3 CFU /ml ha inibito la crescita un po 'per tre dei cinque ceppi di MS (S. mutans
NCTC 10449, S. sobrinus
OMZ176 e S. mutans
P1: 27), mentre basse concentrazioni di L. acidophilus
La5 non ha influenzato la crescita MS. In generale, non sono state osservate differenze significative nella inibizione della crescita tra i ceppi di riferimento e l'orale isolates.Table 2 inibizione della crescita di ceppi mutans streptococchi da lattobacilli probiotici selezionato in funzione della concentrazione di cellule.
< col>
|
streptococchi mutans (inibizione score)
Lactobacilli
CFU/ml
Ingbritt
NCTC
10449
OMZ176
P1:27
P2:29
L. plantarum 299v
103-109
0
0
0
0
0
L. plantarum
931
103-109
0
0
0
0
0
L. rhamnosus GG
105-109
0
0
0
0
0
ATCC 53103
103
0
1
1
1
0
L. rhamnosus
105-109
0
0
0
0
0
LB21
103
1
1
1
1
1
L. paracasei
105-109
0
0
0
0
0
F19
103
1
1
1
1
1
L. reuteri
105-109
0
0
0
0
0
PTA5289
103
1
1
1
1
1
L. reuteri
105-109
0
0
0
0
0
ATCC 55730
103
1
1
1
1
1
L. acidophilus
109
0
0
0
0
0
La5 *
107
0
1
1
0
1
|
105
1
1
1
1
1
|
103
2
2
2
2
2
punteggi di inibizione; 0 = inibizione totale; 1 = leggera inibizione;. 2 = nessuna inibizione
* p & lt; 0,05 , test chi-quadrato. inibizione
crescita di Candida albicans
tutti i ceppi di lattobacilli testati riducono la crescita candida, ma l'effetto è stato generalmente più debole rispetto per streptococchi mutans. Dal momento che un modello di inibizione identica è stata visualizzata per tutti i ceppi di Candida , i risultati dei test per uno solo di essi sono illustrati nella tabella 3. alle concentrazioni 10 9 e 10 7 CFU /ml, tutti tranne lattobacilli L. acidophilus
La5 e L. reuteri
PTA 5289 inibita completamente i cinque ceppi di Candida. A 10 5 CFU /ml, L. rhamnosus
LB21, L. rhamnosus GG
ATCC 53103, L. paracasei
F19 e L. reuteri
PTA 5289 hanno mostrato una leggera inibizione, L . acidophilus
La5 non ha mostrato alcuna inibizione a tutti mentre L. plantarum
299v, L. plantarum
931 e L. reuteri ATCC 55730
eseguito un totale inibizione. Alla concentrazione cellulare più basso, nessuna inibizione è stata registrata ad eccezione dei due L. plantarum
inibizione strains.Table 3 Crescita di Candida albicans ATCC 28366
da lattobacilli probiotici selezionato in funzione della concentrazione di cellule.
< col> Scolare
concentrazione cellulare (CFU /ml)
109
107
105
103
L. plantarum 299v
0
0
0
1
L. plantarum
931
0
0
0
1
L. rhamnosus GG
ATCC 53103
0
0
1
2
L. rhamnosus LB21
0
0
1
2
L. paracasei F19
0
0
1
2
L. reuteri
PTA 5289
1
1
1
2
L. reuteri ATCC 55730
0
0
0
2
L. acidophilus
La5
1
1
2
2
punteggi inibizione; 0 = l'inibizione totale; 1 = leggera inibizione; 2 = nessuna inibizione.
PH misurazioni
Il pH iniziale sulla superficie delle piastre di agar M17 e SAB erano rispettivamente 6,8 e 5,8,. Dopo l'incubazione, il pH è diminuito in tutte le piastre inoculate con lattobacilli e varia tra 3,7 e 5,3 nelle piastre contenenti 10 3 CFU /ml (Tabella 4). L. acidophilus
La5 visualizzata i più alti valori di pH, mentre i valori più bassi sono stati registrati per la L. plantarum
strains.Table 4 pH finale sulla superficie della M17 e SAB piastre di agar, dopo incubazione con lattobacilli probiotici selezionati (103 CFU /ml).
Scolare
M17 agar agar
SAB
L. plantarum 299v
4.4
3.7
L. plantarum
931
4.4
3.7
L. rhamnosus GG
ATCC 53103
4.6
4.0
L. rhamnosus LB21
4,5
4.1
L. paracasei F19
4.8
4.4
L. reuteri
PTA 5289
5.1
4.0
L. reuteri ATCC 55730
5.1
3.9
L. acidophilus
La5
5.2
5.3
Discussione
La strategia predominante per la prevenzione della carie si basa su influire sui processi ri- e demineralizzazione, soprattutto da utilizzando fluoruri ma anche altri fattori coinvolti nel processo di carie può essere mirato [19]. Un'alternativa potrebbe essere quella di promuovere la colonizzazione di carie inibendo batteri e in questo aspetto, batteri probiotici costituire un nuovo concetto che ha bisogno di ulteriore approfondimento. Questo vitro
studio è stato condotto per confrontare l'effetto di otto ceppi di lattobacilli probiotici commerciali sulla inibizione della crescita di streptococchi mutans e C. albicans
. Abbiamo scelto questi particolari ceppi di lattobacilli perché si trovano in prodotti lattiero-caseari, bevande di frutta, gocce, pappe, gomme da masticare e tablet sul mercato. Il pannello di prova di streptococchi mutans e lievito conteneva entrambi i ceppi di riferimento e isolati clinici. Candida albicans
è più comunemente isolati specie di Candida nella cavità orale e costituiscono fino al 80% degli isolati clinici [20]. Inoltre, la candida è stato attribuito un valore predittivo significativo per la carie dentale nei bambini [21]. La maggior parte dei ceppi di lattobacilli sono stati completamente identificati con analisi biochimica usando il sistema CH API 50 mentre un'identificazione soddisfacente della L
. reuteri
e L. rhamnosus
ceppi richiederebbero metodi di genetica molecolare [22].
Il metodo di agar di copertura è stato considerato adatto per la domanda di ricerca in quanto il metodo può testare l'effetto inibitorio sulla più ceppi su un piatto unico . Il metodo è stato in precedenza utilizzato per dimostrare la vitro
l'inibizione della crescita di diversi ceppi di lattobacilli su batteri patogeni nella regione urogenitale femminile [23] e per studiare l'effetto inibitorio di streptococchi alfa-emolitico sui patogeni otite media Streptococcus pneumoniae
, Haemophilus influenzae
e Moraxella catarrhalis
[24]. Koll et al [25] hanno utilizzato il metodo antagonismo differita per testare la capacità inibitoria contro streptococchi mutans e C. albicans
. In questo metodo i lattobacilli sono stab-inoculato sulla superficie delle sospensioni fondo agar e patogeni sono versato sopra la macrocolonies di lattobacilli. Dopo incubazione la larghezza delle zone di inibizione vengono misurati. Il principale vantaggio del metodo dell'antagonismo differita è il risultato più esatto mentre il metodo agar molle consente la valutazione di diverse concentrazioni di cellule. Così, i metodi possono essere considerati come complemento a vicenda.
Con l'eccezione di L. acidophilus
, gli attuali ceppi probiotici visualizzati forti capacità inibitoria contro entrambi i ceppi di riferimento e le mutans orali isolati streptococchi e questi risultati sono stati soprattutto in accordo con le recenti osservazioni di Simark-Mattsson e colleghi [17]. I risultati relativi ai ceppi di Candida erano comunque romanzo e ha mostrato una variazione ancora più grande tra i ceppi di lattobacilli e solo tre degli otto ceppi testati in mostra una forte capacità inibitoria. Questi risultati sono stati in disaccordo Koll et al [25] che non è riuscito a dimostrare l'inibizione di Candida albicans
048 (wild-type). Questo potrebbe a causa del metodo utilizzato negli esperimenti o il fatto che il ceppo candida testata erano più resistenti allora i nostri ceppi di riferimento e isolati clinici. La produzione di batteriocine può essere differente in differenti sistemi e la capacità di diffondere attraverso l'agar. Dal momento che sono stati notati una crescita significativa inibizione differenze tra i lattobacilli probiotici, l'ipotesi nulla è stata respinta. sono stati precedentemente osservati differenze ceppo-dipendenti simili relativa capacità metabolica per formare acidi da zuccheri alimentari che differisce significativamente tra vari ceppi probiotici [26, 27].
Il pH finale nel mezzo è stato suggerito essere un fattore importante per inibizione della crescita, o direttamente o per la produzione di batteriocine a pH basso [28]. Abbiamo trovato una tendenza simile nelle attuali esperimenti; i ceppi di lattobacilli che hanno causato il pH più basso dopo incubazione erano anche più efficace nell'inibire la SM e candida la crescita. L'inibizione più debole di entrambi streptococchi mutans e C.albicans
è stato visualizzato da L acidophilus
La5, che ha avuto anche la produzione di acido debole in entrambi i sistemi. Nel metodo agar molle lattobacilli viene coltivato all'interno MRS-agar ed è possibile che questo particolare sistema non è ottimale per L. acidophilus
La5. Il potenziale inibitorio può essere diverso, nel bene e nel male, in altri sistemi di test o in vivo
. Tuttavia, anche alcuni batteri con la produzione di acido piuttosto debole, come L. reuteri
ATCC 55730, ha dimostrato di essere efficace sia contro streptococchi mutans e candida. Ciò indica che altre sostanze inibenti possono anche essere coinvolti nel processo con H 2O 2 essendo tra i metaboliti primari con capacità inibitoria contro gli agenti patogeni microbici [29]. L'importanza di H 2O 2 produzione per la salute può essere illustrato in vaginosi batterica, in quanto la mancanza di lattobacilli con tale produzione sembra essere associato con una composizione alterata della flora vaginale conseguente una massiccia proliferazione anaerobica [30] . Tano et al. [31] ha concluso che l'effetto inibitorio di streptococchi alfa-emolitico su agenti patogeni otite media molto probabilmente è dovuto alla loro H 2O 2 produzione. Il reuterina derivata glicerolo antimicrobica è un altro esempio di una sostanza inibitoria della crescita prodotta da L. reuteri
[32] che possono essere coinvolte nella riduzione dei mutans streptococchi nella saliva [14, 15] e tonificante sulla gengiviti [33 ] e mediatori infiammatori nel liquido crevicolare [34]. Anche se alcuna conclusione in vitro
studi deve essere redatto con cautela, i nostri risultati forniscono un po 'di ulteriore supporto all'ipotesi che lattobacilli probiotici può influenzare l'omeostasi e il profilo microbica nella cavità orale.
Conclusione
il presente in vitro
studio ha dimostrato che commerciale lattobacilli probiotici potrebbe inibire la crescita di ceppi di riferimento e isolati orali di streptococchi mutans e candida, ma la capacità differiva significativamente tra i ceppi. Ulteriori studi clinici sono necessari per verificare se le differenze osservate possono svolgere un ruolo nel complesso biofilm orale.
Dichiarazioni
Ringraziamenti
Lo studio è stato sostenuto con sovvenzioni da parte del consiglio della contea di Västerbotten (TUA). Siamo grati al professor Ingegerd Johansson che ci ha fornito le C.albicans
ceppi.
Interessi concorrenti
Gli autori dichiarano di non avere interessi in gioco.
Contributi degli autori
PH contribuito con il lavoro di laboratorio, l'acquisizione, l'analisi e l'interpretazione dei dati e hanno preso parte nella stesura del manoscritto. MH ha contribuito con la progettazione, attività di laboratorio, analisi e interpretazione dei dati e ha preso parte nella stesura del manoscritto. ST ha contribuito con la stesura del manoscritto e rivisto criticamente. CSB ha contribuito con l'analisi e l'interpretazione dei dati, stesura del manoscritto e rivisto criticamente. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.
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