, la madre (età media 37,0 ± 4,5 anni) e due dei suoi figli, di età compresa tra 4-6 anni (età media 5.0 ± 0.9 anni) e 12-16 anni (età media 13,0 ± 1,4 anni) volontariamente. informazioni verbali sullo studio è stato dato ai genitori e consenso informato scritto è stato ottenuto. Tutte le indagini sono state condotte da uno degli autori (AM)
. Registrazione carie
Lo stato dentatura è stata espressa con l'indice DMFT (decaduto, denti mancanti e pieno) per i denti permanenti e DMFT per i denti primari. Sono stati esclusi terzi molari. Carie è stato registrato clinicamente e radiologicamente a D 3 livelli [10]. radiografie Bitewing sono stati presi per ogni partecipante al fine di registrare il decadimento approssimale. Tutte le superfici prossimali nella dentatura dalla superficie mesiale dei primi premolari /molari primari alla superficie distale dei secondi molari /molari primari sono stati inclusi.
Campioni di placca batterica
pool placca sopragengivale è stato campionati dai siti prossimali tra i denti 16/15, 25/26, 35/36 e 46/45 nelle madri e bambini più grandi e denti 55/54, 64/65, 74/75 e 85/84 nei bambini più piccoli che utilizzano sterili curette Gracey. Se uno dei denti del sito approssimale mancava, un'area adiacente è stato utilizzato. Ogni campione di placca è stato posto in una provetta Eppendorf contenente 150 μ l di tampone
TE sterile (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 7,6). Poi 100 μ l di
0,5 M NaOH stato aggiunto al pellet placca e la sospensione batterica è stato conservato a -20 ° C in attesa di elaborazione [11].
Checkerboard DNA-DNA ibridazione
L'analisi batterica specie è stata effettuata secondo il metodo di ibridazione DNA-DNA scacchiera [12]. sonde genomiche interi sono stati preparati dai 15 ceppi batterici noti per essere correlati alla carie come mostrato nella Tabella 1. Una valutazione della carica batterica nei campioni è stata eseguita confrontando i segnali ottenuti con quelli generati dai campioni standard aggregati contenenti un conteggio di 10 6 e 10 5 di ogni specie batteriche, rispettivamente. I segnali sono stati codificati su una scala da 0 a 5 come segue: 0 = nessun segnale; 1 = a densità del segnale debole di quella dello standard basso (& lt; 10 5 batteri); 2 = densità del segnale uguale a quella del basso livello (= 10 5 batteri); 3 = densità di segnale superiore a quella dello standard basso ma inferiore a quella dello standard alto (& gt; 10 5 ma & lt; 10 6 batteri); 4 = densità segnale pari a quella del livello elevato (= 10 6 batteri) e 5 = densità di segnale superiore a quella del livello elevato (& gt; 10 6 batteri). Ulteriori dettagli riguardanti la tecnica si trovano in Mannaa et al. [13]. Tutte le valutazioni sono state effettuate da un esaminatore (AM) .table 1 I 15 carie legati ceppi batterici utilizzati per la preparazione di sonde di DNA e l'ulteriore confronto con i dati clinici carie
nomenclatura batterica
descrizione Strain & amp; fonte
streptococchi mutans
Streptococcus mutans
ATCC-25175
Streptococcus sobrinus
CCUG-27507
non-streptococchi mutans
Streptococcus mitis
ATCC-49456D-5
Streptococcus gordonii
ATCC-35105D-5
Streptococcus sanguinis
ATCC-10556D-5
Streptococcus salivarius
ATCC-9759D-5
lattobacilli
Lactobacillus casei
ATCC-334D-5
Lactobacillus salivarius
CCUG-55845
Lactobacillus fermentum
OMGS -3182
Actinomyces
Actinomyces odontolyticus
NCTC-9935
Actinomyces oris
ATCC-12104D-5
veillonella parvula
ATCC-10790D-5
Rothia dentocariosa
CCUG-17835
Bifidobacterium dentium
OMGS-1956
Parvimonas micra
ATCC-33270
analisi dei dati
Tutti i dati sono stati analizzati utilizzando IBM ® SPSS ® pacchetto statistico (SPSS versione 18.0, IBM ®, Chicago, Illinois ., STATI UNITI D'AMERICA). La componente D /D è stato classificato in basso: ≤ 1, media: 2-5 e alta: & gt; 5 per le madri ei bambini più grandi, e basso: ≤ 3, media: 4-9 e alti: ≥ 10 per i bambini più piccoli. Kappa di Cohen per la determinazione dell'affidabilità intra-esaminatore della registrazione della carie è stato calcolato. Statistiche descrittive, compresi i mezzi e le deviazioni standard sono state calcolate separatamente per i tre gruppi. Per quanto riguarda i punteggi scacchiera, solo un segnale pochi "0" i dati sono stati registrati e quindi combinati con il segnale dati "1" in "≤1". One-way ANOVA è stato utilizzato per confrontare differenze medie nel carie esperienza in relazione ai punteggi batteriche. test esatto di Fisher è stato utilizzato per associare i gruppi d /D con i punteggi batteriche. Il livello di significatività statistica è stata fissata al 5%.
Risultati e discussione
valori kappa del Cohen per la registrazione della carie per le madri, i bambini più piccoli e bambini più grandi erano 0,88, 0,90 e 0,82, rispettivamente. La tabella 2 riassume la conta batterica per ciascuna specie. Le carie esperienze (DMFT /DMFT) delle madri, i bambini più piccoli e più grandi sono riassunti nella Tabella 3.Table distribuzione 2 Punteggio ottenuto per i 15 ceppi batterici ottenuti con la tecnica scacchiera DNA-DNA ibridazione nelle madri, da 4 a 6 anni -vecchio (C 4-6) e 12 ai 16 anni (C 12-16) i bambini
batteriche Ceppi
punteggi scacchiera
Madri
C4-6
C2-16
n = 86
n = 86
n = 86
≤1
2
3
4
5
≤1
2
3
4
5
≤1
2
3
4
5
S. mutans
77
8
1
0
0
68
15
3
0
0
10
76
0
0
0
S. sobrinus
6
80
0
0
0
79
3
4
0
0
9
77
0
0
0
S. sanguinis
17
69
0
0
0
19
66
1
0
0
68
17
1
0
0
S. salivarius
84
2
0
0
0
80
6
0
0
0
83
3
0
0
0
S. gordonii
67
16
3
0
0
67
16
3
0
0
66
16
3
1
0
S. mitis
72
12
2
0
0
72
10
4
0
0
74
12
0
0
0
L. casei
81
5
0
0
0
82
4
0
0
0
81
5
0
0
0
L. fermentum
84
2
0
0
0
82
4
0
0
0
84
2
0
0
0
L. salivarius
84
2
0
0
0
84
2
0
0
0
83
3
0
0
0
A. odontolyticus
83
3
0
0
0
80
6
0
0
0
81
5
0
0
0
A. oris
55
27
4
0
0
40
40
6
0
0
55
30
1
0
0
V. parvula
56
28
1
1
0
50
29
7
0
0
54
29
3
0
0
R.dentocariosa
74
12
0
0
0
72
14
0
0
0
71
14
1
0
0
B. dentium
81
5
0
0
0
81
5
0
0
0
83
3
0
0
0
P. micra
20
28
24
14
0
24
26
28
8
0
29
19
29
8
1
Table 3 Stato dentizione (DMFT /DMFT) e carie esperienza (D /d) nelle madri, da 4 a 6 anni, (C 4-6) e 12 ai 16 anni (C 12-16) i bambini
variabile
Madri
C4-6
C12-16
n = 86
n = 86
n = 86
DMFT /abile (media ± DS)
12.4 ± 5.3
9.0 ± 5.0
5.8 ± 4.1
d /d (media ± DS)
5.5 ± 3.9
8.0 ± 5.1
4.5 ± 3.7
DMFT /abile = 0 (n [%])
3 [3,5]
8 [9.3]
10 [11.6]
d /d = 0 (n [%])
10 [11.6]
9 [10.5]
12 [14.0]
bassa
17 [19.8]
23 [26.7]
23 [26.7]
Media
31 [36.0]
25 [29,1]
32 [37.2]
alta
38 [44.2]
38 [44.2]
31 [36.0]
C'era una distribuzione non-uguale di soggetti entro i punteggi sulla scala scacchiera, con la maggior parte delle conta batterica in inferiori punti della scala. L'analisi ha mostrato alcuna relazione tra i punteggi batteriche e la carie esperienza per uno dei batteri carie-correlati. Inoltre, non sono stati rilevati associazioni significative tra i punteggi batteriche e le d /D categorie nelle madri o dei loro bambini più piccoli o più grandi ad eccezione di una tendenza osservata in relazione a Streptococcus mutans
come illustrato nella Tabella 4 Distribuzione 4.Table d /d in relazione alle S. mutans punteggi nelle madri, da 4 a 6 anni, (C 4-6) e 12 ai 16 anni (C 12-16) i bambini zona S. mutans conteggio
d /d
Madri
C4-6
C12-16
Low
Medium
High
Low
Medium
High
Low
Medium
High
(≤1)
(2–5)
(>5)
(≤3)
(4–9)
(>9)
(≤1)
(2–5)
(>5)
1
17
29
31
20
18
30
23
30
27
2
0
2
6
3
4
8
0
2
4
3
0
0
1
0
3
0
-
-
-
The maggior parte degli studi con la tecnica di ibridazione DNA-DNA scacchiera si sono concentrati sullo studio della placca batterica ecologia in relazione alla malattia parodontale [14-17]. Questi studi hanno rivelato una relazione direttamente proporzionale tra il numero di batteri e profondità della tasca parodontale. Il presente studio non ha potuto dimostrare una relazione tra i conti di batteri sopragengivali e l'esperienza di carie (DMFT /DMFT). Una relazione tra carie esperienza e conta batterica salivari carie-correlati (streptococchi mutans e lattobacilli) valutata utilizzando batteri CRT ® è stato trovato nello stesso campione di studio [9]. Nel presente studio, è stata trovata alcuna relazione tra i batteri quantificati nei campioni di placca pool e l'esperienza di carie. Questo corrisponde bene con uno studio precedente in cui è stata trovata una forte associazione tra carie dentale e organismi cariogeni analizzati da tecnica di coltura rispetto al metodo scacchiera [18]. Un certo numero di fattori legati alle caratteristiche di placca dentale, il processo di malattia di carie e la scelta del metodo di campionamento, può spiegare la constatazione corrente. L'interazione dei batteri nella placca dentale potrebbe dare un maggiore contributo allo sviluppo della carie rispetto al conteggio preciso di alcune specie cariogeni. Inoltre, la comunità placca batterica è diversa nelle diverse fasi della placca di maturazione (precoce della placca rispetto
matura placca). Inoltre, la posizione dei siti di campionamento e il numero di siti selezionati possono influenzare il rapporto. Il conteggio dei batteri della placca potrebbe anche essere influenzata da una serie di fattori carie legati diversi da carie esperienza reale come ad esempio la posizione /profondità (smalto contro
dentina), lo stadio (incipiente contro
cavitazione), livello ( acuta, cronica o arrestati), e l'attività della lesione cariosa (attivo contro
inattiva). Inoltre, la tecnica di ibridazione DNA-DNA scacchiera ha un limite cut-off per la quantificazione batterica rendendo il rilevamento di batteri in basso numero di problematiche, che possono essere ulteriormente complicati da reazioni crociate [19]. Infine, la distribuzione irregolare dei soggetti nei punteggi scacchiera con una maggioranza di bassa conta batterica nel presente studio potrebbe spiegare la mancanza di risultati significativi.
Oltre agli inconvenienti precedentemente citati, esistono due limitazioni del metodo di campionamento utilizzato nel presente studio. A differenza di saliva, è difficile standardizzare la quantità di batteri in un campione di placca. Normalizzazione può essere facilmente raggiunto con la saliva esprimendo la quantità di batteri in un campione di 1 mL. Inoltre, raggruppando placca sopragengivale in una provetta può creare difficoltà nella lisi tutte le cellule batteriche presenti in una sospensione batterica molto denso [20]. Per questo motivo, il campionamento placca pesante è stato minimizzato nel presente studio, prendendo solo una quantità sufficientemente visibile di placca sopragengivale. Tuttavia, la questione se è stato raccolto troppo poco la placca non può essere esclusa.
Contrariamente a questo studio, Aas et al. ha dimostrato che elevati conteggi di specie batteriche specifici sono stati associati con la salute, carie iniziazione, e la carie progressione utilizzando un saggio reverse-capture [21]. Inoltre, il presente studio ha analizzato campioni di placca aggregati rispetto a campioni da carie-sensibili siti nella cavità orale. Inoltre, l'indice /DMFT DMFT potrebbe essere considerato come un metodo rozzo per descrivere l'esperienza individuale di carie e trasmette alcuna informazione circa l'attività della carie. Una relazione tra la conta batterica placca e carie esperienza potrebbe essere stato ottenuto se l'indagine era stata eseguita su un livello specifico del sito e se i parametri carie-correlati, come la profondità, lo stadio e l'attività era stata presa in considerazione.
Conclusioni
A differenza dei campioni di saliva e il metodo di sedia-side, interprossimali campioni di placca pool analizzati utilizzando la "tecnica di ibridazione DNA-DNA a scacchiera" non sono emersi relazioni significative tra la conta batterica e l'esperienza di carie.
Note
Anette Carlén, Guglielmo Campus e Peter Lingström contribuito in maniera uguale a questo lavoro.
dichiarazioni
Ringraziamenti
Vorremmo ringraziare Ann-Britt Lundberg (Dipartimento di Cariologia, Università di Göteborg) e Susanne Blomqvist (Dipartimento di Microbiologia orale e Immunologia, Università di Göteborg) per il loro supporto tecnico. Un ringraziamento speciale a Dr. Nadia Al-Hazmi, testa di impronte dentali e deposito, il Dr. Sahar Bukhary, capo della divisione di Biologia orale, e il dottor Motaz Ghulman, Vice Preside di affari degli studenti presso la facoltà di odontoiatria in UAE, Regno di Arabia Saudita. Lo studio è stato sostenuto dal Ministero dell'Istruzione Superiore saudita.
Interessi concorrenti
Gli autori riportano conflitti di interesse.
Contributi degli autori Francoforte sul partecipato al disegno dello studio, effettuato la raccolta e campionamento dei dati , correva l'analisi "a scacchiera DNA-DNA ibridazione", eseguita l'analisi statistica ed è stato responsabile per la scrittura del manoscritto. AC ha partecipato alla progettazione studio e supervisionato la stesura del manoscritto. GC assistito nell'analisi statistica e ha contribuito alla redazione del manoscritto. PL ha partecipato alla progettazione studio e supervisionato la stesura del manoscritto. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.
