Abstract
sfondo
Precedenti studi trasversali hanno suggerito che la modalità di consegna può influenzare la composizione della microflora orale. L'obiettivo di questo studio prospettico è stato quello di confrontare la colonizzazione salivare nei bambini vaginale consegnati con i bambini con taglio cesareo (C-sezione) durante i primi 6 mesi di vita.
Metodi
Il gruppo di studio consisteva di 149 consecutivamente arruolati i bambini, consegnate sia vaginale (n = 96
) o C-sezione (n
= 53) che volontariamente dopo il consenso dei genitori. campioni di saliva sono stati raccolti entro 2 giorni dopo la nascita e poi dopo 1, 3 e 6 mesi. Un campione di saliva da madri stato ottenuto 6 mesi dopo la consegna. I genitori sono stati invitati a compilare un questionario sui fattori socio-economici, stile di vita, e igiene al basale e durante il periodo di studio. Tutti i campioni sono stati analizzati con 13 predeterminati sonde batteriche utilizzando l'ibridazione scacchiera DNA-DNA.
Risultati
I gruppi sono stati bilanciati al basale per quanto riguarda tutti i fattori di fondo rilevanti. Gram-positivi streptococchi (S. mitis, S. salivarius
) realizzato il più alto conta in entrambi i gruppi, ma una maggiore diversità è stata osservata nel gruppo vaginale consegnato. A. naeslundi, A. odontolytics, F. nucleatum
e L. salivarius
sono stati rilevati solo tra i bambini per via vaginale consegnati. La prevalenza di S. sanguinis, S. Gordoni, R. denticariosa, e B. dentinum
aumentato di età in entrambi i gruppi ma la prevalenza è risultata significativamente più bassa nel gruppo C-sezione (p
& lt; 0,05). C'era un legame tra le madri e la loro progenie del concernenti il profilo microbica salivare.
Conclusione
La composizione microbica nella saliva si differenzia dalla modalità di consegna durante i primi sei mesi di vita.
Parole
C batteri -sezione neonati Oral Oral colonizzazione saliva Sfondo
Il biofilm orale gioca un ruolo significativo nella salute e nella malattia [1]. La composizione è altamente individuale e influenzata da fattori quali la genetica, la dieta, l'età e livello di igiene [2]. Secondo l'ipotesi igiene, la sequenza e tempi di esposizione ad una varietà di ceppi batterici precoci nella vita sembrano essere di importanza per l'intestino colonizzazione [3]. La modalità di consegna e cessazione di allattamento sono stati identificati come importanti fattori flora intestinale maturazione [4], e questo sembra applicabile anche alla cavità orale. Precedenti ricerche hanno indicato che i bambini con taglio cesareo (C-sezione) mostrano una ridotta diversità microbica nella saliva in confronto con i bambini per via vaginale consegnate [5, 6]. Inoltre, il profilo microbica orale può discriminare allattati al seno da neonati alimentati con latte artificiale [7]. L'importanza clinica a lungo termine di questi risultati non è del tutto chiaro, ma una diversità ridotta nella pancia è correlata ad un aumentato rischio di sviluppare malattie croniche come l'asma e allergie [8]. Le informazioni della diversità più bassa nei bambini C-sezionati è comunque principalmente derivato da studi trasversali e longitudinali pochi dati sono disponibili. Lo scopo di questo studio è stato quello di analizzare campioni di saliva da neonati partoriti con taglio cesareo attraverso i loro primi sei mesi di vita rispetto ai batteri selezionati. I risultati sono stati confrontati con un gruppo di bambini vaginale consegnati e l'ipotesi nulla è stato che non esistono differenze sarebbero visualizzati tra i gruppi.
Metodi
design Studio
L'indagine impiegato un disegno prospettico caso-controllo ed era eticamente . approvato dal Comitato Etico regionale di Lund, Svezia (DNR 2012/483) che ha l'autorità di approvare studi presso Halland Ospedale
gruppo di studio
il materiale era costituito da 149 neonati consegnato sia per via vaginale (V; n
= 96) o C-sezione (CS; n
= 53). I partecipanti sono stati arruolati consecutivamente tra i volontari sani che sono nati a Halland Hospital, Halmstad, in Svezia, tra aprile e dicembre 2013. Entrambi i genitori hanno firmato un modulo di consenso dopo le informazioni verbali e scritte approfondita. I criteri di esclusione sono stati i bambini pretermine), ii) neonati che necessitano di cure neonatali, III) I bambini con una condizione medica di poco chiaro, e iv) le famiglie che ha progettato la delocalizzazione all'estero dopo la nascita. Il tasso di abbandono a 6 mesi è stata del 20% e il drop-out rispetto ai designati follow-up sono riportati nella tabella 1 1.Table partecipanti e la frequenza drop-out nei due gruppi (CS = C-sezione; V = vaginale consegna)
Età
CS
V
totale
tasso di abbandono
Newborn (1-2 giorni )
53
95
148 sull'oggetto -
1 mese
45
79
124
16%
3 mesi
44
74
118
20%
6 mesi
44
73
117
20%
valori in numero denotano tavolo dei bambini
campionamento saliva
I campioni di saliva sono stati raccolti entro 2 giorni dopo la nascita e poi dopo 1, 3 e 6 mesi con l'aiuto di bastoncini di cotone sterili. Alla prima occasione, i genitori sono stati accuratamente istruiti e mostrati come raccogliere il campione e trasferire la parte superiore di un tubo di plastica marcato. Al designati follow-up, i genitori hanno ricevuto il kit con una sterile contenente un batuffolo di cotone e un tubo di plastica con un foglio informativo illustrato tramite posta di superficie. I genitori sono stati invitati a raccogliere il campione di mattina immergendo il batuffolo di cotone nella saliva e subito tornare al laboratorio. Quando un campione mancava, i genitori è stato ricordato attraverso una chiamata telefonica entro 5 giorni. In modo simile, un campione di saliva da madri stato ottenuto 6 mesi dopo la consegna. Tutti i campioni sono stati conservati congelati fino a quando ulteriori analisi.
Metodo microbica
I campioni sono stati elaborati con la tecnologia di ibridazione DNA-DNA a scacchiera secondo a Wall-Manning et al. [9]. Il DNA è stato estratto con mutanolysin e lisozima come precedentemente descritto [10] e la qualità del DNA è stata valutata dallo spettro UV tra 200 e 300 nm utilizzando uno spettrofotometro Gene Quant (Pharmacia Biotech, Uppsala, Svezia). Interi sonde di DNA genomico di potenziale interesse per la salute orale e la malattia sono stati preparati da un gruppo di 13 specie batteriche a denominazione ceppo secondo la raccolta delle colture Microbiologia Orale, Gothenburg, Svezia: Actinomyces odontolyticus
G67; Actinomyces naeslundii
2466 (A. oris
); Bifidobacterium dentium
G174; Fusobacterium nucleatum
2865; Lactobacillus casei
3184; Lactobacillus salivarius
3830; Rothia denticariosa
1956; Streptococcus gordonii
2471; Streptococcus mitis
1770; Streptococcus mutans
2482; Streptococcus salivarius
2473; Streptococcus sanguinis
2478; Veillonella parvula
G186. I conteggi batterici sono stati ottenuti per cento metodo in cui l'intensità del segnale (gruppi ottici biomedico) è stato espresso come una frazione di un campione standard alto (10
6 cellule) con l'aiuto di LumiImager Workstation (Boehringer Mannheim, Mannheim , Germania). Il livello di rilevamento è stato & gt;. 10 4 cellule per mL campione
Questionario
Al inclusione, i genitori sono stati invitati a compilare un questionario di 20-item sulle caratteristiche familiari, socio-economia, lo stile di vita e abitudini igieniche. Un ulteriore questionario sulla allevamento, alimentazione, spazzolini da denti abitudini e antibiotici prescritti è stata allegata alle spedizioni di follow-up ed è tornato assieme ai campioni di metodi statistici
.
Tutti i dati sono stati elaborati con il software IBM SPSS (versione 22.0 , Chicago IL, USA). Le differenze di distribuzioni percentuali tra i due gruppi sono stati calcolati con i test chi-quadrato e correlazioni tra le conta batterica nelle madri e la loro prole di stati espressi come coefficiente di correlazione di Spearman. Abbiamo preso in considerazione p
-Valori inferiore a 0,05, come statisticamente significative
. Risultati
I gruppi sono stati bilanciati al basale per quanto riguarda tutti i fattori di fondo rilevanti, ad eccezione per la pausa di acqua (per avere maggiori dettagli, vedi Tabella 2). La percentuale di ragazze era un po 'più alta nel gruppo CS, ma la differenza non era statisticamente significativa. Le routine di alimentazione auto-riferito e l'uso del ciuccio sono riportati nella tabella 3. Gli alimenti per lattanti erano più comuni nel gruppo CS rispetto al gruppo V durante i primi 6 mesi, ma la differenza non ha raggiunto la significatività statistica. La frequenza di antibiotici prescritti alle madri durante i primi sei mesi dopo il parto era simile (& lt; 15%) in entrambi i gruppi. Il numero totale di cellule rilevati dai campioni V è stato mediamente superiore a quello dei campioni CS affatto campionamento occasioni: la nascita: 0.7 vs 0,5x10 6; 1 mese: 1.3 vs 0.9x10 6; 3 mesi: 1,6 vs 0.9x10 6; 6 mesi: 1.5 vs 0.9x10 6 celle. La prevalenza dei batteri selezionati é riassunto in Tabella 4. È stata osservata una maggiore diversità nel gruppo V. Ad esempio, A. naeslundi
, A. odontolytics
, F. nucleatum
e L. salivarius
sono stati rilevati solo tra i bambini per via vaginale consegnati. La prevalenza di S. sanguinis
, S.
Gordoni, R. denticariosa
e B. dentinum
aumenta con l'età in entrambi i gruppi ma la prevalenza è risultata significativamente più bassa nel gruppo CS (p
& lt; 0,05). S. mitis
e S. salivarius
visualizzati i più alti conta in entrambi i gruppi a tutti i campionamenti, ma i conti non sono stati associati con la modalità di consegna. C'era una correlazione statisticamente significativa tra le madri e la loro progenie del concernenti il profilo salivare sei mesi dopo il parto rispetto alle cinque ceppi nel gruppo SC e otto ceppi nel gruppo V (Tabella 5) .table 2 Baseline caratteristiche della famiglia in due gruppi (CS = C-sezione; V = parto vaginale)
variabile
CS
V
Sex (ragazze /ragazzi)
57/43
44/56
pausa acqua (sì)
29
100
Madre nata in Svezia (sì)
91
91
educazione della mamma, l'università (sì)
64
60
Madre fumatori (sì)
0
4
antibiotici prescritti (madre)
4
4
Siblings (& gt; 2)
6
6
valori nella tabella denotare cento
differenza astatistically significativa tra i gruppi (p
& lt.; 0,05, test chi-quadrato)
Tabella 3 auto-riferito i dati dei questionari distribuiti 1, 3 e 6 mesi dopo il parto vaginale (V) o C-sezione (CS)
variabile
1 mese
3 mesi
sei mesi
CS /V
CS /V
CS /V
L'allattamento al seno (sì)
89/95
71/84
55/69
Il latte artificiale (sì)
47/32
51/35
50/44
introdotto cibo-degustazione (sì)
0/0 0/4
72/83
Ciuccio (sì)
80/83
82/77
85/71
Denti presenti (sì)
0/0 2/0
30/32
pulizia orale (sì)
0/0 9/3
30/26
antibiotici (sì, neonato)
0/3
0/1 0/1
antibiotici ( Sì, le madri)
9/5
5/4 0/3
valori riportati in tabella indicano per cento
Table 4 Prevalenza (≥104 cellule) dei ceppi selezionati alla nascita e intervalli di tempo designati nei bambini consegnati vaginale (V) o con taglio cesareo (CS)
Strain
nascita
1 mese
3 mesi
sei mesi
CS /V
CS /V
CS /V
CS /V
A. naeslundi
0/5 0/0
0/2
0/2
A. odontolyticus
0 /12a
0 /32a
0 /30a
0 /32a
B. dentinum
5 /32a
13 /61a
8 /49a
16/63 bis
F. nucleatum
0/2
0/11
0 /10
0 /14a
L. casei
0/2 0/0
0 /0
0/0
L. salivarius
0/0 0/0
0/0 0/3
R. denticariosa
0 /12a
3 /22a
10/21
8 /39a
S. Gordoni
3 /15a
10/19
13 /32a
13 /38a
S. mitis
73/84
85/94
90/94
93/96
S. mutans
53 /76a
65 /88a
58 /88a
68 /92a
S. salivarius
28/36
45 /67a
53/71
48/70
S. sanguinis
0 /35a
5 /44a
10 /47a
13 /53a
V. parvula
0/0
3 /6
5/6
8/24
valori riportati in tabella denotano cento
differenza astatistically significativa tra i gruppi (p
& lt; 0,05, test chi-quadrato)
Tabella 5 colonizzazione orale di batteri selezionati nelle madri e dei loro bambini, 6 mesi dopo il parto vaginale (V) o C-sezione (CS)
Strain
CS
V
A. naeslundi
NS
NS
A. odontolyticus
NS
0.43
B. dentinum
0.54
0,28
F. nucleatum
NS
NS
L. casei
NS
NS
L. denticariosa
NS
0.45
L. salivarius
NS
NS
S. gordonii
0.48
0,36
S. mitis
0.59
0,32
S. mutans
0.85
0,36
S. salivarius
0,71
0.48
S. sanguinis
NS
0.56
V. parvula
NS
NS
I valori riportati nella tabella denotano Spearman due coefficiente di correlazione coda. NS
Non statisticamente significativa
Discussione
I risultati di questo studio relativamente grande prestano ulteriore sostegno per i risultati precedenti che la composizione del biofilm orale è influenzata dalla modalità di consegna [5, 6, 11] con un minore diversità tra i bambini consegnati con taglio cesareo. Quindi, l'ipotesi nulla potrebbe essere respinta. I nostri risultati devono tuttavia essere considerati con una certa cautela per una serie di ragioni. Prima di tutto, la composizione del primo microbiota salivare può essere influenzata da una serie di fattori diversi dalla modalità di consegna, come il trattamento peri recapito con antibiotici, dieta [12], pratiche alimentazione [7, 13], l'uso di ciucci [14], il reddito familiare [11, 13], e spazzolini da denti abitudini [15]. Nel nostro studio, il CS e gruppi vaginale consegnati erano simili per quanto riguarda socio-economia, la dimensione della famiglia, livello di istruzione della madre, e il comportamento alimentare in modo da considerare il rischio per i fattori confondenti come piccolo. Anche la prescrizione di antibiotici per le madri e le loro off-molle era pari secondo i questionari, anche se una certa sottostima può essere sospettato. In secondo luogo, la tecnica di ibridazione DNA-DNA a scacchiera ha i suoi punti di forza e limiti; Il vantaggio principale è che il metodo consente l'enumerazione di un gran numero di specie in numero elevato di campioni e quindi, considerato come uno strumento utile per il conteggio di specie batteriche in sistemi microbici complessi [16]. Tra i limiti, possibili reazioni incrociate e variando riproducibilità per i diversi ceppi è stata discussa [17]. In terzo luogo, è possibile che la procedura di campionamento può aver causato una maggiore variabilità nei risultati che la procedura di laboratorio come tale. Queste carenze, insieme con il livello di rilevamento relativamente elevato noi effettuati per quantificare i dati batteriche secondo il metodo cento come il più affidabile alternativa [17]. E 'comunque importante sottolineare che i valori di prevalenza riportati qui si è basata su un livello di soglia di circa 10 4 celle; i ceppi selezionati potrebbero benissimo essere presenti nei campioni ma non in quantità sufficiente per essere rilevato. Così, il naturale passo successivo sarebbe quindi di estendere la mappatura per includere l'intero microbiome orale. Un quarto di polarizzazione possibile era il tasso relativamente alto di abbandono durante il corso dello studio, e noi possiamo solo speculare sulla sua possibile influenza sui risultati.
La correlazione intra-familiare della microflora orale con particolare riferimento alla madre-bambino e acquisizione streptococchi mutans è stato descritto più volte prima [18-21]. È interessante notare che, Ruiz-Rodriguez e collaboratori [22] non sono riusciti a dare prova di una relazione madre-bambino per S. mutans
con coltura convenzionale, ma loro campione era piccola e S. mutans
era molto raramente rilevati (2%) tra i bambini all'età di 150 giorni. Nel presente studio, la maggior parte di tutti i bambini nel gruppo SC e quasi tutti nel gruppo V ospitava S. mutans
a 6 mesi di età e, a parte la diversa campionatura e tecniche analitiche, non abbiamo una spiegazione a questi contrastanti scoperte. Tuttavia, la correlazione madre-figlio chiaro per 8 delle 13 macchie nel gruppo V era interessante, ma ha bisogno di essere ulteriormente indagato con per esempio 16 s amplificazione e sequenziamento DNA ricombinante.
La domanda per quanto tempo una differenza di consegna-dipendente colonizzazione orale prevale, e se questo può influenzare la salute dentale più tardi nella vita, rimane aperta. Vi è tuttavia la prova giusto che l'acquisizione precoce di mutans streptococchi orali, in generale, è associato ad un aumentato rischio di sviluppo di carie [23, 24]. Inoltre, ci sono rapporti che suggeriscono che i bambini consegnati con taglio cesareo hanno un rischio elevato per asma infantile [25] e la carie dentale più all'età di 3-5 anni [26, 27]. Questo possibile relazione deve comunque essere verificata in ambienti più grandi e in studi prospettici che copre il giovane dentizione permanente.
Conclusioni
Entro i limiti del presente studio, si è concluso che la modalità di consegna ha un ruolo nella composizione del il biofilm orale durante i primi 6 mesi di vita. bambini vaginale consegnati sembrano avere una varietà maggiore di C-sezione per bambini e una somiglianza più stretto con le loro madri. Ulteriori studi per indagare una possibile influenza a lungo termine sulla salute orale sembrano giustificate
Abbreviazione
CS:.
Taglio cesareo
Dichiarazioni
Ringraziamenti
il progetto è stato sostenuto da una sovvenzione da Regione Halland, Svezia. Gli autori desiderano ringraziare il personale della clinica materno presso l'Ospedale Halland e tutti i genitori per la loro fiducia e la pazienza. La defunta signora Kerstin Magnusson (RDH) è riconosciuto per la sua assistenza tecnica specializzata
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concorrenti. interessi
Gli autori non hanno alcun conflitto di interesse a dichiarare
autori contributi
KB:. raccolto tutti i dati, eseguite le analisi statistiche e scrisse la prima bozza. JR: progettato lo studio, e finalizzato il manoscritto. GD: eseguite le analisi microbiche e scrisse il manoscritto. JD: progettato e supervisionato lo studio e finalizzato il manoscritto. ST: progettato lo studio, effettuato analisi statistiche e scrisse la prima bozza. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.
