Abstract
sfondo
La frequenza di isolamento e la suscettibilità agli agenti antifungini di Candida orale
isolati da pazienti con candidosi orale (OC) sono stati confrontati tra gli studi condotti nel 2006-2007 e 2012-2013.
Metodi impara una ceppi total158 è stato isolato da 112 pazienti che hanno visitato Kagoshima University Hospital per il trattamento di OC durante il periodo di 14 mesi, da febbraio 2012 e marzo 2013, e valutati sulla frequenza di isolamento di ogni Candida
ceppo e la suscettibilità contro farmaci antifungini come rispetto a quelli valutati nel 2006-2007.
Risultati
C'è stata una maggiore frequenza di xerostomia come una denuncia capo e di malattia autoimmune in studio 2012-2013 rispetto allo studio 2006-2007. Più del 95% di Candida
isolati erano C. albicans
e C. glabrata
. Inoltre, la proporzione di quest'ultimo è aumentato da 12,3% nello studio 2006-2007 al 23,4% nello studio 2012-2013 mentre la percentuale di ex diminuita dal 86,2% al 72,8%, rispettivamente. C. albicans
è stato isolato in quasi tutti i pazienti, mentre C. glabrata
è stato isolato solo in concomitanza con C. albicans
. Le concentrazioni minime inibenti (MIC) non erano significativamente differenti tra i due gruppi con poche eccezioni. Candida
isolati, di cui MIC superato punti di rottura, a quanto pare aumentato per miconazolo e itraconazolo contro C. glabrata
nello studio 2012-2013, ma questo non era statisticamente significativa. Di conseguenza, più casi di malattia autoimmune, un numero maggiore di C. glabrata
isolati, e una maggiore resistenza agli azoli sono stati osservati nello studio 2012-2013 rispetto allo studio 2006-2007.
Conclusione
questi dati indicano che con i recenti aumenti di C. glabrata
infezione, un fungo causale di OC, e in C. glabrata
resistenza a azoli, è necessaria cautela nella scelta dei farmaci antifungini per il trattamento di OC.
Parole
Candida glabrata
Candida albicans
ceppi clinicamente isolata concentrazione minima inibitoria ceppi resistenti Yoshiaki Kamikawa, Youichirou Mori hanno contribuito ugualmente a questo lavoro.
materiale supplementare elettronica
La versione online di questo articolo (doi:. 10 1186 /1472-6831-14-14). contiene materiale supplementare, che è disponibile per gli utenti autorizzati
Contesto
Nei primi anni 1990, la Candida albicans
resistenti al fluconazolo è stato segnalato essere frequentemente isolato dalla cavità orale di pazienti con sindrome da immunodeficienza acquisita. Uno studio epidemiologico è stato condotto sulla suscettibilità ai farmaci antifungini di Candida
ceppi isolati da pazienti con candidiasi invasiva [1]. i programmi di sorveglianza a livello mondiale sono stati implementati per affrontare la resistenza candida ai farmaci antifungini, come ad esempio il programma sentinella funghi resistenti ad amfotericina B nel 2006-2007 antimicotici [2] e le relazioni sulla suscettibilità candida a Candín tipo [3-6]. Ci sono 2 rapporti sulla sorveglianza interna in Giappone: sorveglianza 99 da parte del invasiva Micosi Surveillance Study Group Japan (JMS) [7] e la relazione da parte del Giappone antifungini Surveillance Program (JASP) [8-10]. Tuttavia, questi programmi di sorveglianza focalizzati su ceppi isolati da casi clinici di profonda micosi, e solo 1 rapporto, il nostro studio precedente effettuato nel 2006-2007, è stato condotto su candidosi orale [11].
La frequenza di isolamento di Candida
ceppi è destinata a cambiare nel tempo, come mostrato dal confronto di studi precedenti condotti in diversi periodi di tempo. Ad esempio, C. glabrata
è stato raramente isolati da pazienti affetti da AIDS con candidosi orale (OC) o candidiasi esofagea nello studio di Sudo pubblicato nel 1997 [12]; Al contrario, C. glabrata
è stata rilevata nel 12,3% dei pazienti con OC nel nostro studio, in cui itraconazolo (ITCZ) è stato efficace, nonostante l'esistenza di resistente C. glabrata
contro ITCZ [11]. Inoltre, mentre resistente C. glabrata
contro ITCZ si è verificato con le alte frequenze del 50% e 72,7% in OC e non OC pazienti di questo studio, rispettivamente [11], un precedente studio di sorveglianza giapponese ha dimostrato resistente C. glabrata
solo 1,0-9,3% dei pazienti con micosi, micosi principalmente profonda [7-10]. Così, la frequenza di isolamento di Candida
specie e dei loro ceppi resistenti varia nel tempo, ma nessuno studio ha riportato variazioni di frequenza di OC nel tempo nella stessa struttura sanitaria.
Il presente studio è stato intrapreso per valutare farmaci antifungini contro Candida
ceppi forma isolata del cavo orale dei pazienti OC che ha visitato Kagoshima University Hospital nel 2012-2013 (14 mesi) e di valutare la frequenza di isolamento di Candida
specie e dei loro ceppi resistenti in confronto con il nostro precedente studio condotto in 2006-2007 (24 mesi), al fine indagare i farmaci antifungini l'uso nel trattamento di OC.
Metodi
Soggetti
Questo studio ha analizzato 158 ceppi isolati da 112 pazienti che hanno visitato il Dipartimento di Chirurgia orale, Kagoshima Università Ospedale, per il trattamento della OC durante il periodo di 14 mesi, da febbraio 2012 e marzo 2013. I ceppi prelevati da pazienti che hanno ricevuto la terapia farmacologica antimicotica entro 3 mesi dalla raccolta sono stati esclusi da questo studio
. l'analisi delle variabili di Candida fondo
pazienti-isolato
L'analisi è stata condotta per età, sesso, malattia sistemica sottostante, uso ormone steroideo, l'uso di protesi, principali lamentele, e la malattia per via orale nei 112 pazienti dai quali Candida
è stato isolato.
raccolta di Candida
dalla cavità orale e coltura batterica
prima della diagnosi di OC, l'area interessata della cavità orale è stato pulito con un tampone di cotone sterile pre-immerso in soluzione fisiologica sterile. campione di fluido raccolto sul tampone è stato spalmato su un CHROMagar Candida
terreno di coltura (Nippon Becton Dickinson e Company, Ltd.) e incubato per 48 ore a 36 ° C.
Identificazione Candida
specie
cultura positiva di Candida
specie è stata determinata da colorimetrico osservazione di colonie nel CHROMagar Candida
terreno di coltura contenente substrati colorimetriche sintetici che vengono cambiati ad essere cromogenico da enzimi contenuti nel Candida
specie. Conferma della determinazione della specie Candida stato poi fatto PCR basato sul metodo riportato da Kanbe et al., Cellule brevemente fungine coltivate in mezzo di coltura CHROMagar Candida sono state raccolte mediante centrifugazione, lavato tre volte con acqua distillata, ed i DNA sono stati estratti e purificato secondo il protocollo di un kit di purificazione del DNA, il DNA Kit veloce (BP biomedica, Stati Uniti). Poi, i campioni di DNA sono stati amplificati mediante PCR ed i prodotti della PCR sono stati analizzati mediante elettroforesi su gel di agarosio per determinare il tipo di specie di Candida [13]
. La diagnosi di OC
fluido raccolto sul tampone della zona colpita è stata trasferita su un vetrino per la colorazione di Gram con un metodo di routine. Una diagnosi di OC è stata fatta quando la formazione di colonie è stato osservato durante l'incubazione e la presenza di pseudo micelio è stato dimostrato mediante colorazione di Gram [14]
. Valutazione della sensibilità ai farmaci antifungini
Candida
ceppi rilevati dal superiore alla metodi citati sono stati ri-seminate su terreno Sabouraud agar (Nippon Becton Dickinson e Company, Ltd.), seguita da incubazione di 48 ore a 36 ° C. Poi la coltura è stata diluita e portato a un fattore McFarland 0,5 misurando la densità ottica a 530 nm utilizzando uno spettrofotometro ViSpec II (Kyokuto, Giappone), e applicato per il saggio per determinare la sensibilità. Una concentrazione minima inibente (MIC) di ciascuno di AMPH-B, 5-FC, FLCZ, MCZ, ITCZ, e MCFG contro questi Candida
ceppi sono stati determinati con un kit fungina Sensibilità ASTY lievito-simile (Kyokuto Pharmaceutical) compatibile con il Comitato nazionale per Clinical Laboratory Standards (NCCLS) metodo di M-27A [15]. Il kit comprende 11 concentrazioni di ciascun farmaco antimicotico in una micropiastra a 96 pozzetti, cioè concentrazioni finali 0, 0,03, 0,06, 0,125, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, e 16 mg /mL per amfotericina B, miconazolo, e micafungin, 0, 0,125, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 16, 32, 64 mg /mL per fluconazolo e 5-FC, e 0, 0,015, 0,03, 0,06, 0,125, 0,25, 0,5, 1 , 2, 4 e 8 mg /ml per itraconazolo e micafungin. La concentrazione "0 mg /mL" è considerato come controllo. I ceppi con elevata MIC sono stati sottoposti a ri-misurazione della MIC con una fungina DP Eiken lievito-simile (Eiken Chemical) compatibile con il metodo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) M27-A3 [10, 16]. MIC50 e MIC90, MIC necessarie per inibire la crescita del rispettivo 50% e il 90% di Candida
specie, sono stati calcolati. ceppi resistenti sono stati determinati secondo i seguenti criteri: MIC AMPH-B, FLCZ, ≥64 mg /ml; 5-FC, ≥32 mg /mL; MCZ, ≥4 mg /ml; MCFG, & gt; 2 mg /ml; e ITCZ, ≥1 mg /ml.
consenso informato e orientamento etico
Tutti i pazienti arruolati fornito il consenso informato scritto su di fornire direttamente verbale e scritta spiegazione dettagliata di questa indagine. Questo studio è stato approvato dal Comitato Etico umana del Medical and Dental Hospital Kagoshima University (No.23-18 e 23-27).
Analisi statistica
test probabilità esatta di Fisher è stato impiegato per determinare le differenze di genere (2 × 2), lamentele principali (2 × 8), malattie sistemiche (sì o no; 2 × 2), l'uso di steroidi (2 × 2), presenza di protesi (2 × 2), candidosi orale (2 × 4), la composizione di isolati di Candida
specie (2 × 7), e l'incidenza di ceppi resistenti tra lo studio 2006-2007 e lo studio 2012-2013. La differenza di età tra i 2 studi è stato esaminato da t
-test di Student. valore di P inferiore a 0,05 è stato considerato come statisticamente significativo.
Risultati
variabili di sfondo
Come indicato nella tabella 1, non vi erano differenze statisticamente significative nelle variabili di fondo in termini di sesso, età, uso del trattamento ormone steroide, la presenza e il tipo di malattie sistemiche e la presenza di protesi tra i pazienti nello studio 2006-2007 e quelli dello studio 2012-2013. Tra i pazienti con 1 capo denuncia, xerostomia è stata maggiore nel 2012-2013 studio (23,2%) rispetto al 2006-2007 studio (8,8%), mentre tilosi linguae era inferiore al 7,0% e 0%, rispettivamente. Collettivamente, la composizione dei principali lamentele era significativamente differente tra i pazienti 2006-2007 e 2012-2013 pazienti analizzate con il test esatto di Fisher probabilità (p & lt; 0,05). Nonostante alcuna differenza significativa nella comparsa di malattia sistemica tra i 2 studi (77,2% vs. 86,6%), la presenza di malattie autoimmuni era superiore nello studio 2012-2013 rispetto 2006-2007 studio (27,6% vs. 6,7% rispettivamente) .table 1 variabili di fondo di pazienti con candidiasi orale iscritti 2006-2007 e 2012-2013 studi
2006-2007
2012-2013
test
Soggetti number
Total
57
112
Gender
Male
19
(33.3)
30
(26.8)
Fisher’s test esatto di probabilità
femminile
38
(66,7)
82
(73,2)
[2 × 2]
NS
Età
medio [max-min]
67,9
[26 -90]
69,6
[21-97] t-test
di Student
NS
reclami Capo
sensazione di calore (HS)
23
(40,4)
46
(41,1)
Gusto anomalia (TA)
2
(3,5)
0
(0)
xerostomia (X)
5
(8.8)
26
(23,2)
Tilosi linguae (TL)
4
(7.0)
0
(0)
prova probabilità esatto di Fisher
Rubor /Erosione (R /E)
4
(7,0)
8
(7.1)
[2 × 8]
HS + TA + X
9
(15,8)
16
(14.3)
p & lt; 0.05
HS + TA + R /I
5
(8.8)
8
(7.1)
HS + TL
5
(8.8)
8
(7.1)
Total
57
(100)
112
(100)
Systemic malattia
Sì
44
(77,2)
97
(86,6)
prova probabilità esatto di Fisher
Nessuno
13
(28,8)
15
(13.4)
[2 × 2]
Total
57
(100)
112
(100)
N.S.
Endocrine
22
(29.3)
22
(17.3)
Cardiovascular
18
(24.0)
28
(22.0)
Gastrointestinal
123
(16.0)
12
(9.4)
Fisher’s test esatto di probabilità
tumore maligno
8
(10,7)
12
(9.4)
[2 × 7]
CNS
4
(5.3)
10
(7.9)
N.S.
Viral
6
(8.0)
8
(6.3)
Autoimmune
5
(6.7)
35
(27.6)
Total
75
(100)
127
(100)
Steroid
Dose
12
(21.1)
28
(25.0)
Fisher’s test esatto di probabilità
non dosati
45
(78,9)
84
(75,0)
[2 × 2]
Total
57
(100)
112
(100)
N.S.
Denture
Wearer
37
(64.9)
57
(50.9)
Fisher’s test esatto di probabilità
non indossa
20
(35.1)
55
(49,1)
[2 × 2]
totale
75
(100)
112
(100)
NS
candidosi orale
pseudomembranosa
42
(73,7)
42
(37,5)
eritematosa
11
(19,3)
52
( 46.4)
prova probabilità esatto di Fisher
ipertrofica
2
(3,5)
4
(3.6)
[2 × 2]
Mixed
2
(3.5)
14
(12.5)
N.S.
Total
55
(100)
112
(100)
Figura tra parentesi rappresenta la percentuale tranne l'età.
Classificazione di candidosi orale (OC)
Classificazione dei casi diagnosticati OC è anche indicato nella tabella 1. Tra i 57 pazienti dello studio 2006-2007, OC è stato più frequentemente classificato come OC pseudomembranosa (73,7%), seguita da OC eritematose (19,3%). Nello studio 2012-2013, tuttavia, OC eritematoso rappresentava la metà (46,4%) dei casi OC, seguito da OC pseudomembranosa (37,5%) e OC misto (eritematose e pseudomembranosa, 12,5%), ma nessuna differenza statistica è stata notata.
Isolato Candida
specie
in totale, 158 ceppi di Candida
sono stati isolati nei pazienti nello studio 2012-2013. I più frequentemente isolati di Candida
specie sono state la candida albicans
(C. albicans
, 116 ceppi, 73,4%), seguito da C. glabrata
(36 ceppi, 22,8%), C. tropicalis
(3 ceppi, 1,9%), C. parapsilosis
(2 ceppi, 1,3%), e C. krusei
(1 ceppo, 0,6%) (Tabella 2). Quando analizzate su una base del paziente, C. albicans
è stato isolato in tutti i pazienti (n = 112), mentre C. glabrata
è mai stato trovato da solo, solo in concomitanza con C. albicans
in 36 pazienti . Più di un tipo di Candida
specie è stato isolato in 41 pazienti, con concomitanti C. albicans
e C. glabrata
essere la combinazione più comune in circa il 90% di questi pazienti. Al contrario, tra 65 ceppi di Candida
isolati nei pazienti nello studio 2006-2007, 56 ceppi di C. albicans
(86,2%), 8 ceppi di C. glabrata
(12,3%), e 1 ceppo di C. tropicalis
(1,5%) sono stati identificati, e non ceppi di C. parapsilosis
e C. krusei
sono stati rilevati. Così, nello studio 2012-2013, il numero di ceppi isolati di C. glabrata
era quasi il doppio dello studio 2006-2007 e il rapporto di C. albicans
a tutti Candida
ceppi stata quindi significativamente inferiore allo studio 2012-2013, quando analizzati su un ceppo-base o su un paziente-base. Così, in entrambi i pazienti-base e la tensione-base analisi, è stata osservata una differenza statistica tra lo studio 2006-2007 e lo studio 2012-2013 (p & lt; 0,01) .table 2 Distribuzione di specie di Candida isolati da pazienti con candidiasi orale 2006-2007 e 2012-2013 studi
specie di Candida
Numero di pazienti (%)
prova
2006-2007
2012-2013
singole specie isolato
Candida albicans
(CA )
49
(86.0)
71
(63,4)
Candida glabrata
(CG)
1
(1.8)
0
(0)
Candida tropicalis
( CT)
0
(0)
0
(0)
Candida parapsilosis
(CP )
0
(0)
0
(0)
Candida krusei
(CK)
0
(0)
0
(0)
prova probabilità esatto di Fisher
specie plurali isolato
[2 × 10]
CA + CG
6
(10.5)
36
(32,1)
p & lt; 0.01
CA + CT
0
(0)
3
(2.7)
CA + CP
0
(0)
1
(0.9)
CA + CG + CT
1
(1.8)
0
(0)
CA + CP + CK
0
(0)
1
(0.9)
Total
57
(100)
112
(100)
specie di Candida
Numero totale di Candida ceppi isolati (%)
prova
2006-2007
2012-2013
Candida albicans
56
(86,2)
112
(72,8)
Candida glabrata
8
(12.3)
36
(23,4)
Candida tropicalis
1
(1.5)
3
(1.9)
Fisher esatto test di probabilità
Candida parapsilosis
0
(0)
2
(1.3)
[2 × 5]
Candida krusei
0
(0)
1
(0.6)
p & lt; 0.01
totale
65
(100)
154
(100
suscettibilità ai farmaci antifungini
da alcuni (da 1 a 3 ceppi) della Candida
specie diversa da C. albicans
e C. glabrata
sono stati isolati in uno studio, valori di MIC di farmaci antifungini contro C. tropicalis
, C. parapsilosis,
e C. krusei
, che non sono mai stati isolati da soli ma solo in combinazione con C. albicans
e C. glabrata
, non erano affidabili. pertanto, i risultati dei test di sensibilità si riferiscono principalmente ai MIC di C. albicans
e C. glabrata
(Tabella 3) .table 3 antifungini profilo di suscettibilità, contro amfotericina B, flucitosina, fluconazolo, miconazolo, itraconazolo, e micafungin, di specie di Candida isolati da pazienti con candidosi orale negli studi 2006-2007 e 2012-2013
a. amfotericina B (AMPH-B)
Anno
Strain
No. di ceppi
MIC (μg/mL)
MIC50
MIC90
<0.03
0.03
0.06
0.125
0.25
0.5
1
2
4
8
16
>16
2006-2007
C. albicans
56
8
43
3
2
0.5
0,5
C. glabrata
8
1
2
2
2
1
0.5
2
C. tropicalis
1
1
0.25
0.25
2012-2013
C. albicans
112
4
12
86
9
1
0,5
1
C. glabrata
36
1
2
16
14
2
1
0,5
1
C. tropicalis
3
1
2
1
1
C. parapsilosis
2
2
& lt; 0,03
& lt; 0,03
C. krusei
1
1
0,5
0,5
b. flucitosina (5-FC)
Anno
Strain
Numero di ceppi
MIC (mg /ml)
MIC 50
MIC 90
& lt; 0,125
0,125
0.25
0.5
1
2
4
8
16
32
64
& gt ; 64
2006-2007
C. albicans
56
18
8
24
3
1
2
0,25
0.5
C. glabrata
8
4
1
1
2
& lt; 0,125
16
C. tropicalis
1
1
0,125
0,125
2012-2013
C. albicans
112
56
1
43
3
3
4
1
1
0.25
1
C. glabrata
36
20
6
6
2
1
1
& lt; 0,125
8
C. tropicalis
3
3
& lt; 0.125
& lt; 0,125
C. parapsilosis
2
2
2
C. krusei
1
1
1
0.25
0.25
c. fluconazolo (FLCZ)
Anno
Strain
Numero di ceppi
MIC (mg /ml)
MIC 50
MIC 90
& lt; 0,125
0,125
0.25
0,5
1
2
4
8
16
32
64
& gt; 64
2006-2007
C. albicans
56
22
22
5
1
1
1
1
3
0.5
4
C. glabrata
8
1
Pagina 2
2
1
1
1
2
& gt; 64
C. tropicalis
1
1
& gt; 64
& gt; 64
2012-2013
C. albicans
112
4
33
51
2
1
3
3
3
0.5
Pagina 2
C. glabrata
36
4
1
5
6
7
7
2
16
64
C. tropicalis
3
1
2
32
32
C. parapsilosis
2
2
2
2
C. krusei
1
1
2
2
d. miconazolo (MCZ)
Anno
Strain
Numero di ceppi
MIC (mg /ml)
MIC 50
MIC 90
& lt; 0,03
0.03
0,06
0.125
0.25
0.5
1
2
4
8
16
& gt; 16
2006-2007
C. albicans
56
2
22
20
8
1
3
0.125
0.25
C. glabrata
8
1
2
2
1
2
1
4
C. tropicalis
1
0,125
0,125
2012-2013
C. albicans
112
2
20
64
18
1
1
1
2
3
0.25
0.5
C. glabrata
36
1
5
12
7
Pagina 3
3
2
3
2
16
C . tropicalis
3
1
1
1
1
4
C. parapsilosis
2
1
1
1-2
2
C. kurusei
1
1
4
4
e. itraconazolo (ITCZ)
Anno
Strain
Numero di ceppi
MIC (mg /ml)
MIC
