Abstract
sfondo
profilo microbica sottogengivale associati con parodontite è stato riportato a differire significativamente da posizione geografica. Lo scopo di questo studio era di valutare l'associazione tra un gruppo di presunti batteri patogeni parodontali e parodontite cronica tra yemeniti.
Campioni Metodi
sottogengivale di DNA sono stati ottenuti da siti di malati e sani di 20 non fumatori, moderata a grave soggetti parodontite cronica. conte assolute (copie di DNA batterico per campione) e relativi conteggi (% batteri totali) di sette specie periopathogenic /generi rappresentativi dei complessi rosso e arancione sono stati determinati utilizzando Taqman saggi q-PCR.
Risultati
Il q-PCR test hanno mostrato un'eccellente linearità (R
2 & gt; 0,99) e una sensibilità di 100 copie /campione. Il tasso di rilevamento è stata del 100% per tutte le testate specie /generi tranne P. gingivalis
e A. actinomycetemcomitans
che sono stati rilevati al 97,5% e 67,5%, rispettivamente. I conteggi assoluti di registro mediano erano nella gamma di 2.41-6.53 copie per campione, mentre mediana conteggi relativi erano nella gamma di 0,001-0,77%, essendo entrambi più alto per fusobatteri e più basso per A. actinomycetemcomitans
. sono state osservate significative correlazioni interspecie. Regolazione per confronti multipli (P≤0.0063), solo T. forsizia, T. denticola
e P. Micra
mantenuta significativa associazione con la distruzione parodontale. Quest'ultima specie, tuttavia, hanno mostrato la più forte associazione ed è stato trovato in proporzioni più elevate nei siti parodontite in tutte le materie (3,39 volte maggiore mediana). Non sono state osservate differenze significative per P. gingivalis.
Conclusioni
P. micra
piuttosto che P. gingivalis
appare come un agente patogeno chiave di volta in questo campione yemenita. Tuttavia, questi risultati devono essere convalidati in un più ampio studio su scala prima di poter essere sostenuto per rappresentare le variazioni etniche in associazione patogeni 'con parodontite.
Parole
Microbiologia patogeni Real-time PCR Parvimonas micra parodontite elettronico materiale supplementare
La versione online di questo articolo (doi:. 10 1186 /1472-6831-14-13) contiene materiale supplementare, che è disponibile per gli utenti autorizzati
Sfondo
parodontite rappresenta una gamma di entità cliniche. che si caratterizzano per la distruzione immunologica del dente strutture di sostegno in risposta alla sfida cronica da specifici batteri nel biofilm sottogengivale [1]. Gli ultimi tre decenni, o giù di lì assistito un'esplosione nella nostra comprensione della microbiologia della parodontite. Studi precedenti che utilizzano tecniche di coltivazione a base recuperati circa 250 specie batteriche (a & gt; 1% relativa abbondanza) da campioni di placca [2]. Con l'ampia applicazione di tecniche molecolari negli ultimi dieci anni, raddoppiare il numero di specie di romanzo è stato identificato [3-5] portando la ricchezza del microbiota sottogengivale a oltre 700 specie batteriche, circa il 50% dei quali sono incoltivabile.
Mentre la maggior parte di microbiota sottogengivale è considerato commensali, alcune specie sono stati implicati come agenti patogeni parodontali. Porphyromonas gingivalis
, Tannerella forsizia
, e Treponema denticola
(il cosiddetto complesso rosso) hanno finora mostrato la più forte associazione con parodontite cronica [6]. Altri agenti patogeni putativi sono Fusobacterium
spp., Prevotella
spp., Campylobacter retto
, Eubacterium nodatom
, e Parvimonas Micra
(precedentemente micros Peptostreptococcus
) [6]. filotipi coltivabili quali Synergistetes
, TM7 e Treponema
taxa sono anche creduto di svolgere un ruolo patogenetico in parodontite cronica [3, 4, 7]. Infatti, si ritiene che la distruzione parodontale viene attivato da un consorzio di batteri piuttosto che un singolo patogeno [1].
Un certo numero di tecniche molecolari sono stati impiegati per il rilevamento e la quantificazione dei patogeni parodontali in campioni di placca compresi ibridazione DNA-DNA , tempo convenzionale e reale PCR, e 16S rRNA clone sequenziamento [8]. Di questi, PCR in tempo reale è il più sensibile di rilevazione che consente di partire da 1,6 cellule per reazione [9, 10]. Essa consente inoltre di normalizzare conteggi DNA bersaglio carica batterica totale nel campione (quantificazione relativa), regolando in tal modo le variazioni nel campionamento e fare confronti tra i campioni più affidabili [11, 12]. Sorprendentemente, real-time PCR non è stato, come ampiamente utilizzato nello studio della microbiologia della parodontite come può essere previsto.
Sottogengivale profilo microbica associata con parodontite sono stati segnalati per differire significativamente da posizione geografica indipendente da altri fattori noti per modificare subgengivale composizione microbica [8, 13]. Diventa prudente, quindi, che l'ottenimento di ulteriori informazioni sulla distribuzione globale degli agenti patogeni parodontali e modelli di loro associazione con la malattia può migliorare la nostra comprensione delle differenze nel ruolo che svolgono nel parodontite in diverse popolazioni. In assenza di dati su questo dal Medio Oriente, l'obiettivo di questo studio è stato quello di valutare l'associazione di sette agenti patogeni parodontali putativi con parodontite cronica in una popolazione yemenita mediante PCR quantitativa.
Metodi
studiare materie e esame clinico
Venti soggetti, 30-50 anni, con moderata a grave parodontite cronica (con almeno 1 sito per quadrante con profondità delle tasche ≥ 5 mm e perdita di attacco & gt; 3 mm), sono stati reclutati tra i pazienti che frequentano dentale cliniche dell'ospedale Al-Thawra, Sana'a, Yemen. I soggetti che presentano meno di 20 denti o con diagnosi di parodontite aggressiva (quelli con la tipica primo molare /presentazione centrale incisivo) sono stati esclusi. Altri criteri di esclusione inclusi storia di fumo, il trattamento parodontale o l'uso di antibiotici /orale antisettico nel precedente alimentazione di 6 mesi, gravidanza o allattamento, e qualsiasi malattia o farmaci assunzione sistemica noto per modificare l'infiammazione parodontale.
L'indice comunità parodontale [14] è stato utilizzato per lo screening dello stato parodontale da un unico, ben addestrato e precaliberated esaminatore (Shuga-Aldin HM). Nei soggetti ammissibili, profondità della tasca (PD) per la tasca più profonda in ogni quadrante in millimetri è stata stabilita utilizzando una sonda Williams. L'indice di placca [15], è stata misurata sulle superfici buccali e linguale /palatali /labiali dei denti indice. Le caratteristiche cliniche del gruppo di studio sono riportati nella tabella 1 1.Table caratteristiche cliniche del gruppo di studio
Sesso (M /F%)
60/40
Età , mediana (range interquartile)
40 (30-45)
Plaque Index, mediana (range interquartile)
1.5 (1,25-1,65)
profondità tasca in siti campionati, mediana (range interquartile)
5.5 (5,00-6,75)
lo studio è stato condotto in conformità con la dichiarazione di Helsinki. E 'stato approvato dal Medical e la salute Studies Board, Diploma, Khartoum University. Il consenso informato è stato ottenuto da tutti i soggetti
. Il campionamento e l'estrazione del DNA
Per ogni soggetto, un campione sottogengivale pool dalla tasca più profonda in ogni quadrante (PD ≥ 5 mm) e un altro da 4 siti sani (PD ≤ 3 mm ; nessuna perdita di attacco) sono stati ottenuti, con punte di carta sterili. placca sopragengivale è stato rimosso prima del campionamento con pellet di cotone sterile. I campioni (40 in totale) sono stati conservati a partire tampone EDTA TE (Invitrogen, USA) a -80 ° C fino al trattamento.
Al momento della estrazione del DNA, i campioni sono stati centrifugati a 15.000 g per 1 minuto e il pellet era risospese in 180 microlitri di buffer lisozima di digestione (25 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2,5 mM EDTA, 1% Triton X-100) contenente 20 mg /ml lisozima, e incubate a 37 ° C durante la notte. Il digest è stato poi oggetto di estrazione del DNA utilizzando il kit di estrazione del DNA genomico Purelink (Invitrogen, USA); DNA è stato eluito in 100 ml di buffer fornito e conservato a 4 ° C per la successiva analisi
. Saggi di PCR quantitativa
batteri totali, Fusobacterium
spp., Prevotella
spp., Aggregatibacter actinomycetemcomitans
(precedentemente Actinobacillus actinomycetemcomitans
), Parvimonas micra
(precedentemente Micromonas Micra
o Peptostreptococcus micros)
, Porphyromonas gingivalis
, Tannerella forsizia
, e Treponema denticola
sono stati rilevati e quantificati negli estratti di DNA utilizzando in tempo reale tecnologia PCR Taqman [16]. Sequenze di sonde e primer utilizzati nello studio sono mostrati nella Tabella 2. Essi sono stati forniti da Primerdesign, UK, come ottimizzato e pronto all'uso kit che comprendeva anche un controllo positivo plasmide basato (sequenza inserita amplicone). Quest'ultimo è stato diluito serialmente per costruire curve standard per la quantificazione assoluta delle specie di prova, e di valutare l'efficienza, linearità e sensibilità dei assays.Table 2 sequenze di primer e sonde utilizzate nei test PCR quantitativa
Specie per il test
sequenze 5'-3 '
gene bersaglio
formato del prodotto
Rif
A. actinomycetemcomitans
F-primer: GGRAGAATGGATGGCGATAT
hgpA
81 bp
Questo studio
R-primer: ATCAGAATGAACATAACCTATACCA
Probe: Fam- ATGAACGCAATTCAGCCCAGA ACTG-BHQ
P. micra
F-primer: TGAGCAACCTACCTTACACAG
16S rRNA
112 bp
[17]
R-primer: GCCCTTCTTACACCGATAAATC
Probe: Fam- ACCGCATGAGACCACAGAA TCGCA-BHQ
P. gingivalis
F-primer: ACGAATCAAAGGTGGCTAAGTT
Fima
85 bp
[17]
R-primer: TTAGTCGCATTTTCGGCTGAT
Probe: Fam- CCTGCTGTTCTCCATTATAAAC CATTACGG -BHQ
T. forsizia
F-Primer: GATAGGCTTAACACATGCAAGTC
16S rRNA
99 bp
[17]
R-primer: GTTGCGGGCAGGTTACATAC
Probe: Fam- TTACTCACCCGTGCGCCGGTCG-BHQ
T. denticola
F-primer: GGGCGGCTTGAAATAATRATG
16S rRNA
92 bp
[17]
R-primer: CTCCCTTACCGTTCGACTTG
Probe: Fam- CAGCGTTCGTTCTGAGCCA GGATCA-BHQ
totali batteri
F-primer: AAACTCAAAGGAATTGACGGGG
16S rRNA
205 bp
[17]
R-Primer: TTGCGCTCGTTGCGGGACT
Probe:. FAM-CTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGA-BHQ
Fusobacterium
spp *
F-primer: CGCAGAAGGTGAAAGTCCTGTAT
23S r RNA
101 bp
[18]
R-primer: TGGTCCTCACTGATTCACACAGA
Probe: FAM . - CTTTGCTCCCAAGTAACATG GAACACGA-BHQ
Prevotella
spp *
F-primer: ACCAGCCAAGTAGCGTGCA
16S rRNA
153 bp
[19]
R-primer: TGGACCTTCCGTATTACCGC
Probe: Fam- AATAAGGACCGGCTAATTCC GTGCCAG -BHQ
* copertura specie è fornita nelle relazioni originali
per verificare la presenza di specificità, le sequenze primer 'sono stati saltare contro database di sequenze eubatteri presso il National center for Biotechnology Information (NCBI.; http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/index.cgi?LINK_LOC=BlastHome). Poi, ogni set è stato testato in un real-time PCR SYBR Green contro un campione di DNA sottogengivale pool da 5 pazienti affetti da parodontite, seguita da analisi della curva dissociazione. Un insieme di primer è stata giudicata come specifica se si è tradotto in un unico picco dissociazione che è identico al picco dello standard positivo.
Ogni reazione composta da 10 ml Mastermix con ROX (Primerdesign, Regno Unito), 1 ml primer /sonda mix, 5 ml modello di DNA (o standard positivo), e 4 ml di acqua PCR-grade; tutte le corse sono state effettuate su un 7000 piattaforma ABI real-time PCR (Applied Biosystems, USA) utilizzando il seguente programma: attivazione enzimatica iniziale a 95 ° C per 10 minuti seguiti da 40 cicli di denaturazione a 95 ° C per 15 secondi e ricottura /estensione a 60 ° C per 1 min. I dati sono stati acquisiti tramite il canale FAM conta
assoluti, in copie /reazione, sono stati calcolati utilizzando le curve standard.; Questi sono stati poi convertiti in copie /campione moltiplicando per 20 (dal 5 ml di estratto è stato incluso nella reazione). conteggi relativi della specie in esame /generi sono stati poi calcolati come% di batteri totali.
analisi statistica
Esaminando i dati clinici e microbiologici con la statistica di Kolmogorov-Smirnov ha rivelato distribuzione non normale. Di conseguenza, sono stati riassunti come mediana e range interquartili (IQR). Significatività delle differenze tra i siti sani e parodontite in termini di conteggi assoluti (log-trasformati) e relativi sono stati cercato utilizzando il test di Wilcoxon rango-firmato. la correzione di Bonferroni per il confronto multiplo è stato applicato in modo un p-value rettificato di 0,0063 è stato usato per descrivere una differenza significativa. Tutti i test sono stati eseguiti utilizzando SPSS 17 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).
Risultati Aziende Il PCR quantitativa
Tutti gli otto PCR in tempo reale hanno mostrato un'eccellente linearità (R 2 ≥ 0.99) su una gamma dinamica di 5-10 6 copie /reazione (Figura 1), ottenendo una sensibilità di 100 copie /campione (in estrazione del DNA era efficiente al 100%). Tutti i set di primer prodotti singoli picchi di dissociazione nelle SYBR saggi verdi che corrispondevano ai picchi dello standard (Figura 2). Figura 1 Le schermate di ABI 7000 l'uscita del software SDS che mostra le curve standard per due dei primer /set sonda utilizzati in questo studio (T. denticola a sinistra e un .actinomycetemcomitans a destra). diluizioni seriali di controllo positivo plasmide-based sono state preparate con concentrazioni finali di 5-106 copie /reazione. I saggi sono stati eseguiti come descritto nel testo. Le curve sono state ottenute tracciando il login contano copie di DNA contro i valori del ciclo soglia (Ct).
Figura 2 Dissociazione analisi della curva di ampliconi prodotti da testare ciascuna delle coppie di primer utilizzati nello studio contro campione di DNA sottogengivale pool da cinque soggetti parodontite usando un saggio Syber verde PCR. Ogni coppia ha provocato un solo picco indica l'amplificazione specifica.
Risultati generali microbiologici in tutte le nazioni specie testate /generi sono stati rilevati nel 100% dei campioni, tranne P. gingivalis
e A. actinomycetemcomitans
, per il quale i tassi di rilevamento erano 97,5% e 67,5% rispettivamente. dati complessivi conta assoluti e relativi sono presentati nella Figura 3. Il registro mediano conta assoluta era 8.69 per i batteri totali e nel range di 2,41-6,53 per singole specie, essendo più alto per fusobatteri e più basso per A. actinomycetemcomitans
. conteggi relativi mediana (% batteri totale) sono stati nel range di 0,001-0,77%, ancora una volta di essere più alto per fusobatteri e più basso per A. actinomycetemcomitans
. patogeni totali (somma di tutte le 7 specie /generi) costituivano il 2,1% (IQR 1,36-3,87%). Nessuna specie è stata rilevata superiore all'1% nel 75% dei campioni. A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis
e P. Micra
non sono mai stati rilevati in più di 1%, mentre fusobatteri, prevotellae, T. denticola
e forsizia T.
raggiunti per quanto riguarda il 5,3%, 2,1%, 2,3% e 4,1%, rispettivamente, in valori anomali. Figura 3 trame di dialogo che mostra la gamma mediana e interquartile (IQR) della complessiva assoluta (a sinistra) e relativo (a destra) i conteggi delle specie di prova /generi nei campioni di biofilm subgengivale. Le barre di errore rappresentano i dati a 1,5 IQR sopra Q3 (terzo quartile) e al di sotto Q1 (primo quartile). Cerchi e stelle sono valori anomali. Aa; A. actinomycetemcomitans
; Fuso: fusobatteri; Pg: P. gingivalis
; Pr: prevotellae; Pm: Parvimonas micra
; Tf: T. forsizia
; Td:. T. denticola
Analisi non parametrica (Spearman correlazione) ha rivelato una serie di significative correlazioni tra le specie. Sulla base di conteggi di log, e dopo aver eseguito la correzione di Bonferroni per confronti multipli (P ≤ 0,002), fusobatteri hanno mostrato una correlazione significativa con prevotellae e P. Micra
(r = 0,71 e 0,53, rispettivamente), mentre T. denticola significativamente
correlata con T. forsizia
(r = 0,72). Quasi gli stessi modelli di associazioni sono state trovate delle proporzioni, ma la correlazione tra fusobatteri e P. micra
scomparsi. Prendendo un livello meno conservativo di significatività (P ≤ 0,01), T. forsizia
è risultata correlata positivamente con fusobatteri e prevotellae.
Parodontite contro siti sani
I conteggi di log assoluti delle specie di prova /generi nei campioni di placca subgengivale dai siti sani e periodontite sono rappresentati nella Tabella 3. Ulteriori DNA batterico totale è stato recuperato dalle siti periodontite che dai siti sani anche se questo non resistere regolazione per confronti multipli. . Tutte le specie di prova /generi, con l'eccezione di A. actinomycetemcomitans e Fusobacterium spp
,
erano presenti anche a livelli più alti di siti con la distruzione parodontale; Tuttavia, solo P. micra
e T. forsizia
mantenuto differenza significativa dopo la correzione per confronti multipli (P ≤ 0,0063) .table 3 mediani (range interquartile) accedere conteggi delle specie di prova /generi della placca sottogengivale dal sani e parodontite siti
siti Specie
sani (n = 20)
parodontite siti (n = 20)
P
batteri totali
8,65 (8,46-8,83)
8,78 (8,52-9,10)
0,04
A. actinomycetemcomitans
2.42 (0,00-3,50)
2,40 (0,00-307)
0.67
Fusobacterium spp.
6,62 (5,82-6,85)
6,37 (6,00-7,03)
0,08
Prevotella spp.
6.20 (5,65-6,65)
6,42 (6,07-6,80)
0,02
P. micra
4.33 (3,78-5,21 )
5,40 (4,92-5,65)
0,0001 *
P. gingivalis
3,90 (2,56-5,70)
5.52 (3,07-6,04)
0,04
T. forsizia
6,09 (5,24-6,47)
6,71 (5,97-6,91)
0,006 *
T. denticola
5,47 (4,10-6,26)
6.16 (5.71 -6,76)
0,02
* Statisticamente significativa dopo aggiustamento per confronti multipli (P ≤
0,0063); Wilcoxon test di fila.
Utilizzando relativi conteggi (proporzioni), tutte le specie di prova, tranne A. actinomycetemcomitans
, erano presenti proporzioni elevate nei siti parodontite rispetto ai siti sani (Tabella 4). Tuttavia, le differenze erano significative solo per P. micra
e T. denticola
(P ≤ 0,0063) che ha mostrato 3,39 e 1,33 volte maggiore mediana, rispettivamente, in siti con distruzione parodontale rispetto ai siti con nessuna distruzione. P. micra
era presente a più alti conteggi relativi a parodontite rispetto ai siti sani in tutti i subjects.Table 4 mediana (range interquartile) relativi conteggi (% batteri totale) della specie in esame /generi della placca sottogengivale dalla sana e parodontite siti
siti Specie
sani (n = 20)
parodontite siti (n = 20)
Piegare differenza
P
A. actinomycetemcomitans
0,001 (0,000-0,020)
0,001 (0,000-0,005)
0,07
0.12
Fusobacterium spp.
0.789 (0,238-1,205)
0,701 (0,250-1,029)
0.81
0,79
Prevotella spp.
0,360 (,222-,903)
0,394 (0,228-0,751)
1.23
0.50
P. micra
0.009 (,003-,022)
0,031 (0,014-0,081)
3.39
0,0001 *
P. gingivalis
0.004 (0,0001-0,0611)
0,068 (,0001-,219)
1.97
0,156
T. forsizia
0,302 (0,055-0,541)
0,425 (0,170-1,50 )
0.86
0,08
T. denticola
0,092 (0,007-0,438)
0,338 ( 0,126-0,613)
1.33
0.006 *
* Statisticamente significativa dopo aggiustamento per confronti multipli (P ≤
0,0063); Wilcoxon test di fila.
Discussione
Studi dal Medio Oriente sono limitati a quelli che ha esaminato l'effetto di igiene orale tradizionale, come miswak, o certe abitudini, come il qat masticare, sui livelli di patogeni parodontali [17, 20 , 21]; nessuno studio ha finora valutato che gli agenti patogeni parodontali sono particolarmente associati con parodontite in una popolazione araba. Lo studio ha confrontato conti di 7 agenti patogeni putativi tra i siti sani e malati nei pazienti con moderata-grave parodontite cronica, utilizzando real-time PCR. Nonostante il vantaggio di questa tecnica (sensibilità e possibilità di quantificazione relativa), un numero limitato di studi ha utilizzato nello studio della microbiologia della periodontite e ancor meno utilizzato quantificazione relativa per fare confronti tra salute e malattia. siti sane all'interno degli stessi soggetti, piuttosto che individui sani sono stati utilizzati come controlli per evitare gli effetti di inter-individuali variazioni di fattori diversi composizione microbica. Tuttavia, tra cui soggetti sani come controlli aggiuntivi avrebbero consentito per ulteriori confronti e una visione più ampia delle differenze nella composizione microbica tra salute parodontale e la malattia. Quindi questo potrebbe essere considerato come una limitazione dello studio corrente. Un'altra limitazione è che emorragia a sollecitazioni non è stato registrato anche se è stato precedentemente dimostrato di essere una variabile importante clinica. Inoltre, mentre i patogeni più importanti sono stati testati, il pannello avrebbe potuto includere più specie in particolare i più recenti agenti patogeni come filifactor alocis
, synergistetes orali e TM7. Sono stati segnalati conta
assoluti nelle copie di DNA, piuttosto che il numero di cellule, perché il numero di copie del gene bersaglio per genoma, in particolare 16S rRNA gene, varia da una specie all'altra e non è noto per alcuni di loro. Ciò implica che effettivamente conta batterica per alcune delle specie testate /generi sono meno i conteggi riportati nello studio. Esso, tuttavia, non influisce sulla validità del confronto tra siti o pazienti. Teoricamente, appena un copia del gene per reazione può essere rilevato mediante real-time PCR; tuttavia, in pratica ciò non è generalmente possibile. Alcuni dei precedenti studi su agenti patogeni parodontali erano in realtà non è chiaro per quanto riguarda se il limite di rilevazione più basso è stato riferito che per reazione o per campione, ma si può concludere che almeno 100 copie di DNA per reazione potrebbe essere rilevato [11, 22] . Tuttavia, un limite di rilevazione di partire da 1,6 cellule per reazione e 'stato segnalato [9, 10] che è paragonabile alla sensibilità dei saggi q-PCR in questo studio (5 copie /reazione). L'elevata sensibilità di q-PCR probabilmente spiega i tassi di rilevamento superiori di agenti patogeni osservati negli studi che hanno impiegato questa tecnica rispetto a quelli che si trovano con le tecniche di coltura o di ibridazione DNA-DNA.
I conteggi di log mediani di batteri totale così come alcune delle la specie di prova /generi in questo studio sono 1-3 registro superiori a quelli riportati dalla maggior parte degli studi precedenti che hanno usato PCR in tempo reale [9, 10, 12, 22]. Al contrario, Lione et al. [11] conta alto come 10 14 e 10 12 per i batteri totali e P. gingivalis
, rispettivamente, che suona plausibile segnalato. Mentre queste differenze possono essere attribuibili alle variazioni di campionamento ed estrazione del DNA efficienza, inesattezze nella preparazione di curve standard probabilmente rappresentano la gran parte di essi. Curve preparati utilizzando diluizioni seriali di cellule batteriche o di estratto di DNA genomico, come fatto nella maggior parte degli studi precedenti, potrebbero non essere accurato come quelli generati usando plasmidi. D'altra parte, la quantificazione di polarizzazione a causa di plasmide DNA conformazione 'stato segnalato recentemente, soprattutto con plasmidi circolari [23]. Tuttavia, poiché i valori di questo studio sono anche vicino a quelli precedentemente ottenuti con scacchiera ibridazione DNA-DNA [24], si può presumere di essere abbastanza preciso.
I abbondanze relative di T. denticola
e T. forsizia
in questo studio sono molto simili a quelli riportati per una popolazione giapponese utilizza una tecnica di quantificazione simile [12]. In quest'ultimo studio, tuttavia, P. gingivalis
e Prevotella intermedia
sono stati presentati in proporzioni estremamente elevate e ha mostrato una significativa associazione con la malattia che, in contrasto con i risultati attuali. Utilizzando scacchiera DNA-DNA ibridazione, molto più elevate proporzioni dei componenti complessi rossi sono stati riportati in pazienti affetti da parodontite cronica da Stati Uniti, Brasile, Cile e Svezia [13] rispetto ai relativi conti descritte qui. Tuttavia, questo può essere semplicemente giustificata dal fatto che le proporzioni nella tecnica scacchiera sono calcolati normalizzando conteggi assoluti di ciascuna specie conteggi totali della specie 40 sonda utilizzata piuttosto che batterica totale come fatto in questo studio.
Relativa dati di quantificazione mostrano che, anche se gli agenti patogeni parodontali erano presenti proporzioni significativamente più elevati nei siti parodontite rispetto ai luoghi sani, ancora costituivano una minoranza di microbiota sottogengivale. Questo, tuttavia, non è sorprendente poiché la valutazione di studi precedenti colturali-based e studi più recenti che impiegano chiaramente tecniche molecolari rivela che patogeni parodontali, in particolare i membri del complesso rossa, sono quasi sempre stati rilevati a bassa abbondanza [3, 24, 25] . Ciò che non è stato affrontato adeguatamente, d'altra parte, è come questi patogeni possono causare periodontite a così bassa abbondanza. Una interessante, attualmente in evoluzione vista è che bassa abbondanza patogeni parodontali orchestrare parodontite inducendo un disbiosico comunità "patogena" microbico che a sua volta media la distruzione ossea [26]. Si ritiene che questo risultato dalla capacità di questi patogeni sovvertire alcuni componenti della risposta dell'ospite anziché agire direttamente come batteri proinfiammatorie come è stato recentemente dimostrato molto per P. gingivalis
in vitro [27]. Di conseguenza, a basso abbondanti patogeni parodontali sono affermato di funzionare come agenti patogeni Keystone, un'ipotesi che sfida il ruolo dei membri complessi rossi come i patogeni convenzionali [28].
L'attuale studio non hanno mostrato un'associazione tra P. gingivalis
e distruzione parodontale, che è molto difficile da difendere contro le schiaccianti prove esistenti. Tuttavia, questo può essere semplicemente un mancato rilevamento di associazione per mancanza di adeguata potenza esistente, soprattutto che vi era una differenza significativa nella conta assoluta al livello 0,05. D'altra parte, data la natura polimicrobica di periodontite, e in vista della nuova ipotesi trapezoidale patogeno, è anche plausibile proporre che altri membri della squadra patogeno può in alcune circostanze assumere il ruolo di P. gingivalis
come un agente patogeno chiave di volta. In realtà, P. gingivalis
non ha sempre mostrato la più forte associazione con parodontite [3, 29, 30]. Nel corso di studio, T. denticola
e T. forsizia
, entrambi membri del complesso rosso, ha mostrato associazione significativa con parodontite, che è coerente con la letteratura. Tuttavia, P. micra
(precedentemente conosciuto come Peptostreptococcus micros
) ha mostrato la più forte associazione con l'essere presente a significativamente più alto in assoluto e relativi conteggi in siti di parodontite in tutte le materie di studio della malattia. Questa specie è un membro di arancione microbica complesso [6], e non vi è una prova ampliando il suo ruolo, insieme ad altri peptostreptococchi, come patogeno parodontale [3, 29, 31, 32].
Conclusione
nonostante la sua presenza in molto bassi conteggi relativi, pag micra
ha mostrato la più forte associazione con la distruzione parodontale, che è indicativa di un potenziale ruolo come chiave di volta patogeno al posto di P. gingivalis
. Tuttavia, questo deve essere convalidato in un più ampio studio su scala prima che possa essere richiesto di rappresentare le variazioni etniche in associazione patogeni 'con parodontite
dichiarazioni
Ringraziamenti.
Questo studio è stato parzialmente finanziato da Al-Saeed Fondazione per la Scienza e la Tecnologia. Tutto il lavoro di laboratorio è stato condotto presso il Laboratorio Molecular Research, UST, Sana'a, Yemen. Vorremmo ringraziare il Dott Mohammed Sultan per il suo aiuto con la raccolta dei campioni. 'File inviati originali per le immagini
Di seguito sono riportati i link agli autori'
Autori file inviati originali per le immagini. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.
