peri-implantare e parodontale
Abstract
sfondo
Per indagare la composizione microbica del biofilm a tessuti peri-implantari e parodontali infiammate nello stesso soggetto, utilizzando 16S rRNA sequencing .
Metodi
sopra- e sottomucosa, e campioni di placca sopra e sottogengivale sono stati raccolti a partire da 7 soggetti affetti da malati peri-implantare e dei tessuti parodontali. DNA batterico è stato isolato e geni 16S rRNA sono stati amplificati, progressive e allineata per l'identificazione dei generi di batteri.
Risultati
43734 sequenze chimera-impoverito, denoised sono stati identificati, corrispondente a 1 phylum, 8 classi, 10 ordini, 44 famiglie e 150 generi. Le famiglie più abbondanti o generi si trovano in supramucosal o placca sopragengivale erano Streptoccocaceae, Rothia
e Porphyromonas.
In sottomucosa della placca, la famiglia più abbondante o generi trovato erano Rothia, Streptococcaceae
e Porphyromonas
su impianti . I batteri subgengivali più abbondanti sulla denti erano Prevotella, Streptococcaceae,
e TG5.
Il numero di sequenze trovate per i generi Tannerella
e Aggregatibacter
su impianti differiva in modo significativo tra sedi sovranazionali e sottomucosa prima multipla testing. Le analisi hanno dimostrato differenze significative tra microbiomes su impianti e denti in biofilm sovranazionali o della sottomucosa e sovranazionali o sottogengivali.
Conclusione
tessuti peri-implantari e parodontali malate nei generi di batteri la stessa quota soggetto simile e basato sulla analisi dei taxa a livello genere composizioni biofilm non può spiegare le patologie potenzialmente distinti a protesi o denti. tessuti
Parole
profonda sequenziamento 16S rRNA sequencing Diseased peri-implantari Diseased tessuti parodontali sopragengivale placca sottogengivale placca biofilm Microbiologia Jörg Eberhard e Meike Stiesch contribuito in maniera uguale a questo lavoro
materiale supplementare elettronica
La versione online di questo articolo. (doi:. 10 1186 /1472-6831-14-157) contiene materiale supplementare, che è disponibile per gli utenti autorizzati.
Sfondo
Gli impianti dentali sono comunemente utilizzati per sostituire i denti mancanti in pazienti parzialmente edentuli o edentuli. L'infiammazione dei tessuti molli e duri peri-impianto è l'evento avverso più frequente e può compromettere la stabilità a lungo termine degli impianti osteointegrati. Mentre perimplantare affectes mucosite solo tessuti molli, perimplantiti coinvolge anche l'osso di sostegno. La prevalenza di perimplantiti durante 5-10 anni dopo l'osteointegrazione di successo sembra essere dell'ordine del 10% degli impianti e il 20% dei pazienti [1].
Fattori di rischio accettato per peri-implantare malattie correlate sono la scarsa igiene orale , una storia di parodontite e il fumo di sigaretta [2]. I biofilm sono state descritte in dettaglio utilizzando tecniche di ibridazione in perimplantiti [3-6] e recentemente con tecniche di sequenziamento high-throughput in impianti in mancanza di [7-9]. biofilm sopra che sottomucosa su impianti nei singoli soggetti non sono state descritte utilizzando tecniche di sequenziamento high throughput, anche se è stato dimostrato che la composizione di biofims sopragengivale influisce significativamente la formazione di biofilm subgengivale [10-12]. Di conseguenza, biofilm supramucosal possono anche determinare la composizione della microflora sottomucosa. Le proprietà di superficie diverse (composizione chimica, rugosità della superficie, superficie di energia libera) e l'architettura dei tessuti a protesi e denti possono compromettere l'adesione e la crescita di biofilm e batteri [13] e possono spiegare le differenze proposte in risposta infiammatoria a impianti e denti [ ,,,0],14].
Pertanto lo scopo del seguente studio è stato quello di caratterizzare ulteriormente la composizione microbica di sopra- e sottomucosa, repectively placche sopra e sottogengivale a impianti malati e denti.
Metodi
Soggetto selezione
I soggetti inclusi nello studio avevano siti almeno ≥30% con PD ≥4 mm ed evidente perdita di tessuto osseo radiografico. Tutti i pazienti sono stati parzialmente edentuli (non meno di 8 denti), con almeno 1 funzionamento dell'impianto orale restaurati con corone o protesi. I criteri di inclusione sono stati: (A) un impianto e denti che mostrano segni di infiammazione attiva (tessuto con segni manifesti di infiammazione (rossore e gonfiore), sanguinamento al sondaggio (BOP) e profondità della tasca (PD) ≥ 4 mm in almeno un sito e evidenza di perdita ossea radiografica), (B) protesi doveva operare per almeno 1 anno. I criteri di esclusione sono stati: (A) qualsiasi trattamento peri-impianto o parodontale 6 mesi prima del campionamento. (B) malattie sistemiche come il diabete mellito, (C) di fumare, (D) farmaco antibiotico o immunosoppressori nei 3 mesi precedenti. Impara una storia medica completa è stata registrata, seguita da esame clinico e radiografico. Il consenso informato è stato ottenuto e lo studio è stato approvato dal comitato locale etico di Hannover Medical School (n. 4348).
esame clinico
due dentisti esperti hanno esaminato tutte le materie. profondità della tasca è stata misurata utilizzando una pressione calibrata sonda parodontale (Hawe Click-Probe, Kerr Hawe SA, Bioggio, Svizzera). profondità di sondaggio è stato misurato al millimetro più vicino sulla scala. Sanguinamento al sondaggio è stata valutata dopo il sondaggio usando una misura dicotomica. Tutte le misurazioni sono state effettuate su 4 siti di tutti gli impianti e denti. depositi di placca sono stati registrati (presenza /assenza) senza colorazione, utilizzando una versione modificata prossimali Plaque Index (API) [15]
. Raccolta dei campioni
In ogni soggetto, l'impianto e il dente con le profondità più profonde sono stati scelti per la placca collezione. Dopo aver isolato l'area di campionamento con rotoli di cotone e delicata asciugatura con una siringa d'aria, 2 coni di carta endodontici sterili (Punti carta assorbente, VDW GmbH, Monaco di Baviera, Germania) sono stati utilizzati supramucosally o sopragengivale per raccogliere i biofilm. Successivamente, i supramucosal e sopragengivali placche residue sono state completamente rimosse con uno scaler dentale. Due punte di carta sterili sono stati quindi posti sottomucosa o subgengivale. I campioni sono stati riuniti separatamente per ogni impianto, e con i denti la posizione e sono stati collocati in 2 ml cryotubes (Eppendorf, Amburgo, Germania) e immediatamente congelati a -80 ° C prima della trasformazione.
Estrazione del DNA e sequenziamento
estrazione del DNA
punti di carta utilizzati per il campionamento sono stati trattati con soluzione di lisozima 360 microlitri per 30 min a 37 ° C (20 mg /ml lisozima, 20 mM TrisHCl, 2 mM EDTA, 1,2% Triton X100, pH 8,00), seguita da proteinasi K digestione per 30 minuti a 56 ° C in 400 microlitri tampone aL (Qiagen, Hilden, Germania). Gli enzimi sono stati inattivati mediante riscaldamento a 95 ° C per 15 min. sono stati aggiunti sterili perle di vetro da 0,5 mm (Roth, Karlsruhe, Germania) e le cellule batteriche sono stati interrotti dalla vigorosa agitazione (6500 giri al minuto, 3 x 20s, 15s Break) con un mulino tallone Precellys 24 (Bertin Technologies, Montigny-le-Bretonneux, Francia ). Successivamente, il DNA totale è stato purificato con il QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germania) secondo il protocollo del produttore per i batteri gram-positivi (QIAamp® DNA Mini e Mini Sangue Handbook, terza edizione, Appendice D).
16S l'amplificazione rDNA e preparazione del campione
Da ogni campione, un frammento di circa 550 bp del gene 16S rRNA è stato amplificato utilizzando il 27f vasta gamma primer (5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3') e 521r (5'-ACCGCGGCTGCTGGCAC-3 '; entrambi Eurogentec, Seraing, Belgio). I primer di mira sequenze di DNA conservate che fiancheggiano le V1 e V3 regioni ipervariabili all'interno del gene 16S rRNA. PCR è stata eseguita su un termociclatore TProfessional (Biometra, Göttingen, Germany) in un volume di reazione totale di 50 microlitri. Il mix PCR conteneva circa il 20 ng del DNA stampo, 200 Nm di ciascun primer, 1x tampone PCR (tra cui il cloruro di magnesio 1,5 mm; Qiagen, Hilden, Germania), 1,5 U HotStar Taq polimerasi (Qiagen, Hilden, Germania), 200 mm ogni dNTP (Roth, Karlsruhe, Germania) e acqua PCR-grade (Roche, Penzberg, Germania). condizioni di PCR erano le seguenti: denaturazione iniziale a 95 ° C per 15 min; 32 cicli di amplificazione, comprensivi di denaturazione a 94 ° C per 1 minuto, appaiamento a 52 ° C per 40s, allungamento a 72 ° C per 1 min; estensione finale a 72 ° C per 10 min. Le reazioni di PCR sono stati separati su un gel di agarosio 1,0% (Agarose MP; AppliChem, Darmstadt, Germania) e purificato usando il QIAquick Gel Extraction Kit (Qiagen, Hilden, Germania). Gli ampliconi purificate di ogni campione sono stati utilizzati come modello per una seconda fase PCR con il primer 27f-Adab (5'-CCTATCCCCTGTGTGCCTTGGCAGTCTCAGAGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3') e un individuo inverso fondo 521r-MID_X (5'-CCATCTCATCCCTGCGTGTCTCCGACTCAGXXXXXXXXXXXACCGCGGCTGCTGGCAC-3 '; XXXXXXXXXXX = unico MID-tag) contenente una unica sequenza di codice a barre Multiplex-Identifier (MID). Amplificazione chimica era lo stesso come sopra descritto, tuttavia, 100 ng di DNA stampo sono stati usati per reazione, la temperatura di ricottura è stata portata a 67 ° C ed il numero di ciclo è stato ridotto a 15. prodotti di reazione PCR sono stati purificati mediante elettroforesi su gel di agarosio ed estratto come descritto prima. Le concentrazioni di DNA sono stati determinati utilizzando l'™ Sensitivity dsDNA quantificazione Kit AccuBlue alta (Biotium, Hayward, Stati Uniti d'America) in combinazione con un lettore di fluorescenza BioTekSynergy II (BioTek, Bad Friedrichshall, Germania). Successivamente, i campioni sono stati mescolati in un rapporto equimolare e ulteriormente trattati secondo le istruzioni del produttore per la Titanium Biblioteca Preparation Kit (Roche, Penzberg, Germania). Pyrosequencing è stata eseguita su un sequencer GS FLX (Roche, Penzberg, Germania).
Bioinformatica
lavorazione Sequenza
Qiime software versione 1.6 [16] è stato utilizzato per la pre-elaborazione, l'individuazione delle unità tassonomiche operative (OTU), l'assegnazione tassonomica e il confronto della struttura della comunità. Nella fase di pre-elaborazione, ogni 454-lettura è stato rimosso se (a) il numero di coppie di basi è & lt; 200 o & gt; 550, (b) il punteggio di qualità era & lt; 25, (c) il numero di basi ambigue era & gt; 6, (d) c'era un disadattamento primer (e) il numero di errori di codice a barre erano & gt; 1.5, o (f) una corsa omopolimero era & gt; 6. Oltre a questi passaggi filtranti qualità, un passo denoising delle sequenze è stato eseguito [17] con il -script "denoise_wrapper" in qiime. sequenze chimerici sono stati rimossi utilizzando ChimeraSlayer con le impostazioni predefinite dopo qiime OTU-picking e l'assegnazione tassonomica.
assegnazione OTU e la classificazione tassonomica
Le sequenze sono stati assegnati al OTU con il metodo uclust in qiime con una soglia di somiglianza di 0,97, che corrisponde al livello di genere OTU. Per la seguente assegnazione tassonomica, abbiamo utilizzato il metodo esplosione in qiime con i greengenes 12_10 rilascio con il 97% OTU come database di riferimento. Inoltre, generi sono stati classificati in base alla loro colorazione di Gram sulla base di Manual of Systematic Batteriologia Bergey
. Analisi statistiche
Il OTU-tavolo creato da qiime dopo denoising e chimere controllo è stato importato nel linguaggio di programmazione statistico R [18] utilizzando il Bioconductor [19] pacchetto phyloseq [20]. I seguenti analisi grafiche sono stati eseguiti usando il pacchetto phyloseq e sono stati creati per (a) l'intero insieme di dati, (b) il sottoinsieme impianto e (c) il sottoinsieme dente. La categoria tassonomica utilizzato per le seguenti analisi è stato il livello di genere. In primo luogo, sono state create le mappe di calore per i 50 batteri più abbondanti. In secondo luogo, Principal di coordinate Analisi (PCOA) delle distanze UNIFAC sono state calcolate e tracciate. L'analisi statistica inferenziale è stata calcolata con il edger pacchetto Bioconductor [21]. Pertanto log Fold-Modifiche e valori di p molteplicità aggiustato corrispondenti sono stati stimati da modelli lineari generalizzati separati per ogni genere con il paziente come covariata e considerando il carattere di progettazione accoppiato. La biodiversità è stato calcolato utilizzando l'indice di Shannon-Diversità [22].
Risultati
dati clinici
sette soggetti (2 maschi, 5 femmine, età media 60,1 ± 9,8 anni) erano eleggibili per lo studio tra agosto e ottobre 2010 at Hannover Medical School, Dipartimento di Odontoiatria protesica e Materiali Scienze Biomediche. dati individuali e full-bocca rigature di tutti i pazienti sono riassunti nella Tabella 1. Tutti gli impianti erano stati indagati funzionante per una media di 11,6 ± 5.5 anni. I segni clinici di infiammazione erano evidenti negli impianti indagati (PD 4,9 ± 1,2 mm, BOP 39,9 ± 34,9%) e dei denti (PD 4,1 ± 1,2 mm, BOP 35,7 ± 31,8%). Le differenze tra le registrazioni cliniche a impianti e denti non erano significative (Tabella 1) .table 1 Oggetto caratteristiche
popolazione di studio
Numero di pazienti
7
di genere (maschio /femmina)
2/5
Età (anni)
60,1 ± 9,8
longevità dell'impianto (anni)
11,6 ± 5,6
numero di impianti per paziente (n)
4.7 ± 3.6
Numero di denti rimanenti per paziente (n)
16,7 ± 7,3
punteggi pieno-bocca
placca indice, API ( %)
61,3 ± 28,8
BOP (%)
22,1 ± 16,2
Numero di parodontite denti colpiti per paziente ( %)
68,1 ± 15,5
punteggi nei siti campionati
Implants
Plaque indice (%)
35,7 ± 37,8
BOP (%)
39,3 ± 34,9
PD (mm)
5.0 ± 1.3
e Denti
indice di placca (%)
28,6 ± 39,3
BOP (%)
35,7 ± 31,8
PD (mm)
4.1 ± 1.3
dati sono presentati come medie e deviazioni standard
API, prossimali indice di placca.; BOP, sanguinamento al sondaggio; PD, profondità di sondaggio.
Sopra- e sottogengivali microbiomes
28 sopra- e sottogengivali campioni provenienti da 7 pazienti sono stati analizzati e ha prodotto un totale di 43734 sequenze chimera-impoverito, che rappresentano denoised 1 phylum, 8 classi, 10 ordini, 44 famiglie e 150 generi (file aggiuntivo 1). Su impianti, queste sequenze rappresentavano le famiglie Porphyromonadaceae, Lachnospiraceae, Streptococcaceae
e generi Rothia, Actinomyces, Paenibacillus, Microbacterium, Pseudoramibacter, Leptotrichia, Parascardovia, Tannerella, Granulicatella, Tessaracoccus, Clostridium, Aeromonadales, Veillonella, Capnocytophaga, Prevotella, TG5, Fusobacterium, Exiguobacterium, Enterococcus, Porphyromonas, Streptococcus
a impianti. Su
denti, le sequenze rappresentavano le famiglie Coriobacteriaceae, RS-045, Veillonellaceae, Neisseriaceae
, e generi Mogibacterium, Porphyromonas, Tannerella, Aggregatibacter, Treponema, Capnocytophaga, Lactococcus, Granulicatella, Enterococcus, Exiguobacterium, atopobium, Veillonella
. Su impianti e denti, i batteri di cui sopra hanno rappresentato il & gt; Il 90% di tutte le sequenze.
In supramucosal o placche sopragengivali su impianti e denti, il più abbondante taxa erano Streptococcacea, Rothia,
e Porphyromonas
. In placche sottomucosa presso gli impianti, i taxa più abbondante fosse Rothia, Streptococcaceae
e Porphyromonas
. I batteri subgengivali più abbondanti sulla denti erano Prevotella, Streptococcaceae e TG5
(Figura 1a, b). Figura 1 frequenza di rilevamento di taxa trovato in siti di peri-implantare e parodontale infiammato. (A) Distribuzione di taxa in biofilm sopra- e sottomucosa da impianti infiammate e (b) taxa in biofilm sopra e sottogengivale dei denti affetti da parodontite. I generi elencati (g), le famiglie (f) e classi (c) rappresenta il 90% di tutte le sequenze trovate.
L'analisi statistica ha evidenziato differenze significative tra placca sopra e sottomucosa su impianti per il genere Tannerella
(p = 0.0067) e quasi significative differenze per genere Aggregatibacter
(p = 0,056). Dopo la correzione per test multipli, queste differenze non erano più significative.
Gram categorie macchia
grammo categorie macchia su impianti e denti sono presentati nella Figura 2a e b. In generale, i batteri Gram-positivi erano prevalenti dei batteri Gram-negativi in tutti i campioni. Su impianti, i batteri Gram-positivi sono stati prevalentemente trovati in campioni di sopra- e sottomucosa. Nei campioni sopragengivali di denti, i batteri Gram-positivi erano più frequenti di batteri Gram-negativi, ma in campioni di placca subgengivale le abbondanze dei batteri Gram-positivi e Gram-negativi erano simili. Su impianti e denti, il numero di batteri Gram-negativi erano più in sottomucosa e luoghi sottogengivali rispetto a supramucosal e siti sopragengivali. Figura 2 La taxa identificati sono stati classificati in base alle loro caratteristiche di colorazione di Gram. Le barre rappresentano il numero cumulativo di OTU nelle aree sovranazionali e sottomucosa negli impianti (a) e in aree sopra e sottogengivale a denti (b). Coordinare
Principal analisi (PCOA)
The Principal di coordinate Analysis (Figura 3) di ponderati distanze UNIFAC rivelato alcuna ripartizione distinta delle comunità batteriche associate a impianti o denti (p & gt; 0,01). Figura 3 struttura della comunità batterica nei siti perimplantari e parodontali infiammate. I pannelli mostrano la principale analisi coordinata distanze UNIFAC. Non c'era il partizionamento delle comunità batteriche associate a impianti o denti (p & gt; 0,01), come illustrato dalla distribuzione poco graduata di punti che rappresentano le quattro aree campione di questo studio è stato effettuato
mappa di calore visualizzazione
dati. utilizzando un display mappa di calore, dove l'abbondanza relativa dei 50 generi più frequenti sono rappresentate da diverse luminosità (Figura 4). I campioni di diverse posizioni all'interno dei singoli pazienti condivisa solo somiglianze minime in composizioni di comunità batteriche, come mostrato con il clustering gerarchico dei taxa batterica nella visualizzazione della mappa di calore. Comunità da posizioni supramucosal a impianti a stretto contatto con le comunità in cluster da postazioni sottomucosa negli impianti. Al contrario, i campioni prelevati da placca sopragengivale erano meno simili a campioni di placca sottogengivale a denti. Figura 4 Mappa di calore presentazione che mostra le abbondanze dei 50 generi più frequenti in tutti i campioni. I singoli campioni sono raffigurati su l'asse x come dente (T) o impianto (I), la posizione Supra (= supramucosal o sopragengivale) o sub (= sottomucosa o subgengivale) e un numero che rappresenta il paziente. Da questa presentazione, è evidente che diverse posizioni all'interno dei singoli pazienti condivisi solo somiglianze minime in composizioni di comunità batteriche.
Shannon indice di diversità
L'indice di Shannon diversità descrive la biodiversità e ritiene che il numero dei generi e delle loro abbondanze [22] . Né impianti né denti hanno dimostrato differenze significative nella indice di diversità di posizioni sopra- e sottomucosa a impianti e sedi sovranazionali o sottogengivali a denti (Figura 5). Figura 5 L'indice di Shannon Diversity è stato calcolato per impianti e denti e ha dimostrato che né impianti né denti hanno dimostrato significativo il clustering dell'indice diversità delle posizioni di campionamento (blu e puntini rossi).
Discussione
Il presente studio descrive in dettaglio le microbiomes sopra- e sottomucosa, e sopra e sottogengivale di infiammate siti peri-implantare e parodontale a singoli soggetti che utilizzano 16S pyrosequencing-based gene rRNA. L'attuale studio ha dimostrato (1) frequente verificarsi di membri del genere Rothia
e membri della famiglia Streptococcaceae
a impianti e denti, (2) differenze significative tra i microbiomes degli impianti malati e denti affetti da parodontite, (3) differenze significative tra sopra- e sottomucosa, o sopra- e sottogengivali microbiomes.
l'attuale approccio 16S rRNA è stata finalizzata a rilevare la composizione completa dei batteri si trovano in due siti diversi in impianti e denti. Nel presente studio, le lunghezze di sequenziamento sono state limitate a 550 bp e quindi annotazioni erano limitate al livello del genere, un approccio stabilito per l'analisi di biofilm complessi [23, 24]. In accordo con altre pubblicazioni attuali, la composizione del microbiomes ha mostrato differenze interindividuali alti [8]. filotipi prominente regioni sovranazionali e sottomucosa erano Rothia
e Streptococcaceae
. Specie appartenenti al genere Rothia
sono stati ripetutamente descritti come membri di comunità orali [25-27], e sono stati associati con la salute parodontale [28, 29]. Alti livelli di questo genere sono stati riportati nei siti implantari sani e [30]. membri specifici del genere Rothia
sono stati recentemente dimostrato di causare infezioni cliniche come l'artrite settica, polmonite, setticemia nei pazienti con trapianto renale, infezioni arterovenose, bronchite acuta e endocardite [31] e - come membro del biofilm - è stato associata a infezioni articolari in ortopedia [32]. I fattori di virulenza e la capacità di questo genere per indurre infezioni è stata studiata in vitro e [33]. Il nostro studio ha anche rilevato alte frequenze di generi che non sono state precedentemente descritte come abitanti orali comuni [34]. Per esempio. Exiguobacterium
è stato descritto come un batterio colonizzare habitat marini e frutti di mare [35-37], antica del permafrost siberiano, ghiaccio glaciale della Groenlandia, e sorgenti di acqua calda [38]. Da questo studio, non è chiaro se questo genere è stato accidentalmente costituita dalla contaminazione [39] o se è stata costituita nel placche per via orale per il consumo di cibo., Assunzione di cibo dovrebbe quindi essere controllato con precisione o registrate in studi futuri.
Tutte le analisi nel presente studio ha indicato che la diversità dei biofilm colonizzazione impianti malati era simile a biofilm che colonizzano i denti affetti da parodontite. Al contrario, Kumar et al. [7] osservato diversità ridotta nei siti implantari rispetto a denti malati e Koyanagi et al. [8] hanno riportato significativamente più alta diversità nei siti implantari rispetto a denti malati. Una spiegazione parziale di queste differenze può essere che i soggetti erano di diverse etnie. E 'stato ipotizzato che la diversità è un indicatore della complessità di una malattia, mentre elevata diversità è associata a malattie complesse.
Nel presente studio, generi batterica associata a impianti malati non erano significativamente differenti da comunità associate con i denti infetti nel stesso soggetto, che è in accordo con altre pubblicazioni [40-42] e ha dimostrato che la trasmissione intraorale di batteri da una nicchia all'altra è un evento fattibile. Al contrario, con le tecniche di ibridazione del genere Actinomyces
è stato il taxon più dominante trovato a denti affetti da parodontite e impianti malate [3, 43], ma è stato trovato solo in basse frequenze nel presente studio. Kumar et al. [7] utilizzate tecniche di sequenziamento e hanno concluso che Actinomyces
batteri costituiscono meno del 5% di tutte le sequenze. I generi Treponema e Tannerella
comprese le specie appartenenti al complesso rosso, così come Aggregatibacter,
sono stati trovati in quasi frequenze simili a impianti malati e denti affetti da parodontite; in contrasto Porphyromonas
è stata trovata più frequentemente negli impianti. Le stesse osservazioni sono state riportate in precedenza da Cortelli et al. [44] ma non sono stati supportati da altri studi [7, 8]. Ancora una volta, differenze nel disegno sperimentale possono spiegare queste osservazioni, ad esempio Kumar et al. [7] impianti indagati e denti da parte di soggetti diversi.
Nel nostro studio, le composizioni di biofilm sovranazionali o della sottomucosa presso gli impianti erano più simili di quanto i biofilm sovranazionali o sottogengivali a denti, come dimostrato dall'analisi mappa di calore, che è conforme a Ximenez-Gualdo Tadino et al. [43] che ha trovato generi identici nelle placche sopra e sottogengivale dei denti affetti da parodontite. Utilizzando DNA ibridazione, Shibli et al. [3] ha anche confermato le somiglianze tra biofilm in luoghi sopra- e sottomucosa negli impianti.
A siti implantari, la composizione microbica era composto principalmente da taxa Gram-positivi. A denti, taxa Gram-positivi erano anche più frequenti rispetto taxa Gram-negativi, ma i rapporti molto più bassi. Queste differenze tra località sopra- e sottomucosa non erano evidenti sulla discriminazione dei generi sequenza, ma è diventato evidente con caratteristiche Gram. Questi dati sono parzialmente in contrasto con i dati riportati da Kumar et al. [7], che ha dichiarato che perimplantiti degli impianti in mancanza è una malattia prevalentemente Gram-negativi.
Conclusioni
Il presente studio utilizzando 16S rRNA tecniche di sequenziamento completate la conoscenza della composizione di sopra- e sottomucosa, e sovra - e biofilm subgingal. Sulla base dei limiti dello studio e l'analisi su un livello di genere significative differenze nella composizione biofilm dei tessuti peri-implantari e parodontali malati non sono stati osservati
Abbreviazioni
API:.
Prossimali indice di placca
BOP:
sanguinamento al sondaggio
Bp:
coppia di basi
DNA:
acido desossiribonucleico
dNTP:
Desoxynucleotide trifosfato
min .:
Minute
ml:
millilitro
mm:
Millimeter
no:
Numero
OUT:
unità tassonomiche operazionali
PCOA:
Principali Analisi Coodinate
< DFN> PCR:
Polymerase Chain Reaction
PD:
profondità Pocket
rRNA:
ribosomiale acido ribonucleico.
dichiarazioni
Ringraziamenti
Gli autori sono grati a Rainer Schreeb per un eccellente lavoro di laboratorio.
lo studio è stato finanziato in parte dal Dr. Dorka-Stiftung. | Electronic materiale supplementare
12903_2014_486_MOESM1_ESM.zip sui file 1: 16S rRNA sequenze geniche. (ZIP 965 KB) degli autori fascicoli presentati originali per
di seguito sono riportati i link ai degli autori fascicoli presentati originali per immagini. 'file originale per la figura 1 12903_2014_486_MOESM3_ESM.tif Autori 12903_2014_486_MOESM2_ESM.tif autori file originale di' file originale per la figura 3 12903_2014_486_MOESM5_ESM.tif Autori figura 2 12903_2014_486_MOESM4_ESM.tif Autori file originale per la figura 4 file originale 12903_2014_486_MOESM6_ESM.tif degli autori per la figura 5 Conflitto di interessi
Gli autori dichiarano di non avere interessi in gioco contributo
autori
SS ha contribuito con il concetto e il design, ricerca clinica, l'analisi dei dati, ed è stato responsabile per la redazione.; È indagine clinica; RS all'analisi dei dati; MaS sequenziamento; preparazione AW e SNS campione; JE e MES concept e design criticamente modificata e approvata la versione finale del manoscritto.
