Abstract
sfondo
Al fine di prevedere la prognosi a lungo termine e definire modalità di trattamento individuali per i pazienti con carcinoma a cellule squamose orale (OSCC), sono necessari biomarcatori tumorali più affidabili durante il periodo di pretrattamento workup. Il presente studio ha lo scopo di identificare più affidabili tumorali immunoistochimica marcatori prognostici nei campioni bioptici pretrattamento dei pazienti con OSCC.
Metodi
Abbiamo selezionato 57 pazienti che sono stati diagnosticati con OSCC primaria attraverso l'analisi istopatologica. campioni bioptici sono stati pretrattamento immunoistochimica analizzati per il fattore di trascrizione Nanog, staminali del cancro marker delle cellule CD44, e la proteina tumorale mutante 53 (p53 mutante). I modelli di immunoistochimica sono stati valutati per la loro associazione con le caratteristiche clinico-patologici di OSCC e tassi di sopravvivenza globale.
Risultati
stadio del tumore tardi, positivo metastasi linfonodali del collo, e la differenziazione di alta qualità sono stati associati con tassi di sopravvivenza significativamente più poveri. espressione avanzata di Nanog e mutante positività di p53 sono stati significativamente associato con clinicamente tumori in fase avanzata, positivo metastasi nodo al collo, istologicamente tumori ad alto grado, e tassi di sopravvivenza globale poveri. OSCCs con una forte co-rilevazione di Nanog e p53 mutante sono stati collegati a tassi di sopravvivenza significativamente più bassi rispetto a quelli con entrambi deboli espressione NANOG e p53 negatività. Aumentata espressione di CD44 ha avuto una correlazione limitata con le caratteristiche clinico-patologiche sfavorevoli.
Conclusione
alta espressione di Nanog e di espressione positiva di p53 mutante nei campioni bioptici pretrattamento dei pazienti con OSCC sono stati associati a tassi di sopravvivenza poveri e le caratteristiche clinico-patologiche sfavorevoli. Questi risultati dimostrano che Nanog, p53 mutante, e CD44 potrebbero essere utilizzati come marcatori immunoistochimici in campioni di pretrattamento di OSCC. In particolare, l'analisi per la co-espressione di Nanog e p53 mutante dovrebbe essere altamente disponibile come strumento per la prognosi e la selezione di modalità di trattamento individuali.
Parole
Oral carcinoma a cellule squamose marcatori tumorali immunoistochimica NANOG mutante p53 Sfondo
carcinoma a cellule squamose orale (OSCC) è un tumore maligno comune della regione testa e del collo; Tuttavia, i pazienti con OSCC hanno un tasso di sopravvivenza a 5 anni inferiore al 50%. I tradizionali sistemi di stadiazione TNM e classificazione istopatologica non consentono ai medici di prevedere con precisione aggressività o selezionare le modalità di trattamento di un tumore su base individuale [1]. Pertanto, la ricerca è in corso di indagare tumorali marcatori prognostici più efficaci e definitive per i pazienti con OSCC [2, 3]. Come il cellule staminali del cancro (CSC) ipotesi è diventata una delle teorie dominanti che spiegano la capacità del tumore-avvio e l'eterogeneità delle cellule tumorali, marcatori di cellule diverse staminali sono state studiate per determinare la loro correlazione con le caratteristiche del tumore clinico-patologici e la prognosi a lungo termine [4 -8].
la trascrizione primi fattori di Nanog, OCT4, e SOX2, che svolgono un ruolo fondamentale nel mantenimento della capacità di pluripotenza e di auto-rinnovamento in entrambe le cellule staminali embrionali e adulte, sono anche stati riportati come fattori di regolazione chiave nella CSC di carcinoma testa e del collo a cellule squamose (HNSCC) [7, 8]. Alta espressione di Nanog e OCT4 è stata correlata positivamente con istologicamente carcinomi di alta qualità e clinicamente prognosi infausta [7-10]. CD44 è stato il primo marcatore CSC descritto in un solido malignità [5], ed una frequenza elevata di cellule positive CD44 in HNSCC strettamente correlato con recidiva e aggressività del tumore [11]. Tumore della proteina 53 (p53) è considerato un biomarker tumorali tradizionale nel carcinoma a cellule squamose (SCC); tuttavia, la sua utilità come indicatore prognostico rimane poco chiaro [1]. Wild-type proteina p53 è appena rilevabile nei tessuti normali a causa della sua breve emivita di circa 20 min. [12] Tuttavia, il tumore suppressor gene p53 è mutato in circa il 40-60% dei casi OSCC, e questo mutante p53 svolge un ruolo importante nello sviluppo e progressione tumorale [12, 13]. È interessante notare che la proteina p53 mutante di solito è rilevabile tramite immunoistochimica (IHC) [14, 15].
Al fine di prevedere la prognosi a lungo termine e definire modalità di trattamento individuali per i pazienti con OSCC, biomarcatori tumorali più affidabili (compresi i marcatori prognostici immunoistochimici) sono necessari durante il periodo di pretrattamento workup. Il presente studio ha lo scopo di indagare l'espressione di vari marcatori tumorali tramite IHC, tra cui cellule staminali e biomarcatori tumorali legate, per identificare i marcatori prognostici più affidabili in dell'OSCC campioni bioptici raccolti prima del trattamento del cancro. In questo studio, abbiamo osservato una correlazione positiva tra le caratteristiche clinico-patologici di OSCCs ei modelli di espressione immunoistochimica di Nanog, mutante p53 umana, e CD44. Inoltre, le intensità di immunoistochimica di queste proteine marker (Nanog e p53 mutante) sono stati correlati positivamente con i tassi di sopravvivenza globale dei pazienti con OSCC.
Metodi
pazienti
Tra il 2004 e il 2014, un totale di 92 pazienti sono stati diagnosticati con OSCC presso il Dipartimento di Chirurgia orale e maxillofacciale dell'Ospedale Universitario nazionale Gyeongsang (GNUH) sulla base dell'analisi istopatologica di campioni bioptici prelevati prima del trattamento del cancro. Tra questi, 57 pazienti con OSCC primari (esclusi i pazienti con carcinoma metastatico e tumori ricorrenti; 36 uomini e 21 donne) sono stati selezionati per questo studio. I criteri di inclusione erano i pazienti che hanno accettato di partecipare allo studio, completato almeno 3 mesi di follow-up dopo aver subito un pretrattamento biopsia, e aveva volume del tessuto sufficiente nel campione pretrattamento biopsia per eseguire colorazione immunoistochimica. Le cartelle cliniche dei pazienti selezionati sono stati analizzati retrospettivamente. Il consenso informato per l'uso dei loro campioni di tessuto è stato ottenuto da tutti i pazienti, e questo studio è stato approvato dal Comitato Etico per la Ricerca Clinica presso GNUH (GNUH IRB-2012-09-004-002). IHC è stata eseguita su campioni pretrattamento bioptici dei 57 pazienti, che sono stati ottenuti dalla periferia del margine tumore con una lunghezza minima di 5 mm e larghezza minima e 2 mm di profondità, per analizzare la relazione tra pattern di espressione proteica e caratteristiche tumorali clinicopatologiche . La durata del follow-up per i 57 pazienti variava da 3 a 127 mesi, con una media di 35,9 mesi. I pazienti sono stati valutati clinicamente secondo il sistema di classificazione TNM elaborato dal Joint Committee on Cancer (7
° edizione, 2010) per la fase del tumore e del collo nodo metastasi e tassi di sopravvivenza globale sono stati anche determinati. campioni bioptici sono stati classificati istopatologico, e tumori sono stati classificati come pure, moderatamente o scarsamente differenziato secondo la classificazione WHO dei tumori [16].
analisi immunoistochimica di campioni bioptici
campioni bioptici sono stati fissati nel 10% formalina tamponata neutra per 24 ore, incorporati in un blocco di paraffina, tagliati in sezioni di 4 micron e montati su vetrini da microscopio SuperfrostPlus (Fisher Scientific, Rochester, NY, USA). Le sezioni sono state mantenute a temperatura ambiente per 12 h. Dopo l'idratazione, IHC per Nanog, CD44, e p53 mutante è stata effettuata utilizzando un immunocoloratore automatizzato (benchmark XT, Ventana Medical System Inc., Tucson, AZ, USA), e la visualizzazione è stata condotta utilizzando il kit Ultraview DAB (Ventana Medical System Inc. ) secondo il protocollo del produttore. Per immunocolorazione delle tre proteine marker, abbiamo usato coniglio anticorpi monoclonali (Abcam ™, Cambridge, UK). I numeri a tariffa diluizione e lotto degli anticorpi primari sono riassunti nella tabella 1. In breve, le sezioni sono state deparaffinate utilizzando la soluzione EZ Prep; poi di serie CC1 (pH 8,4 tampone conteneva Tris /borato /EDTA) è stato applicato per il recupero dell'antigene per 60 minuti a 100 ° C. I vetrini sono stati incubati a 37 ° C per 4 min con un inibitore DAB (3% H 2O 2) per bloccare l'attività perossidasica endogena. Poi, vetrini sono state incubate con l'anticorpo primario a 37 ° C per 32 min, seguita da incubazione con l'anticorpo secondario (Universal HRP Multimer) per 8 minuti a 37 ° C. I vetrini sono stati trattati con DAB + H 2O 2 substrato per 8 min seguita da ematossilina II e reagenti azzurrante a 37 ° C per controcolorazione nucleare. Per controlli negativi, solo incubazione con l'anticorpo secondario è stata eseguita, omettendo ogni incubazione con un anticorpo primario, nelle sezioni degli stessi campioni alle stesse condizioni. Inoltre, i tessuti della vescica e del carcinoma della pelle urinari embrionali umane sono stati utilizzati come controlli positivi per Nanog, CD44, e p53 mutante, rispettivamente, secondo il produttore di anticorpi recommendations.Table 1 Sommario delle caratteristiche clinico-patologici di OSCCs e IHC pattern di espressione di Nanog, CD44 e mutante p53
NANOG
CD44
mutante p53
totale No.
+++
++
+&–
++
+
–
+
–
No. di cases
57
21
18
18
28
21
8
34
23
Tumor siti
Gingiva
27
13
8
6
10
11
6
13
14
Guancia
4
0
3
1
2
2
0
3
1
Palate
10
4
3
3
9
1
0
10
0
Tongue
9
0
2
7
2
5
2
4
5
FOM
7
4
2
1
5
2
0
4
3
Tumor fase
I + II
24
6
4
14
10
9
5
11
13
III + IV
33
15
14
4
18
12
3
23
10
Neck nodo
N0
34
9
10
15
13
15
6
16
18
N+
23
12
8
3
15
6
2
18
5
Histo grade
Bene
22
4
4
14
9
9
4
6
16
Mod + Poor
35
17
14
4
19
12
4
28
7
Antibody
Rapporto di diluizione
1: 250
1: 100
1: 200
Fonte (Lotto n)
Abcam ™ (ab109250)
Abcam ™ (ab51037)
Abcam ™ (ab32049)
Abbreviazioni: FOM mq piano di bocca, N0
nodo collo negativo, N +
nodo collo positivo, bene
ben differenziati OSCC, Mod + Poor
moderatamente e scarsamente differenziati dell'OSCC
tessuto fette erano semi-quantitativamente analizzati per gli anticorpi deposizione in componenti cellulari da due patologi che sono stati accecati alle informazioni di studio. Sulla base di un metodo riportato in precedenza con modificazioni [10], immunocolorazione positiva di Nanog e CD44 è stato segnato da una combinazione di intensità (0, colorazione negativa; 1, colorazione debole, 2, colorazione moderata, e 3, forte colorazione) e la percentuale cellule di colorate positivamente tumorali in campi ad alta potenza (0, 1, negativi; & lt; 25%; 2, 25-50%, 3, 51-75%, e 4, & gt; 75%). La somma delle intensità di colorazione e percentuale di punteggi cellule tumorali positive è stata classificata come segue: +++ (forte, 6-7); ++ (Moderata, 4-5); + (Debole, 2-3); e - (negativo, 0-1). Il pattern di espressione di p53 mutante è stato anche valutato con la combinazione di intensità di colorazione e la percentuale di cellule tumorali positive e semplicemente classificato come + per positivo (somma dei punteggi superato 3) e - per negativo (2 o inferiore espressione negativa o debole espressione in meno del 25% delle cellule), in linea con le precedenti relazioni [10, 17, 18]. Almeno tre diversi campi sotto alto ingrandimento (× 400) per vetrino sono stati analizzati per immunocolorazione intensità. Una sintesi dei risultati della colorazione immunoistochimica può essere trovato in Tabella 1.
Analisi statistica e analisi di sopravvivenza globale
Il rapporto tra le intensità di espressione di Nanog, p53 mutante, e CD44 in campioni di OSCC è stata statisticamente valutate con il chi- quadrato di prova. Allo stesso modo, la correlazione tra i pattern di espressione proteica e le caratteristiche clinico-patologici di OSCC, tra cui lo stadio tumorale, collo metastasi linfonodali e grado istologico, è stata anche analizzata utilizzando il test chi-quadro. L'analisi di sopravvivenza globale è stata condotta utilizzando il metodo di Kaplan-Meier, ed i dati sono stati confrontati con un log-rank test per i 57 campioni dell'OSCC. In primo luogo, l'analisi di sopravvivenza globale è stata effettuata in termini di modalità di trattamento così come le caratteristiche del tumore clinico-patologici, tra cui lo stadio tumorale, collo metastasi linfonodali e grado istologico (Fig. 5a-d). In questo studio, i pazienti sono stati divisi in base alle modalità di trattamento in tre gruppi: solo la chirurgia (Surg), un intervento chirurgico in combinazione con la radioterapia adiuvante (Surg + RT, tra cui la chemioradioterapia concomitante), la radioterapia e solo (RT). La maggior parte dei pazienti nel gruppo RT sono stati sottoposti a radioterapia palliativa perché hanno rifiutato di sottoporsi ad intervento chirurgico o loro tumori erano inutilizzabile. In secondo luogo, analisi di sopravvivenza è stata condotta in termini di intensità di immunocolorazione NANOG, p53 mutante, e CD44 nei campioni bioptici pretrattamento (Fig. 5e-h). la sopravvivenza univariata e multivariata analisi sono state effettuate utilizzando un modello di rischio proporzionale di regressione di Cox. Tutte le analisi sono state eseguite utilizzando software IBM SPSS Statistics (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). I casi sono stati censurati alla data o la morte del paziente o all'ultimo follow-up. I risultati sono stati considerati significativi con p
& lt; 0,05, e queste differenze sono state indicate con un asterisco o lettere diverse.
Risultati
informazione dei pazienti selezionati
Un totale di 57 pazienti con OSCC composto da 36 uomini e 21 donne sono stati inclusi in questo studio. l'età del paziente variava 17-90 anni (media, 65,4 ± 13,9 anni). Il sito di dell'OSCC nei pazienti includeva la gengiva (27 casi), il palato (10 casi), lingua (9 casi), pavimento della bocca (7 casi), e la guancia (4 casi) (Tabella 1). I pazienti sono stati divisi in base alle modalità di trattamento nel modo seguente: 15 pazienti nel gruppo Surg, 22 pazienti nel gruppo Surg + RT, e 20 pazienti nel gruppo RT. Il periodo medio di follow-up in tutti i pazienti era 35,9 mesi; Nel frattempo, 24 pazienti (19, 4, e 1 paziente del RT, Surg + RT, e gruppi surg, rispettivamente) sono morti dopo una media di 18,4 mesi, e 33 pazienti sono sopravvissuti più di un follow-up medio di 48,7 mesi. In tutti i casi di intervento chirurgico, i margini del tumore di resezione sono stati fissati come ad almeno 2 cm di altezza, e il campo di resezione è stato confermato di essere utilizzando sezioni di biopsia congelati libera da tumore
. Pattern di espressione di Nanog, p53 mutante, e CD44 in OSCC pretrattamento biopsia esemplari
Nanog è stato rilevato principalmente nei nuclei delle cellule dell'OSCC, ma qualche espressione Nanog è stato rilevato nel citoplasma delle cellule tumorali. p53 mutante è stato localizzato nei nuclei delle cellule tumorali, mentre CD44 è stato rilevato nella membrana cellulare delle cellule OSCC (Fig. 1). Il numero di cellule positive e le intensità di espressione erano generalmente maggiore nei OSCCs di alta qualità (moderatamente o scarsamente differenziati) rispetto ai tumori di basso grado (ben differenziato) (Fig. 1 e 2). Dei 57 campioni di OSCC, l'espressione di Nanog era forte in 21 esemplari, moderata in 18 esemplari, e debole o negativa in 18 esemplari. espressione moderato, debole, e negativa di CD44 è stata osservata in 28, 21 e 8 campioni OSCC rispettivamente. Inoltre, 34 campioni erano positivi per p53 mutante, mentre 23 campioni erano negativi (Tabella 1). Figura. 1 colorazione immunoistochimica di Nanog, p53 mutante, e CD44 in OSCCs. una Sezioni seriali di campioni dell'OSCC moderatamente differenziato mostrano espressione moderata di Nanog e CD44, e l'espressione positiva di p53 mutante. b In elevati campi ingrandimento di sezioni seriali, NANOG viene rilevato principalmente nei nuclei ma si esprime anche nel citoplasma di alcune cellule tumorali. p53 mutante viene rilevata nei nuclei delle cellule tumorali, mentre CD44 è localizzato nelle membrane delle cellule tumorali. Le frecce indicano i siti di co-espressione di Nanog, p53 mutante, e CD44 in OSCCs. Scala bar = 50 micron
Fig. 2 Immunocolorazione di bene (a & amp; b) e (c) scarsamente OSCCs differenziati. un Nelle sezioni seriali, l'espressione negativa di Nanog, p53 mutante, e CD44 viene rilevato in un campione di OSCC ben differenziato (* indica tessuto tumorale). b In un altro caso di dell'OSCC ben differenziato, Nanog e p53 mutante sono quasi negativo, visto in meno del 25% di cellule positive, mentre CD44 è debolmente rilevato nella membrana della cellula tumorale (frecce). viene rilevato C in un scarsamente differenziati esemplare dell'OSCC, una maggiore espressione di Nanog, p53 mutante, e CD44. Le frecce indicano co-localizzazione delle tre proteine marker. Barra di scala = 50 micron
sono stati osservati i rapporti diretti tra le intensità di espressione di Nanog, p53 mutante, e CD44 (Fig. 3a). I tumori con una forte espressione di Nanog anche spesso esposti espressione positiva mutante p53 (p
= 0,002) e l'espressione di CD44 maggiore (p
& lt; 0,001). Allo stesso modo, i tumori con espressione mutante p53 positivo visualizzata aumentata espressione di CD44 (p
& lt; 0,001) (Fig. 3a). In alcuni casi, co-espressione di NANOG, p53 mutante, e CD44 è stata rilevata in sezioni seriali degli stessi campioni dell'OSCC, indicando che alcune cellule tumorali presentano co-espressione di queste tre proteine marker. È interessante notare che la co-espressione di tutte e tre le proteine è stata più frequentemente osservata in moderatamente o scarsamente differenziati OSCCs (Fig. 1b e 2c). Figura. 3 correlazione dei pattern di espressione di Nanog, p53 mutante, e CD44 e il grado istologico di OSCCs. un I tumori con una maggiore espressione di Nanog mostrano una maggiore frequenza di positività mutante p53 (p
= 0,002) e l'espressione di CD44 maggiore (p
& lt; 0,001). Allo stesso modo, OSCCs con l'espressione positiva di p53 mutante mostrano più alta espressione di CD44 (p
& lt; 0,001). b forte o moderata espressione di Nanog è significativamente correlata alla vista istopatologico OSCCs di alta qualità (p
& lt; 0,001); tuttavia, l'espressione debole o negativa di Nanog correla con carcinoma ben differenziato (p = 0,018
). Inoltre, espressione positiva p53 mutante è significativamente associato al carcinoma alto grado (p
& lt; 0,001). Allo stesso modo, l'espressione di CD44 maggiore è associata a tumori ad alto grado, ma non è stata osservata significatività statistica (p = 0,058
). I dati rappresentano il numero di casi con l'espressione positiva di ogni proteina, e un asterisco (*) indica differenze significative (p
& lt; 0,05). [Abbreviazioni: NANOG (++ /+++), espressione forte o moderata di NANOG; Nanog (+/-), espressione debole o negativa di NANOG; p53 (+), l'espressione positiva di p53 mutante; p53 (-), espressione negativa di p53 mutante; CD44 (++), più che espressione moderata di CD44; CD44 (+), debole espressione di CD44; CD44 (-), espressione negativa di CD44; Bene, OSCCs ben differenziati; Mod + Poor, moderatamente e scarsamente differenziato OSCCs]
di associazione tra le caratteristiche del tumore clinico-patologici e gli schemi di espressione di Nanog, p53 mutante, e CD44
forte espressione di Nanog è risultata significativamente correlata con OSCCs istologicamente-alto grado (p
& lt; 0,001), mentre l'espressione debole o negativa di Nanog prevalentemente avvenuto carcinomi in ben differenziati (p = 0,018
). Allo stesso modo, espressione positiva p53 mutante era significativamente associato con carcinomi di alta qualità (p
& lt; 0,001) (Fig. 3b). tumori di alta qualità esposte aumentata espressione di CD44, ma questo risultato non era statisticamente significativa (Fig. 3b). Nella valutazione della relazione tra l'espressione di proteine e stadio del tumore, forte e di espressione moderata di Nanog visualizzata associazioni dirette con tumori in fase avanzata (stadio III e IV; p
& lt; 0,05), mentre l'espressione debole della Nanog è stata direttamente associata con tumori in fase iniziale (fase I e II; p = 0.018)
(Fig 4a.). Positivo l'espressione di p53 mutante è stata frequentemente osservata nei tumori in fase avanzata (p = 0,049
). Allo stesso modo, più alta espressione di CD44 è stata frequentemente osservata nei tumori in fase avanzata, ma la differenza non era statisticamente significativa (Fig. 4a). Nell'analisi di metastasi linfonodali del collo, espressione debole o negativa di Nanog era significativamente correlata al negativo metastasi nodo collo OSCCs (p
= 0,005) (Fig. 4b). Allo stesso modo, espressione negativa di p53 mutante (p = 0,007
) e debole espressione di CD44 (p = 0.049
) erano significativamente correlato ad una maggiore frequenza di negativo metastasi nodo del collo (Fig. 4b). Figura. 4 Correlazione di stadio tumorale o del collo del nodo metastasi e gli schemi di immunoistochimica di Nanog, p53 mutante, e CD44. un forte o moderata espressione di Nanog è direttamente associato con tumori in fase avanzata, mentre l'espressione debole o negativa di Nanog è direttamente correlata al carcinoma in stadio precoce (p
& lt; 0,05). positiva espressione di p53 mutante è anche significativamente associato con tumori in fase avanzata (p = 0,039
). Più alta espressione di CD44 è spesso associata a tumori in fase avanzata, ma non è stata osservata significatività statistica (p
& gt; 0,05). b tumori con espressione debole o negativa di Nanog (p = 0,004
), espressione negativa di mutante p53 (p = 0.006
), e debole espressione di CD44 (p = 0.049
) mostrano una frequenza significativamente più alta di negativo metastasi nodo al collo. Alti livelli di espressione dei tre proteine non sono associati con il nodo del collo di metastasi (p
& gt; 0,05). I dati rappresentano il numero di casi con l'espressione positiva di ogni proteina, e un asterisco (*) indica una differenza significativa (p
& lt; 0,05). [Abbreviazioni: I + II, lo stadio del tumore I & amp; II; III + IV, stadio del tumore III & amp; IV; N0, negativo nodo collo di metastasi; N +, positivo collo metastasi linfonodali]
L'analisi di sopravvivenza
L'analisi dei tassi di sopravvivenza globale dei pazienti in termini di caratteristiche tumorali clinicopatologiche ha rivelato alcuni risultati significativi (Fig. 5 bis-D). I pazienti con ritardo-fase dell'OSCC (stadio III e IV) ha avuto un tasso di sopravvivenza più bassa statisticamente significativa rispetto a quelli con tumori in fase iniziale (stadio I e II) (p
& lt; 0,05, figura 5a.). I pazienti affetti da OSCC e positivo metastasi nodo collo visualizzati un tasso di sopravvivenza significativamente più poveri rispetto a quelli con metastasi negativo nodo collo (p
& lt; 0,01, figura 5b.). Inoltre, i pazienti con vista istopatologico di alta qualità OSCC ha avuto una prognosi peggiore rispetto a quelli con tumori ben differenziati (p
& lt; 0,01, figura 5c.). In termini di modalità di trattamento, il gruppo RT mostrato un tasso di sopravvivenza significativamente più poveri dei gruppi surg e Surg + RT (p
& lt; 0,01, figura 5d.). Figura. 5 Il tasso di sopravvivenza globale dei pazienti OSCC in base alle caratteristiche clinico-patologiche del tumore, modalità di trattamento, e modelli di immunoistochimica di Nanog, p53 mutante, e CD44. a pazienti con tumori in fase avanzata (stadio III & amp; IV) mostrano tassi significativamente più poveri di sopravvivenza (p
& lt; 0,05). b-d a un'associazione positiva tra il tasso di sopravvivenza complessiva dei pazienti OSCC e tumore di grado istopatologico, nodo al collo le metastasi, e si osserva modalità di trattamento. Il gruppo ben differenziato OSCC, gruppo di nodi collo negativo, e mostra collettiva trattamento chirurgico significativamente migliori tassi di sopravvivenza a lungo termine rispetto ai corrispondenti gruppi opposti (p
& lt; 0,01). e aumentata espressione di Nanog è associato ad un tasso di sopravvivenza poveri; in particolare, i pazienti con espressione forte o moderata di Nanog mostrano tassi di sopravvivenza significativamente più bassi rispetto a quelli con espressione NANOG debole o negativa (p
& lt; 0,01). f I pazienti con p53 mutante (+) - tumori che esprimono mostrano un tasso di sopravvivenza più bassi di quelli con tumori negativi per p53 mutante (-) (p
& lt; 0,01). g espressione CD44 avanzata tende a correlare con tassi di sopravvivenza poveri, ma è stata trovata alcuna significatività statistica (p
& gt; 0,05). h OSCCs con co-espressione di una maggiore NANOG e p53 mutante [NANOG (++) /p53 (+)] correlare con un tasso di sopravvivenza globale significativamente più bassi rispetto a quelli con NANOG debole e p53 negatività [NANOG (+/-) /p53 ( -)] (p = 0.014
). In particolare, non ci sono stati morti nelle 12 casi di Nanog (+/-) /p53 (-) durante il periodo di follow-up. Diverse lettere indicano differenze statisticamente significative tra i gruppi (p
& lt; 0,05)
Inoltre, l'analisi di sopravvivenza in termini di modelli di immunoistochimica di Nanog, p53 mutante, e CD44 rivelato differenze statisticamente significative (Fig 5e-h.). L'intensità espressione di Nanog è stata direttamente associata con il tasso di sopravvivenza globale; i pazienti con forti tumori Nanog che esprimono [NANOG (+++)] avevano tassi di sopravvivenza più poveri rispetto a quelli con tumori deboli o negativi Nanog che esprimono [NANOG (+/-)] (p
. & lt; 0,01, Fig 5e) . Allo stesso modo, è stata osservata un'associazione positiva tra l'espressione di p53 mutante e il tasso di sopravvivenza globale; In particolare, i pazienti con p53-positivi dell'OSCC avevano tassi di sopravvivenza più bassi rispetto a quelli con p53-negativi dell'OSCC (p
. & lt; 0,01, figura 5f). espressione CD44 avanzato è risultato associato a tassi di sopravvivenza poveri, ma questo risultato non era statisticamente significativa (p
& gt; 0,05, figura 5g.). È interessante notare che i pazienti con co-espressione di una maggiore NANOG (espressione moderata o forte) e p53 positività [NANOG (++) /p53 (+)] avevano tassi di sopravvivenza significativamente più brevi rispetto ai pazienti con NANOG deboli e di espressione di p53 negativo [NANOG (+ /-) /p53 (-)] (p = 0,014
, Fig 5h).. Di rilievo, tra i 28 pazienti con NANOG (++) /p53 (+) i tumori, 17 pazienti sono morti, mentre non ci sono stati morti in 12 pazienti con NANOG (+/-) /p53 (-) lesioni durante il follow fino periodo (Fig. 5h). Univariata di Cox analisi di regressione ha rivelato che la metastasi nodo al collo, istologicamente tumore ad alto grado e stadio avanzato del tumore sono stati associati ad una prognosi significativamente più poveri. Inoltre, aumentata espressione di NANOG e p53 mutante, soprattutto co-rilevamento di queste due proteine, nei campioni bioptici pretrattamento dell'OSCC è direttamente associato con bassi tassi di sopravvivenza (Tabella 2). Allo stesso modo, il rischio proporzionale di Cox modello di regressione multivariata ha evidenziato che la metastasi nodo al collo, grado istologico, e pattern di espressione immunoistochimica di Nanog sono stati direttamente correlato al tasso di sopravvivenza dei pazienti affetti da OSCC (tabella 3) .table 2 univariata di Cox analisi di regressione relazione alla sopravvivenza complessiva dei pazienti OSCC 57
sopravvivenza globale
variabile
P valore
Hazard ratio
95% CI nodo
collo
& lt; 0,001 * 6,795
2,745-16,817
grado istologico
0.003 *
12,271
2,336-64,465
Tumor stage
0.009*
3.718
1.385–9.980
NANOG
0.019*
4.494
1.275–15.839
Mutant p53
0.016*
3.747
1.279–10.977
CD44
0.263
2.315
0.532–10.097
NANOG + P53
0,028 * 0,741
0,217-2,531
Abbreviazione: CI
intervallo di confidenza
* Statisticamente significativo ( p
& lt; 0,05)
Tabella 3 multivariata di Cox analisi di regressione in relazione alla sopravvivenza complessiva dei pazienti OSCC 57
sopravvivenza globale
variabile
P
valore
Hazard ratio
95% CI
collo nodo
0,004 *
6.549
1,800-23,822
istologica grado
0,012 *
3.598
1,330-9,937
Tumore stage
0.254
3.546
0.403–31.225
NANOG
0.035*
4.319
3.351–27.476
Mutant p53
0,180
1.195
1. 713-5,754
Abbreviazione: CI
intervallo di confidenza
* Statisticamente significativo (p
& lt; 0,05)
Discussione
Poiché l'emergere dell'ipotesi CSC come una teoria chiave per spiegare la progressione del cancro, i pattern di espressione di diversi marcatori di cellule staminali pluripotenti e fattori di trascrizione sono state studiate in vari tessuti tumorali o linee cellulari per determinare la loro correlazione con la prognosi a lungo termine. Nel presente studio, agli inizi del fattore di trascrizione Nanog, il marcatore CD44 CSC, e p53 mutante umano sono stati studiati immunoistochimica nei campioni bioptici pretrattamento di 57 pazienti con OSCC per identificare qualsiasi rapporto dei loro pattern di espressione con le caratteristiche del tumore clinico-patologici e la prognosi del paziente. I risultati di questo studio hanno dimostrato che i pattern di espressione immunoistochimica di Nanog e p53 mutante erano direttamente associati con tassi di sopravvivenza globale così come le caratteristiche clinico-patologici, tra cui lo stadio tumorale, collo metastasi linfonodali e grado istologico. I pazienti con OSCC il cui tumore era più alta espressione di Nanog e p53 mutante aveva caratteristiche clinico-patologiche meno favorevoli e tassi di sopravvivenza inferiori. espressione avanzata di CD44 è stata anche associata a prognosi infausta e tassi di sopravvivenza più bassi, ma non è stata osservata significatività statistica. Recentemente, una modalità comune per predire la prognosi del cancro è stata la misura della intra-tumorale eterogeneità genetica [19, 20]. L'eterogeneità denota che i tumori sono composti da più sottopopolazioni clonali di cellule differenti caratteristiche, e, quindi, l'esame istologico rivela spesso differenze nella morfologia e le proprietà delle cellule, tra le cellule nello stesso campione di cancro [20]. Migliorata l'eterogeneità all'interno del tumore è stata direttamente correlata con aumento della mortalità; in particolare, elevata eterogeneità e p53 mutazione positività sono stati associati con tassi di mortalità più elevati in un ampio studio di coorte della testa e del collo [19]. Nel presente studio, sezioni seriali di campioni tumorali spesso rivelato il co-espressione di Nanog, p53 mutante, e CD44, che è stato associato ad una prognosi peggiore. Il co-rilevazione di queste diverse proteine marker nella stessa cellula tumorale o stessa regione tumore può rappresentare elevata eterogeneità del tumore.
Nanog è un fattore di trascrizione precoce e marcatore pluripotenti che mantiene l'auto-rinnovamento delle cellule staminali embrionali e mesenchimali [8 ]. Recenti studi hanno rivelato che Nanog è altamente rilevato in poco carcinomi differenziati e tumori in fase avanzata [8-10]. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.
