parodontale
Abstract
sfondo
parodontale infiammazione è caratterizzata da lesioni nei tessuti collagene, epiteliali, ossei. Le ipotesi da testare sono stati rapporto tra la S100, BCL2 e mieloperossidasi nei tessuti gengivali (MPO non influisce sul livello di S100, BCL2). L'obiettivo di questo studio era di indagare di espressione S100, espressione BCL2 e l'espressione mieloperossidasi nel infiammazione parodontale.
Metodi
27 pazienti (epulis a cellule giganti) e 30 pazienti (acute e infiammazioni croniche) sono stati inclusi nello studio per l'espressione S100, espressione BCL2 e di espressione mieloperossidasi immunoistochimica e ematossilina - eosina.
Risultati
Giant-cellule nel epulis positività per la mieloperossidasi è stata osservata in 100% Tuttavia, solo il 75.31% di Giant-cellule sono risultati positivi per BCL2 espressione. Acuta 98,2%, e cronica 89.28% infiammazione è positivo significativo per la mieloperossidasi. I risultati immunoistochimici di s100, Bcl-2 e mieloperossidasi in strati epiteliali hanno mostrato il risultato di 100%, 82,2%, 100% di cellule positive in% acuta e 100, 78.25%, 100% nel processo cronico di infiammazione rispettivamente.
Conclusione
I risultati indicano che la patogenesi dell'infiammazione parodontale potrebbe comportare inibizione della morte cellulare, attraverso la sovraespressione di bcl-2, a causa di identificare fattori mieloperossidasi (provocare danno al DNA dal prodotto della catalisi). I livelli più elevati di attività s100 sono stati trovati in siti con infiammazione cronica.
Sfondo
infezioni batteriche sono più importanti agenti eziologici coinvolti nella periodontite acuta e cronica, è malattia multifattoriale che porta alla distruzione del parodonto osso [1]. cellule infiammatorie infiltrazione è stato il risultato di plasmacellule parodontali: neutrofili, T- & amp; linfociti B e macrofagi [2]. lesioni parodontali sono stati caratterizzati da una persistenza di infiltrarsi cellule infiammatorie, che può essere responsabile per l'osso collagene resorcinolo. Una ricerca di Bælum V. & amp; Lopez R. [3] ha dimostrato che la malattia parodontale colpisce tra il 10% e il 15% della popolazione mondiale, essendo la principale causa di perdita dei denti.
Cellule infiammatorie (cellule del plasma) hanno espresso in mieloperossidasi. neutrofili polimorfonucleati sono in gran parte hanno espresso il mieloperossidasi in plasmacellule [4]. Il gene mieloperossidasi è localizzato sul cromosoma 17 (17q23.1) [5].
Mieloperossidasi (MPO) hanno catalizzato la sintesi di acido ipocloroso microbicida che consente la difesa contro i batteri [6]. Inoltre, le plasmacellule sintetizzano acido ipocloroso da H
2O 2 e NaCl. Radicale ossidrile (OH) è principalmente attiva nel dannosi importanti molecole come le proteine del DNA e lipidi [7]. Il perossido di idrogeno (H 2O 2) essendo un potente agente di specie di ossigeno, è in grado di attraversare la membrana nucleare e danneggiare il DNA. [8] Vi è un crescente sostegno per l'affermazione che l'infiammazione induce danni al DNA che porta ad apoptosi nelle cellule parodontali [9] Inoltre, gli stimoli apoptotici possono innescare l'apoptosi attraverso meccanismi diversi, tra cui i recettori di morte cellulare specifici e ligandi, come CD95 [10 ], segnali di stress, inducendo le molecole direttamente o indirettamente, l'apoptosi, via p53. Bcl2 è un membro della famiglia di proteine anti-apoptotiche che possono prevenire o ridurre la morte cellulare indotta da una varietà di stimoli [11]. Il gene BCL-2 è stata identificata nella t umana cromosoma (14, 18) [12]. Il percorso di morte intrinseca viene avviata dal rilascio mitocondriale di citocromo c
, un processo che è inibito da proteine BCL2 anti-apoptotici [13].
Proteine S100 hanno espresso nel citoplasma dei neutrofili, monociti, macrofagi attivati, e cheratinociti e rilasciato durante l'attivazione o la morte di queste cellule. La famiglia del gene S100 include almeno 13 membri che individuano come cluster sul cromosoma 1q21 [14]. proteine S100 noto anche come antigeni L1, calgranulin A e B, macrofagi inibitorio della migrazione, fattore-related protein (MRP) e l'antigene fibrosi cistica, hanno diverse funzioni nelle reazioni infiammatorie [15].
I risultati di Sun-Hee Heo et . al. [16] hanno mostrato i pattern di espressione di S100A2 nei tessuti gengivali durante la stimolazione lipopolisaccaride batterico. espressione S100A2 era upregulated dal lipopolisaccaride batterico.
Abbiamo ipotesi afferma che non vi è il rapporto tra la S100, BCL2 e mieloperossidasi nei tessuti gengivali (MPO influisce il livello di S100, BCL2).
Lo scopo di questo studio è quello di confrontare i livelli di espressione di S100, BCL2 e MPO nei tessuti gengivali in diversi stadi della malattia parodontale e rispetto ai epulis a cellule giganti.
Metodi
selezione dei pazienti e dei tessuti gengivali raccolta
i campioni di studio hanno incluso l'parodontale e epulis tessuti dei pazienti. I soggetti sono stati divisi in due gruppi uguali:
gruppo di pazienti (gruppo 1). esemplari di granulomi a cellule giganti sono stati raccolti da 27 persone che hanno avuto una diagnosi di morfologicamente gigante granuloma cellulare (otto maschi e 14 femmine, di età compresa dai 30 ai 70 anni, età media, 47,51 ± 12,37 anni)
. Gruppo di controllo (gruppo 2) consisteva di 30 pazienti che erano morti in Ospedale regionale di Sumy. I pazienti avevano varie diagnosi somatiche (non complicanze aterosclerotiche) e dentale - parodontit. 17 maschi e 13 femmine, di età compresa da 43 a 69 anni, età media, hanno indagato 57.33 ± 8,31 anni. Gli esemplari di gengiva invaso sono stati raccolti durante le mascelle procedure di taglio. Dopo campioni di gruppo 2 di tessuto colorati con ematossilina eosina pippo, tutti i campioni sono stati divisi in due gruppi (acuta e cronica). Gruppo di controllo ha due sottogruppi. sottogruppi acuta - 13 (5 maschi e 3 femmine, di età compresa da 43 a 69 anni, età media, 54.38 ± 7,9 anni). sottogruppi croniche -. 17 (7 maschi e 15 femmine, di età compresa da 44 a 68 anni, età media, 59,58 ± 8,11 anni)
consenso informato scritto è stato ottenuto da tutti i soggetti di studio in conformità con le linee guida stabilite dal Consiglio Superiore di Sanità Ucraina. Il presente studio è stato approvato dal Sumy State University (Protocollo n 5/2012.)
Ematossilina e eosina (H & amp; E).
Macchie sono stati utilizzati per almeno un secolo e sono ancora essenziali per l'identificazione di vari tessuti tipi e la variazione morfologica.
Immunostainings
Per S100, BCL2 e MPO sono state eseguite fissato in formalina (pH 7,4) dei tessuti. sezioni di tessuto incluse in paraffina sono stati trattati topo dy monoclonale anti-S100, anti-BCL2 e anti-mieloperossidasi (Thermo Fisher Scientific UK). In breve, 4 micron di spessore sezioni di tessuto sono stati alla rimozione della cera in xilene e sono stati messi in acqua con alcoli graduati. recupero dell'antigene è stata eseguita da microonde vetrini in 10 mM tampone citrato (pH 6,2) per 30 minuti ad alta potenza, secondo le istruzioni del produttore. Per rimuovere l'attività perossidasica endogena, le sezioni sono state trattate con perossido di idrogeno appena preparato 1,0% al buio per 30 minuti a 37 ° C di temperatura. Il legame di anticorpi non specifico è stato bloccato per mezzo di blocco siero. Le sezioni sono state incubate per 30 min a 37 ° C di temperatura, con gli anticorpi primari contro s100, bcl2 e mieloperossidasi diluito 1: 100 in soluzione salina tamponata pH fosfato (PBS) 7.2 poi un lavaggio con PBS tripla segue. Anti (IgG mouse) -horseradish coniugato perossidasi (01:40 000 diluizione) è stata soddisfatta per il rilevamento della S100, Bcl2 e MPO anticorpi primariy, quindi le sezioni sono state incubate per 20 min a 37 ° C di temperatura. Il colore è stato visualizzato da DAB.
L'aspetto dei fattori positivi è stato rilevato semiquantitativamente contando di cellule giganti positivi nel campo visivo.
I dati sono stati analizzati utilizzando il software STATISTICA 8.0, versione utente STA862D175437Q. I risultati sono stati presentati come media ± SD. Il test normalizzare stato uso prima analisi dei dati. Inoltre, il metodo di Student non parametrico è stato applicato per eseguire una semplice analisi comparativa. Il valore di P & lt; 0,05 sono stati considerati per essere un significativo.
Risultati
I gruppi 1 e 2 di uomini e donne consistevano per lo più di età compresa tra 30 a 70 anni. Gruppo 1 cellule giganti si sono verificati nella mascella inferiore (55%) più frequentemente che nella mascella superiore. Nel gruppo 2 i pazienti sono stati suddivisi in 13 con acuta e 17 con infiammazioni croniche.
In Fig. 1a Un abbiamo osservato infiltrazione di cellule di piccola dimensione in infiammazione acuta. infiltrazione di cellule significativa e proliferazione dell'epitelio (fig. 1b) sembravano essere più intenso nella infiammazione cronica. cellule infiammatorie acute e croniche sono in circolazione leucociti, cellule del plasma e macrofagi tissutali. Fig 1 I tessuti parodontali ematossilina e eosina macchiato (x100 ingrandimenti) A (a) - pint-size cellule infiltrazione con edema a sovrapposizione, B (a) - strati dell'epitelio, C (b) - grandi cellule infiltrazione con edema a sovrapposizione, D (a) - proliferazione epiteliale, E (c) - zona emorragia, F (c) - cellule giganti
periferico epulis cellule giganti è mostrato in Fig. esame microscopico 1c ha rivelato il tessuto con l'abbondanza di cellule giganti (Fig. 1c F), tessuto connettivo fibroso, zone di emorragie (Fig. 1c E) e pochi capillari. Non c'era alcun segno di malignità. L'infiammazione cronica quando i macrofagi non riescono a disintegrato varie particelle, si fondono e formano cellule giganti multinucleate. Inoltre, cellule giganti morfologicamente distinte appaiono anche in alcuni tumori anche.
S100, Bcl2 e MPO espresso in cellule giganti. espressione S100, espressione BCL2 e l'espressione mieloperossidasi a cellule giganti epulis sono mostrati in figura. 2. In immunoistochimica, il 100% delle cellule giganti sembrava essere positivo per la mieloperossidasi, mentre solo il 75,31% di cellule giganti sono stati positivi per Bcl-2 (P & lt; 0,05). Per il fatto S-100 ha espresso nel 10,72% di cellule giganti. Mieloperossidasi è fisiologicamente espresso in cellule plasmatiche di epulis 87,69%. S100 e Bcl-2 hanno espresso in cellule plasmatiche 24,34% (P & lt; 0,05) e 11,28%, rispettivamente, Bcl-2 e mieloperossidasi espressione di essere debole o assente nel tessuto connettivo. Fig 2 L'espressione di S100, bcl2and mieloperossidasi nel tessuto gengivale (x100 ingrandimenti): A - Strati di dell'epitelio con l'espressione mieloperossidasi, B - Cellule del sangue infiltrazione con l'espressione mieloperossidasi, C - pericellulare ed edema perivascolare, D - Cellule del sangue infiltrazione con l'espressione mieloperossidasi , e - strati di dell'epitelio con l'espressione mieloperossidasi e la proliferazione, F - cellule giganti con l'espressione mieloperossidasi, G - stroma fibroblastica, H - cellule del sangue infiltrazione con l'espressione mieloperossidasi, I - edema pericellulare e perivascolare, G - Blood cellule infiltrazione con 2expression Bcl , K - strati di dell'epitelio con un alto livello di Bcl-2 espressione, L - strati di dell'epitelio con 2expression BCL, N - stroma fibroblastica, M - cellule del sangue infiltrazione con Bcl-2 espressione, O - edema pericellulare e perivascolare, P - Giant cellule con Bcl-2 espressione, Q - cellule del sangue infiltrazione con basso 2expression BCL, R - Blood cellule infiltrazione con l'espressione S100, S - pericellulare ed edema perivascolare, T - strati di dell'epitelio con l'espressione S100, U - strati di dell'epitelio con basso espressione S100, V - stroma fibroblastica, W - cellule del sangue infiltrazione con l'espressione S100, X - stroma fibroblastica, Y - cellule giganti con "poveri" espressione S100
Il immunoexpression di S100, BCL2 fine di MPO (Gruppo 2) sono stati confermati dalla presenza di marrone citoplasma colorato in infiltrazione di cellule. In generale, s100 colorazione era più intensa nelle cellule plasmatiche. In infiammazione acuta S100 (Fig. 2) solo 36,2 ± 5,3% delle cellule sembrava essere positivo. L'infiltrazione di cellule, ha mostrato immunoreattività bcl2 capito 76,1 ± 3,3% (P & lt; 0,05) a processo acuto (Fig. 2). Mieloperossidasi è espressa in 98,2 ± 5,9% (P & lt; 0,01). Cellule positive in infiammazione acuta
figura 2 mostra i risultati della S100, BCL2 e di espressione MPO nel processo cronico
mieloperossidasi 82,. 28 ± 2,5% P & lt; 0,01 è stato espresso in infiltrazione cronica delle cellule plasmatica durante l'infiammazione. Bcl-2 è stato espresso in cellule plasmatiche croniche infiltrazione 55,67 ± 6,1% P & lt; 0.05. Тhe immunoexpression di S100 in infiltrazione di cellule ha mostrato il risultato di cellule positive 95,0 ± 0,31%.
Тhe immunoexpression di s100, BCL2 e MPO in strati epiteliali (processo acuto) hanno mostrato il risultato di 100%, 82,2 ± 2,93% e 100% rispettivamente. Nel processo cronico di infiammazione delle cellule positive sono demonstratrd S100 - 100%, bcl2 - 78,25 ± 4,23% e mieloperossidasi -. 100% rispettivamente
Discussione
Questo studio ha affermato che MPO è stato in grado di stimolare la più alta di espressione BCL2 in cellule dell'infiammazione durante il processo cronico e acuto. attività mieloperossidasi espresso nei neutrofili reclutati alla gengiva dopo insulti chimica o immunologica contribuisce alla distruzione dei tessuti. Meloperoxidase potrebbe influenzare la portata e /o la gravità delle malattie parodontali [17].
Alto livello di MPO è stato osservato in cellule giganti. Elevati livelli Bcl2 possono prevenire l'apoptosi cellulare, inducendo in tal modo le cellule infiammatorie rimanere localmente nel tessuto parodontale, causando conseguente eccessiva secrezione di citochine che porta alla progressiva distruzione dei tessuti parodontali [1]. Mieloperossidasi può essere liberato dai neutrofili attivati da degranulazione solo in livelli moderati [18], e la disponibilità BCL2 protegge le regioni. Citolisi di neutrofili nel corso della formazione infiammazione potrebbe fornire un meccanismo di rilascio [18, 19] e spiegare gli elevati livelli di mieloperossidasi e S100. Attività di S100A12 e proteina C-reattiva può essere marker di attività infiammatoria in parodontite cronica [20]. Studi precedenti hanno suggerito che l'apoptosi è coinvolto nella patogenesi della malattia parodontale infiammatoria [21]. È stato anche dimostrato che la frequenza più elevata di Bcl-2 provoca la distruzione parodontale progressiva [22].
Gamonall et all. [23] non ha trovato differenze statistiche in varions quantità di BCL2 in gengiva sana e in gengiva dei pazienti con malattia parodontale. I nostri studi hanno confermato la visione di Pandilova [24] e Ellis et all. [25] che la progressione cronica di diminuire l'infiammazione esprime Bcl-2. In fibroblasti gengivali umani con attivazione infiammazione bcl2 non è stata osservata in diverse fasi del epulis infezione e a cellule giganti. Sule Bulut et all. [26] I risultati indicano che la patogenesi di ciclosporina A crescita eccessiva gengivale indotta potrebbe coinvolgere l'inibizione dell'apoptosi e sovraespressione di bcl-2 nel contesto di alta siero ciclosporina A. nostro studio ha dimostrato un alto livello di espressione bcl2 e l'inibizione dell'apoptosi nelle cellule dell'epitelio gengivale. Crediamo che questo sia dovuto alle funzioni protettive dell'epitelio. In dell'epitelio gengivale S100 è anche legato alla fase di differenziazione [27]. Queste cellule positive sono noti per attivare i macrofagi o neutrofili [28]. Una ricerca di Saito et al. [29] hanno dimostrato numerose cellule epiteliali Bcl-2-positivo nelle biopsie gengivali da pazienti che stavano assumendo nifedipina e fenitoina, che indicano che questa proteina potrebbe essere coinvolto nello sviluppo di nifedipina indotto iperplasia gengivale. Noi crediamo che la presenza di proteina Bcl-2 non è un indicatore di corsi favorevoli a cellule giganti epulis.
S100 svolge un ruolo importante nella risposta immunitaria relative al parodontite. S100 si lega 2 Ca2 + e 2 ioni Zn2 +. Se Zn2 + si lega alla S100 diminuisce la sua Ca2 + affinità. S100 interagisce anche con p53 in maniera Ca2 + -dipendente, che colpisce la stabilità di interazione S100-p53 [30] interazione Suddetto S100-p53 porta alla inibizione dell'apoptosi durante l'infiammazione. La proteina Bcl-2 è un potente inibitore di morte cellulare, mentre la proteina p53 wild-type attiva la via apoptotica [5]. P53
mutata perde questa funzione e permette la proliferazione delle cellule neoplastiche. Bcl-2 modula anche la funzione di p53 e innesca la proliferazione cellulare e trasformazione [31].
Thr espressione di S100 sono state rilevate come proinfiammatorio fagociti cellule nei siti di infiammazione intestinale [32, 33]. malattie autoimmuni sistemiche (dermatomiosite, lupus eritematoso sistemico, malattia di Kawasaki, ecc) hanno chiara associazione con espressione S100 nei macrofagi infiltraton con degenerazione del tessuto [34, 35].
Conclusione
Indagini su marcatore bcl2 nelle cellule gengivali durante parodontale infiammazione abbiamo suggerimento che parodonto tessuti, continuamente esposti a infezioni batteriche possono contenere cellule con un alto livello di risultati mieloperossidasi che danno al DNA da prodotti della catalisi.
I più alti livelli di attività S100 sono stati trovati in siti con infiammazione cronica. I nostri risultati suggeriscono che una bassa espressione S100 può svolgere un ruolo importante nell'attività di cellule giganti in epulis a cellule giganti. Che è considerato essere i fattori più significativi di prognosi in gigante granuloma cellulare. Come risultato della nostra ricerca abbiamo creato un diagramma Fig. 3. Fig 3 S100, BCL2 e l'interazione proteina myeloperoxid durante l'infiammazione parodontale
Dichiarazioni
Ringraziamenti
Gli autori desiderano ringraziare il Laboratorio di Immunologia presso l'Sumy State University.
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concorrenti. interessi
Gli autori dichiarano di non avere interessi in gioco.
autori contributi
PCCF erano responsabili per il disegno dello studio. SCT analizzato e interpretato i dati. MTX ha scritto il rapporto. BFPP ha fatto il lavoro di laboratorio. RM, ha contribuito a redigere il manoscritto. Tutti gli autori hanno letto, commentato e approvato l'articolo finale.
