odontogena
Abstract
sfondo
cheratina che producono cisti odontogene (KPOCs) sono un gruppo di lesioni cistiche che sono spesso aggressivi, con alti tassi di recidiva e multifocalità. KPOCs incluso orthokeratinised cisti odontogena (OOC) e le cisti odontogene paracheratosiche, che ora sono considerati veri e propri tumori denominati tumori odontogeni keratocystic (KCOTs). GLUT1 è un trasportatore proteina che è coinvolta nella diffusione attiva di glucosio attraverso le membrane cellulari e che è sovraespresso nei tumori in stretta correlazione con il tasso di proliferazione e di positroni tomografia ad emissione (PET) i risultati di imaging.
Metodi
Una serie di 58 cheratina che producono cisti odontogena è stata valutata istologicamente ed immunoistochimica in termini di espressione GLUT1. Diversi dati sono stati correlati con il modello beta di regressione in relazione al tipo istologico e l'espressione immunoistochimica di GLUT1, che è stato quantificato utilizzando due metodi morfologici diversi.
Risultati
casi KPOC composti 12 e 46 OOCs KCOTs, quest'ultimo corrispondente a 6 sindromica e 40 KCOTs sporadici. espressione GLUT1 era molto bassa nei casi OOC rispetto ai casi KCOT, con differenze statisticamente significative quando la quantificazione è stata considerata. Diversi modelli GLUT1 di localizzazione sono state rivelate da immunostaining, con le cellule parabasali che mostrano maggiore reattività in KCOTs. Tuttavia, tra KCOTs casi, espressione GLUT1 è stato in grado di stabilire le differenze tra i casi sindromici e sporadici.
Conclusioni
espressione GLUT1 una distinzione tra OOC e casi KCOT, con significativamente più alta espressione in KCOTs, ma non distinguere tra sindromica e sporadiche casi KCOT. Tuttavia, date le caratteristiche strutturali di KCOTs, abbiamo ipotizzato che la metodologia di imaging PET probabilmente non è uno strumento diagnostico utile per KCOTs. Sono necessari ulteriori studi di espressione GLUT1 e l'esame PET in serie KCOT per confermare quest'ultima ipotesi.
Parole
glucosio proteina trasportatrice immunoistochimica cheratina produttrici odontogena cisti Keratocystic tumore odontogeno Orthokeratinised odontogena cisti positroni tomografia ad emissione di sfondo
Keratin- producono cisti odontogene (KPOCs) costituiscono un gruppo eterogeneo di lesioni cistiche che sono spesso aggressivi nel carattere, con alti tassi di recidiva e multifocalità [1], associata ad una marcata attività proliferativa [2, 3]. Lo spettro lesionale di KPOCs comprende cisti principalmente orthokeratinised odontogene (OOC) e cheratocisti odontogene, che, secondo le linee guida dell'OMS [4] si fa riferimento anche come keratocystic tumori odontogeni (KCOTs), in accordo con KCOTs essere veri escrescenze tumorali. Una gestione efficace di queste lesioni cistiche è oggetto di discussione frequente [5] e la trasformazione maligna è possibile, anche se molto rara [6].
glucosio, come fonte di energia primaria, entra intracellulare da una famiglia di trasportatori chiamato glutei, di cui almeno 13 membri sono ora sappiamo con espressione specifica delle cellule [7]. All'interno di queste famiglie, GLUT1 o glucosio eritrociti transporter è sovra-espresso nei tumori, particolarmente nelle lesioni maligne, come il glucosio è la principale fonte energetica di queste escrescenze neoplastiche [8]. Questo si basa sull'uso di una metodologia di imaging, la tomografia cosiddetta emissione di positroni (PET) da solo o in combinazione con la tomografia computerizzata (PET-CT), che ha utilizzato come radiotracer l'analogo del glucosio 18F-fluorodeossiglucosio (18FGD) [9].
nella zona di testa e collo, GLUT1 stato anche sovraespresso in momenti particolari in alcuni tumori benigni [10, 11], in particolare quelli con attività proliferativa segnato [12]. Allo stesso modo, in alcuni tumori benigni odontogeni con alti tassi di recidiva, è stato notato che GLUT1 sovraespressione, nella misura in cui può essere utile per il PET o PET-CT per valutare il ripetersi di questi tumori benigni [13]. Tuttavia, nella nostra conoscenza, espressione GLUT1 non è stato studiato in KPOCs con un alto tasso di recidiva, che sono attualmente considerati come un vero tumori odontogeni con un'alta probabilità di recidiva [1, 4, 5].
Nella presente studio, abbiamo voluto analizzare, per la prima volta a nostra conoscenza, espressione GLUT1 in una serie di KPCOs, per differenziare sottotipi istologici e valutare il potenziale per l'uso della PET nella diagnosi di queste lesioni, simile a quanto riportato in altri tumori benigni della testa e del collo, con tassi di recidiva elevati [13].
Metodi
Abbiamo studiato 58 casi di KPOCs che sono stati diagnosticati nel corso di un periodo di 10 anni (2005-2015) presso il Dipartimento di Patologia di la Fe University Hospital, Valencia, Spagna. materiale istologico è stato recuperato dal deposito. Il nostro lavoro faceva parte di un progetto precedentemente approvato dal nostro Institutional Review Board (Comitato Etico de Investigación Clínica -CEIC-) (protocollo n. 2013/0045) e gli orientamenti delineati nella Dichiarazione di Helsinki, riveduta a Seul -Corea- 2008 sono state seguite scrupolosamente. Prima di eseguire chirurgia orale, consenso informato scritto è stato ottenuto in tutti i pazienti, comunicando la partecipazione dei propri campione bioptico orali in questo studio immunoistochimica. Abbiamo scelto casi utilizzando una base di dati diagnosi patologica (Pat Win® versione 4.1.4). Abbiamo eseguito una di 10 anni di ricerca retrospettiva impiegando i termini di ricerca "cheratocisti", "cisti primordiale", "keratocystic tumore odontogeno", "orthokeratinised cisti odontogena", e "cisti cheratinizzato", comprendere la variegata nomenclatura [14] usata in queste lesioni .
Tutte le sezioni istologiche originali sono state esaminate al microscopio da due osservatori (BVS, FVS), e sono stati riclassificati secondo le linee guida dell'OMS del 2005 (4) e criteri diagnostici descritti nella OOC [15, 16]. I dati clinici, radiologici, e chirurgiche su tutti i pazienti sono stati raccolti dalle cartelle cliniche che utilizzano la piattaforma Mizar® 2.0 con l'ausilio del mirino Luna® 3.0. Abbiamo notato i seguenti dati: età; Genere; posizione della lesione (mandibolare e /o mascellare); /radiologici dati clinici di follow-up, il numero di recidive; e tutti i dati clinici, patologici, o genetiche suggeriscono un'associazione sindromica. Abbiamo utilizzato i criteri di Kimonis et al. [17] per diagnosticare la sindrome del carcinoma basocellulare nevoide (NBCCS).
Sezioni 5 micron di spessore sono stati tagliati dai blocchi inclusi in paraffina originali e montati su vetrini poli-Llysine- rivestito prima della colorazione immunoistochimica. Smascheramento procedeva a 97 ° C per 20 minuti in una soluzione ad alto pH EnVision FLEX Target Retrieval, seguita da lavaggio per 5 min in EnVision FLEX tampone di lavaggio. GLUT 1 è stata immunostained utilizzando un anticorpo policlonale concentrato (Master Diagnostica, Granada, Spagna), a 1/50 di diluizione. Il tempo di incubazione è di 20 minuti e la colorazione è stato visualizzato utilizzando il sistema ad alta pH EnVision FLEX. sezioni placentare e eritrociti membrane serviti, rispettivamente, come esterna ed interna, controlli di colorazione positivi e controlli negativi sono stati tratti test di simulazione-macchiato (l'anticorpo primario è stato sostituito da tampone fosfato salina -PBS-).
GLUT 1 immunostaining a il livello epiteliale di KPOC è stata quantificata utilizzando il sistema di microscopia digitale Leica DMD108 (Leica Microsystems
©, Wetzlar, Germania) e due diverse procedure. Innanzitutto, lo spessore (valori da 0 a 100%) dell'epitelio segnata da GLUT1 stato misurato. In secondo luogo, un punteggio immunoreattività per GLUT1 (IRS-GLUT1), sulla base della IRS descritto da Remmele et al. [18], è stato istituito. IRS valuta due parametri: intensità immunocolorazione (0 = assente; 1 = debole, 2 = moderata; 3 = forte) e la percentuale di cellule marcate (valori da 0 a 4: 0 = 0%; 1 = 1-25%; 2 = 25-50%; 3 = 50-75%; 4 = 75-100%). Prodotto di entrambi i parametri (fornisce i valori da 0 a 12) IRS. Inoltre, la posizione di immunostaining (basale, soprabasale, intermedio o superficiale) è stata registrata.
I risultati ottenuti sono stati espressi come la media, la deviazione standard (SD), gamma mediana e interquartile per ogni tipo lesionale. Per contrastare le differenze nell'espressione di GLUT1, lo spessore percentuale di dell'epitelio macchiata e punteggio IRS sono stati confrontati, utilizzando il modello beta di regressione, ridimensionamento delle variabili "punteggio" e "spessore percentuale macchiato" presso gamma [0-1]. L'analisi statistica è stata effettuata utilizzando il software R statistiche, la versione 3.1.2, si considera un valore di P inferiore a 0,05 come indicativo della significatività statistica.
Risultati
Dopo la revisione istologica, i 58 KPOCs sono stati classificati, utilizzando i criteri WHO, in 46 e 12 KCOTs OOCs. Dei 46 KCOT casi, 6 sono stati considerati sindromica KCOT (S-KCOT), perché sono stati anche notato anche in altre lesioni o anomalie compatibili con la presenza di NBCCS. La tabella 1 riassume i dati epidemiologici, così come la frequenza delle recidive, sulla base di informazioni fornite dal follow-up clinico e radiologico. In particolare, la diagnosi in nessun caso nella nostra serie è stata eseguita utilizzando l'imaging PET.Table 1 epidemiologici e dati di follow-up
tipo lesionale
N ° casi
medio età (anni)
M /F rapporto
Follow-up
un
% Ricorrenza
Località
b
Mb sull'oggetto -
83,33%
OOC
12
35,50 ± 12,10
7/5
39,0 ± 26 , 01
0%
Mx sull'oggetto -
16,66%
Mb sull'oggetto -
75,00%
NS-KCOT
40
45,67 ± 21,20
21/19
29,6 ± 31,04
35%
Mx
-
22,50%
Mb & amp; Mx sull'oggetto -
2,50%
Mb
-
33,33%
S-KCOT
6
23,00 ± 18,07
1/5
112,0 ± 76,10
100%
Mx sull'oggetto -
16,33%
Mb & amp; Mx sull'oggetto -
50,00%
una clinico-radiologico follow-up medio espresso in mesi
B Mb: mandibolare; Mx: mascellare
S-KCOT (sei casi) colpiti cinque femmine e un maschio, di età compresa 9-54 anni, e l'età media dei pazienti al momento della diagnosi era di 23 ± 18,07 anni. Tutti i pazienti avevano recidive; il numero medio di recidive è stato di 3 ± 1,41 nel corso di un periodo medio di follow-up di 112 ± 76,1 mesi. Le lesioni si sono verificati in mandibola e della mascella (tre pazienti), mandibola da solo (due pazienti), e della mascella da sola (un paziente). La regione premolare è stato il più delle volte colpita, seguita dalle regioni molari e anteriori
non sindromica KCOT (NS-KCOT; 40 casi) si è verificato in 21 maschi e 19 femmine (rapporto M /F: 1,10). Con una media all'età di 45.67 ± 21,2 anni (range, 9-84 anni), e il 35% dei pazienti (14 su 40) ha avuto recidive (una media di 1,4 ± 0,6 ricadute) su 29,6 ± 31,04 mesi di follow-up. Di tutti i pazienti, 75%, 22,5% e 2,5% avevano lesioni nella mandibola, mascellare superiore, o entrambi, rispettivamente. La regione mandibolare premolare è stato più frequentemente colpita, e la regione anteriore meno colpite.
OOCs sono stati notati in sette maschi e cinque femmine, e l'età media alla diagnosi era di 35,5 ± 12,1 anni (range: 19-65 anni). Di tutti i pazienti, 83,5% aveva coinvolgimento mandibolare esclusivamente, e solo due avevano lesioni nella mascella. La zona mandibolare molare, seguita dalla regione mandibolare premolare era la sede più frequentemente colpita. Cinque dei dodici cisti (41,6%) sono stati associati con denti inclusi e sono stati inizialmente clinicamente e radiologicamente confusa con cisti dentigera. Nessun paziente OOC avuto lesioni multiple, e nessun paziente ha avuto recidive o sviluppati di un'altra lesione durante un periodo medio di follow-up di 39 ± 26,1 mesi (range 9-95 mesi), confermando una differenza significativa (p = 0.039
) rispetto a OOC contro tutti KPOCs in relazione alla recidiva.
Dopo aver eseguito l'immunoistochimica nella nostra serie KPOC (Fig. 1 e 2), abbiamo osservato che l'espressione GLUT1 era bassa e poco appariscente a OOC, mostrando solo una debole reattività citoplasmatica e membranosa, che è stato distribuito, nella basale, parabasale e strati intermedi di cistico, a volte con una predominanza nella reattività basale. Al contrario, immunoreattività è stato maggiore nei KCOT, con più pronunciata immunostaining membranosa in parabasali rispetto a cellule basali. cellule intermedie di KCOT sono stati etichettati, ma con immunostaining moderata, spesso un po 'superiore a quello delle cellule basali. Inoltre, abbiamo osservato che GLUT1 immunostaining era molto simile, sia in intensità e posizione, in S-KCOT e casi di NS-KCOT. Figura. espressione 1 GLUT1 in KCOT e OOC. KCOT (a, b) mostra un GLUT1 pronunciato immunocolorazione con un pattern prevalentemente membranosa (a). Immunoreattività è particolarmente marcato nel parabasale e livelli di epitelio intermedi (b). Debole immunostaining GLUT1 a OOC (C e D), con un pattern citoplasmatico e leggermente membranosa granulare, alquanto più pronunciata a livello basale (d). (GLUT1, 200x e 400x)
Fig. espressione 2 GLUT1 in KCOT e OOC. Vista panoramica e dettagli di GLUT1 immunostaining in KCOT (a, b, c, d), e campioni OOC (E, F, G e H), visualizzando la diversa percentuale dello spessore epiteliale con GLUT1 immunocolorazione. Eritrociti (asterischi) appare con una etichettatura intenso, come un controllo interno positivo. (GLUT1, 100, 200x e 400x)
Per quanto riguarda la quantificazione di espressione GLUT1, l'IRS-GLUT1 (punteggio con valori che vanno da 0 a 12) risultati numerici sono stati generalmente bassi (Tabella 2), in particolare nei casi OOC (punteggio medio: 3.84 ± 2.93) rispetto ai casi KCOT (punteggio medio: 5.53 ± 2.62). Sia rispetto punteggi medi, utilizzando il modello di regressione beta, un trend statistico vicino alla significatività (p = 0,057
) è stato trovato, in relazione al IRS di gruppo OOC, che erano inferiori a quelli del gruppo KCOT. Allo stesso modo tra i casi KCOT, i casi S-KCOT hanno mostrato una leggermente superiore IRS (6.28 ± 2.13) che i casi NS-KCOT (IRS: 5.37 ± 2.72) e ai valori di IRS di entrambi i sottogruppi S-KCOT e NS-KCOT, anche se con nessuna differenza significativa (p = 0,477
) .table 2 GLUT-1 espressione in casi KPOC
al contrario, nel valutare l'espressione di una percentuale dello spessore epiteliale GLUT1 + (Tabella 2) (Fig. 2), si scoperto che i casi OOC hanno uno spessore più piccolo (31.46 ± 19.94%) con GLUT1 + immunocolorazione di casi KCOT (56.61 ± 22.34%), e la differenza era statisticamente significativa (p = 0,002
). Pertanto, l'analisi dello spessore percentuale dell'epitelio GLUT1 + colorazione permesso discriminazione dei due sottotipi KPOC. Infine, in S-KCOT sottogruppo, lo spessore percentuale GLUT1 + immunocolorazione (66.42 ± 17.96%) è stata superiore a quella nei casi sporadici (NS-KCOT) (52,03 ± 22,60%), anche se con nessuna differenza significativa (p
= 0,128).
Discussione
nel presente studio, abbiamo analizzato per la prima volta a nostra conoscenza, l'espressione di GLUT1, un trasportatore proteina coinvolta nella captazione attiva del glucosio attraverso le membrane cellulari, in una serie di KPOCs, che costituiscono un gruppo eterogeneo di lesioni cistiche odontogeniche, che sono spesso aggressivi nel carattere, con alti tassi di recidiva e multifocalità [1], e sono associati con una marcata attività proliferativa [2, 3].
espressione GLUT1 ha un rapporto importante con metodologia 18FGD-PET, un rapido sviluppo modalità funzionale imaging che ha dimostrato grande promessa nei settori primario, ricorrenti e rilevamento del tumore metastatico, nonché nella pianificazione e monitoraggio della terapia di vari tumori [19] .
GLUT1 o trasportatore di eritrociti del glucosio è il membro più noto della famiglia dei trasportatori Gluts insulino-indipendente che sono sovraespresso nelle lesioni tumorali [7], in particolare quelle maligne, dato l'aumento del consumo di glucosio presente nelle cellule tumorali necessario per fornire energia per la proliferazione cellulare [8]. espressione GLUT1 in diversi modelli di crescita del tumore è stata strettamente correlati, in primo luogo, con il tasso di proliferazione cellulare, e in secondo luogo, con l'efficacia della metodologia 18FGD-PET come tecnica di imaging diagnostico [20], dato che, come il glucosio, 18FDG attraversa la membrana cellulare tramite glutei, quindi viene sottoposto a fosforilazione dall'esochinasi per formare FDG-6-fosfato. FDG-6-fosfato non viene metabolizzato ulteriormente, e si accumula nei tessuti con il metabolismo del glucosio attiva [21].
All'interno dello spettro lesionale di KPOC, sono state individuate forme cistiche di carattere relativamente innocui, come il cosiddetto OOC [ ,,,0],15, 16]; cheratocisti odontogene e inclusi anche forme aggressive, classicamente denominati [1] e oggi chiamati KCOT [4]. Questi ultimi mostrano lesioni marcate attività proliferativa [2, 3] e hanno un alto potenziale di recidiva [5], al punto da essere considerato una vera crescita tumore odontogeno [4].
Nei nostri risultati abbiamo verificato che l'OOC presente in basale, parabasale e strati intermedi un'espressione molto limitato di GLUT1. Comparativamente casi KCOT mostrano una elevata reattività, opera lo strato di cellule parabasali. Inoltre, i livelli di espressione di GLUT1 quantificati in OOC e KCOT mostrato una differenza statisticamente significativa (o erano vicini alla significatività statistica) in funzione dello spessore dell'epitelio cistico segnata rispettivamente GLUT1 o IRS-GLUT1,. Tuttavia, nel nostro studio, espressione GLUT1 non discrimina tra i casi sindromici e sporadici di KCOT.
Nei tumori, espressione GLUT1 è ben correlata con i tassi proliferativi cellulari dato il metabolismo del glucosio attiva dei tumori altamente proliferanti [21]. Questa relazione è stata confermata nel nostro studio le chiare differenze nella espressione di GLUT a OOC e KCOT. I nostri risultati sembra essere in accordo con quelli di altri studi che ha segnalato evidenti differenze nei tassi di proliferazione di entrambe le lesioni cistiche odontogeni, utilizzando vari marcatori immunoistochimici proliferative, come ad esempio Ki 67 [2] o ciclina D1 [2, 3]. espressione GLUT1 è stata fondata nei nostri casi KCOT, con maggiore intensità, in particolare a livello delle cellule parabasali, e rafforzato il ruolo delle cellule parabasali come elementi protagonisti della crescita del tumore di KCOT questi dati [2, 3]. Considerando che il tipo di trattamento eseguito è noto per avere una notevole influenza tassi di recidiva di KCOT [5], va osservato che, dato il carattere retroattiva del nostro studio, con vari e non omogenei trattamenti, non è possibile stabilire con certezza la relazione tra espressione GLUT1 e recidiva lesionale.
Un altro aspetto da considerare è il rapporto tra l'espressione della GLUT1 e l'efficacia di rilevamento del tumore con la PET o in combinazione PET-CT. Diversi studi di immunoistochimica hanno dimostrato la sovraespressione di GLUT1 nei tumori maligni umani e una correlazione tra l'espressione GLUT1 e progressione neoplastica [21]. Inoltre, la sovraespressione di GLUT1 è stato segnalato per essere strettamente legato alla 18FGD assorbimento sul PET, perché 18FGD è presa anche su via trasporto intracellulare da GLUT1 [21-25].
Possibili usi e applicazioni del PET sono, paradossalmente, non limitato a tumori maligni; pertanto, nella zona della testa a testa, è stato notato che alcuni tumori benigni [26], come adenoma pleomorfo [10], myofibroma [12] e adenoma ceruminous [11], dimostrano la positività di PET. Queste lesioni benigne sono spesso inclusi nella lista dei possibili errori e le insidie nella valutazione dei tumori della testa e al collo utilizzando il PET, ma questa conoscenza corretta in grado di fornire utili informazioni diagnostiche in un contesto clinico adeguato [26].
Entro tumori odontogeni , uno studio precedente [13] ha mostrato quattro casi di ameloblastoma, un tumore benigno con un tasso di recidiva alto, con reattività contro GLUT1 e positività in esame PET, postulando che il PET-TAC può essere utile nella diagnosi per immagini di recidive in ameloblastoma. In questo rapporto [13], GLUT1 immunostaining non è stato quantificato, per cui non è possibile confrontare i nostri risultati in KCOT con quelli riportati in ameloblastomas. D'altra parte, non c'è studio pubblicato per quanto riguarda l'uso della PET-TC nella diagnosi o di follow-up di KCOT, e nella nostra serie di KPOC, nessun caso sottoposto PET o l'esame PET-CT.
Tuttavia, nonostante questo quest'ultima limitazione, diversi punti suggeriscono che la metodologia PET non è uno strumento diagnostico utile nel caso di KCOT. In primo luogo, l'IRS-GLUT1 medio trovato nel nostro studio era basso (5,53 ± 2,62) su un eventuale punteggiatura massimo di 12, e un secondo aspetto molto importante da considerare è la struttura tumore. Così, KCOT è una lesione tumorale cistica dove GLUT1 reattività è limitato al rivestimento epiteliale. Otsuru et al. [13] hanno riportato un caso di ameloblastoma unicystic e tre tipi non unicystic. Curiosamente, ameloblastoma unicystic ha mostrato minore reattività GLUT1 e minore assorbimento di 18FDG rispetto ai tipi di tumori solidi [13]. Questa scoperta suggerisce che l'efficacia di 18FGD-PET è collegata, indipendentemente dalla reattività di GLUT1, al volume della massa tumorale [27]. Inoltre, l'ipotesi che la metodologia PET-CT non è probabilmente utile nel caso di KCOT, è stabilito perché l'assorbimento cellulare di 18FGD da KCOT non ha raggiunto livelli sufficienti a causare un SUVmax adeguata (valore massimo normalizzato). Ulteriori studi, analizzando l'espressione GLUT1 e PET in serie KCOT, sono necessari, a nostro avviso, per determinare se l'analisi di espressione GLUT1 in ameloblastoma è applicabile a KCOT e se 18FGD-PET è uno strumento utile nella diagnosi di KCOT recidiva.
Conclusioni
espressione GLUT1 una distinzione tra OOC e casi KCOT, con significativamente più alta espressione in KCOTs, ma non distinguere tra i casi KCOT sindromiche e sporadici. Tuttavia, date le caratteristiche strutturali di KCOTs, abbiamo ipotizzato che la metodologia di imaging PET probabilmente non è uno strumento diagnostico utile per KCOTs. Sono necessari ulteriori studi di espressione GLUT1 e l'esame PET in serie KCOT per confermare quest'ultima ipotesi
Abbreviazioni
GLUT1:.
eritrociti glucosio trasportatore 1
KPOC:
cheratina che producono cisti odontogena
KCOT:
keratocystic tumore odontogeno
OOC:
orthokeratinised cisti odontogena
NBCCS:
nevoide basocellulare carcinoma sindrome
PBS:
tampone fosfato salina
IRS: punteggio
immunoreactive
PET:
tomografia ad emissione di positroni
CT: la tomografia computerizzata
18FGD:
18F-fluorodeossiglucosio
OMS:
Organizzazione mondiale della sanità
< DFN> S-KCOT:
sindromica keratocystic tumore odontogeno
NS-KCOT:
sindromica keratocystic tumorali non odontogena
dichiarazioni
Ringraziamenti
gli autori ringraziano David Hervas Marín per la sua assistenza con l'analisi statistica e la revisione critica dello studio
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concorrenti. interessi
Gli autori dichiarano di non avere interessi in gioco
autori contributi
disegno dello studio:. BVS. Raccolta di campioni biologici: BVS, FVS. revisione istopatologico: BVS, FVS. Il trattamento dei campioni di studio /immunoistochimica: FVS. Analisi dei dati: BVS, nomi lunghi. Interpretazione dei risultati: BVS, nomi lunghi. La scrittura di prima stesura: BVS, nomi lunghi. La scrittura di dratf finale: FVS. revisione critica del manoscritto: Tutti gli autori. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.
