Abstract
sfondo
I papillomavirus umano (HPV) sono una grande famiglia di virus a DNA privi di involucro, principalmente associata a tumori cervicali. evidenze epidemiologiche recenti suggeriscono che l'HPV può essere un fattore di rischio indipendente per i tumori orofaringei. L'evidenza suggerisce ora HPV può modulare il processo di tumore maligno in alcuni tumori dell'orofaringe da tabacco e alcol-indotta, ma potrebbe anche essere il fattore oncogenico primario per indurre la cancerogenesi da parte di alcuni non-fumatori. Altre prove, tuttavia, è necessaria per quanto riguarda la prevalenza di HPV orale tra gli adulti in buona salute per stimare il rischio. L'obiettivo di questo studio è stato quello di eseguire uno screening HPV di normali adulti sani per valutare la prevalenza di HPV per via orale.
Metodi
pazienti adulti sani in una scuola dentale degli Stati Uniti sono stati selezionati per partecipare a questo studio pilota. DNA è stato isolato da campioni di saliva e screening per l'HPV ad alto rischio ceppi HPV16 e HPV18 e successivamente trattati con qPCR per la quantificazione e per confermare la sensibilità analitica e specificità.
Risultati
analisi chi-quadro ha rivelato il campione del paziente è stato rappresentativo di la popolazione clinica in generale rispetto al sesso, razza ed età (p
& lt; 0,05). Quattro campioni sono stati trovati al porto DNA HPV16, che rappresentano il 2,6% del totale (n = 151). Tre dei quattro campioni HPV16-positivi sono stati da pazienti sotto i 65 anni di età e tutti e quattro erano donne Etnia (non bianco). Non ci sono i campioni sono risultati positivi per HPV18.
Conclusioni
Il reclutamento di successo e lo screening dei pazienti adulti sani hanno rivelato HPV16, ma non HPV18, era presente in un piccolo sottoinsieme. Questi risultati forniscono nuove informazioni sullo stato di HPV per via orale, che può aiutare a contestualizzare i risultati di altri studi che dimostrano i tassi di cancro orale sono aumentati negli Stati Uniti sia tra le donne e le minoranze e in alcune aree geografiche quali non vengono fornite esclusivamente dai tassi di tabacco e alcool uso. I risultati di questo studio possono essere di valore significativo per migliorare la nostra comprensione della salute orale e rischio di malattia, nonché per contribuire a progettare futuri studi che esplorano il ruolo di altri fattori che influenzano l'esposizione di HPV per via orale, così come a breve e lungo . conseguenze a lungo termine di infezione da HPV orale
materiale supplementare elettronica
La versione online di questo articolo (doi:. 10 1186 /1472-6831-11-28) contiene materiale supplementare, che è disponibile per gli utenti autorizzati.
Sfondo
il papillomavirus umano (HPV) è stato implicato come la causa di quasi tutti i tumori della cervice in tutto il mondo [1-3]. Questi rappresentano una grande famiglia di virus senza involucro di DNA che possono essere trovate integrato nel genoma dell'ospite, non integrati o episomiale, o come una combinazione o miscela di questi tipi di tessuti infetti [4-9]. virus HPV infettano molti tipi di cellule epiteliali, con neoplasie intraepiteliali che rappresentano la stragrande maggioranza dei tumori HPV-correlate [5, 10, 11].
evidenze epidemiologiche recenti suggeriscono che l'HPV può anche essere un fattore di rischio indipendente per il cancro orofaringeo , rivelando l'HPV in tre volte il numero di lesioni orali pre-cancerose, e quasi cinque volte il numero di tumori orofaringei rispetto al normale mucosa orale [12-14]. Di tutti i tipi di HPV, ad alto rischio ceppi HPV16, e in minor misura HPV18, sono più comunemente identificata da biopsie orali [15-21]. Anche se i tradizionali fattori di rischio per lo sviluppo di cancro orofaringeo rimangono l'uso di tabacco e il consumo di alcol, altri fattori di rischio, come l'HPV, possono svolgere un ruolo significativo nel determinare se si sviluppa e quanto velocemente si può progredire [14, 19, 22-28].
Il relativamente basso presenza di HPV ad alto rischio nei tessuti normali e molto più alta prevalenza nelle lesioni orofaringee pre-cancerose e cancerose può suggerire che l'HPV preferenzialmente infetta già sviluppare tumori orofaringei [12-14]. Sebbene sia possibile che la bassa prevalenza in individui sani potrebbe essere attribuibile ad altri fattori, tra raccolta del campione improprio o sensibilità del test, è anche possibile che l'HPV può funzionare per modulare il processo di malignità in sviluppo o tumori orofaringei stabiliti, come è stato osservato negli studi di infezione da HPV in altri tumori in via di sviluppo [29-39]. Ad esempio, recenti studi epidemiologici e caso-controllo hanno dimostrato che i pazienti con tumori orofaringei HPV-positivi erano significativamente migliorato i tassi di sopravvivenza [12, 40, 41] e tassi di risposta terapeutica rispetto ai controlli HPV-negative [42]. Diversi in vitro
studi hanno recentemente studiato i possibili meccanismi che possono spiegare questi cambiamenti fenotipici in tumori orofaringei [25-27]. La prova è ora accumulando che l'infezione da HPV di alcuni tumori orofaringei si correla con un aumento dei tassi di sopravvivenza e una migliore prognosi tra alcuni pazienti a causa di questi cambiamenti nella risposta cellulare [40-45]. Questi studi mettono in evidenza la necessità di comprendere non solo la prevalenza di infezione da HPV per via orale, ma anche la durata e la persistenza di tali infezioni, a causa della loro capacità di influenzare la progressione del tumore orofaringeo.
E 'probabile che l'HPV può modulare il processo di tumore maligno in un po 'al tabacco e alcol-indotti tumori orofaringei, ma può anche essere il fattore oncogenico primaria per indurre la carcinogenesi in un sottogruppo di pazienti senza questi fattori di rischio tradizionali. Alcune prove hanno dimostrato che non tabacco e non alcol correlate tumori orofaringei erano sei volte più probabilità di ospitare le infezioni da HPV rispetto ai controlli assortita caso [46]. Per valutare con precisione il rischio, sono necessari ulteriori stime di prevalenza di HPV per via orale tra gli adulti in buona salute. Studi internazionali hanno valutato la prevalenza di HPV in adulti sani utilizzando campioni di biopsia, rivelando tassi di prevalenza che andavano da 0 a 15% [20, 47-51]. Inoltre, altri studi hanno cominciato a segnalare saliva meno invasiva e metodi di test di lavaggio basato orali per identificare HPV tra campioni di saliva adulti sani, rivelando tassi di prevalenza compreso tra 2,8 al 25% [15, 52-60].
Alcuni di questi studi di screening HPV orale sono stati eseguiti negli stati Uniti il normali adulti sani, oltre a pazienti con tumore orofaringeo [57, 58, 61]. Questi studi hanno riportato tassi molto più bassi, tra il 1,3 e il 7%, rispetto ai precedenti studi internazionali [47, 50, 53]. Sulla base di queste informazioni, l'obiettivo di questo progetto è stato quello di eseguire uno screening per i più diffusi ceppi di HPV ad alto rischio, HPV16 e HPV18, in adulti sani. Questo studio pilota è stato eseguito in Nevada, uno stato di recente documentato di avere tassi crescenti di cancro orofaringeo tra il 1997 e il 2005 - nonostante la diminuzione dei tassi del consumo di tabacco e alcol nello stato, così come in calo i tassi di cancro orofaringeo a livello nazionale [23, 24] . L'obiettivo a lungo termine è quello di fornire informazioni più dettagliate su ad alto rischio la prevalenza di HPV per via orale per consentire stime più robuste di rischio di cancro orofaringeo.
Metodi
soggetti umani
Il protocollo per questo studio intitolato "La prevalenza di Oral Human Papilloma Virus (HPV) presso l'Università del Nevada, Las Vegas - School of Dental Medicine (UNLV-SDM) Clinica della popolazione "è stata introdotta, modificata, e approvato dall'Ufficio UNLV di Research Integrity - soggetti umani (OPRS # 1002 -3361) il 9 aprile 2010. in breve, soggetti in questo campione di convenienza sono stati reclutati dai membri della Clinica UNLV-SDM durante la loro visita odontoiatrica in una delle 15 date clinica. Consenso informato è stato richiesto ed è stato condotto in loco. Criteri di inclusione: i soggetti dovevano avere almeno 18 anni o più e devono accettare di partecipare. Criteri di esclusione: soggetti di età inferiore ai 18 anni di età, i soggetti che ha rifiutato di partecipare, e soggetti con precedente diagnosi di cancro orofaringeo sono stati esclusi dimensione del campione
per determinare una dimensione del campione del caso, studi precedenti che a screening per alto. rischio di HPV per via orale in adulti sani sono stati valutati per determinare la gamma di dimensioni del campione, che variavano notevolmente da 12 - 1.680 [47-62]. Precedenti ricerche a UNLV e la clinica UNLV-SDM hanno dimostrato tassi di partecipazione bassi per invasivi, proiezioni a base di sangue [63], ma più alti tassi di partecipazione utilizzando bio-monitoraggio non invasivo e metodi di screening, tra cui la raccolta della saliva (dati non pubblicati). Questi studi hanno campioni di dimensioni che vanno da 16 - 200. Sulla base di queste informazioni combinato la dimensione massima del campione è stata stimata essere 200.
Saliva Collection protocollo
In breve, adulti sani che hanno accettato di partecipare hanno dato un piccolo, sterile, contenitore di raccolta della saliva, un tubo da 50 ml polipropilene sterile da Fisher Scientific (fair Lawn, NJ). I partecipanti sono stati poi invitati a masticare un piccolo pezzo di paraffina per un minuto e poi di espettorare. I campioni sono stati conservati in ghiaccio fino trasporto al laboratorio biomedico per l'analisi. Ogni campione di saliva è stato assegnato un unico, il numero generato in modo casuale per evitare distorsioni di ricerca. Le informazioni demografiche per quanto riguarda il campione è stato raccolto in concomitanza, che consisteva di età, sesso ed etnia solo. conteggio
cellulare e l'isolamento del DNA
Tutti i campioni sono stati centrifugati per 10 minuti a 2.100 g
(RCF) e il pellet lavato con soluzione salina 1X tampone fosfato (PBS) (HyClone: Logan, UT) e risospeso in 5 ml di PBS 1X. il numero delle cellule è stato determinato utilizzando Trypan Blue (Fisher Scientific: Fair Lawn, NJ) utilizzando una Zeiss Axiovert 40 microscopio invertito (Gottinga, Germania) e un emocitometro (Fisher Scientific: Fair Lawn, NJ). Per determinare se i campioni presentavano il virus HPV, DNA è stato isolato dal campione di saliva usando un minimo di 3,5 × 10
5 cellule e il kit di isolamento GenomicPrep DNA (Amersham Biosciences: Buckinghamshire, UK), utilizzando la procedura raccomandata dal produttori, come precedentemente descritto [26, 27, 32]. purezza DNA è stato calcolato usando misurazioni del rapporto di assorbanza a 260 e 280 nm (rapporto A260 /A280 tra 1,7 e 2,0). reazione
catena della polimerasi (PCR)
DNA da ciascun campione è stato poi utilizzato per eseguire la PCR con la Fisher exACTGene completo kit per la PCR (Fisher Scientific: fair Lawn, NJ) e un gradiente termociclatore Mastercycler (Eppendorf: Amburgo, Germania) utilizzando i seguenti primer per HPV16 [26, 27], HPV18 [27, 32], e glyceraldehyde- 3- fosfato deidrogenasi (GAPDH) [64], sintetizzato da SeqWright (Houston, TX):
HPV16 primer forward, ATGTTTCAGGACCCACAGGA;
HPV16 fondo, CCTCACGTCGCAGTAACTGT inversa;
HPV18 primer forward, ATGGCGCGCTTTGAGGATCC;
HPV18 primer reverse , GCATGCGGTATACTGTCTCT;
GAPDH primer forward, ATCTTCCAGGAGCGAGATCC;
GAPDH invertire fondo, ACCACTGACACGTTGGCAGT;
Uno mg di DNA modello è stato utilizzato per ogni reazione. La fase iniziale di denaturazione ha funzionato per tre minuti a 94 ° C. Un totale di 30 cicli di amplificazione sono stati eseguiti, costituito da 30 secondi di denaturazione a 94 ° C, 60 secondi di ricottura a 58 ° C e 30 secondi di estensione a 72 ° C. estensione finale è stato eseguito per cinque minuti a 72 ° C. I prodotti di reazione della PCR sono stati separati mediante elettroforesi su gel utilizzando Reliant 4% NuSieve ® 3: 1 gel Inoltre agarosio (Lonza: Rockland, ME). Bands sono stati visualizzati con illuminazione UV di etidio-bromuro-macchiato gel e acquisite utilizzando una Kodak Gel logica di sistema 100 Imaging e 1D Immagine Software di analisi (Eastman Kodak: Rochester, NY): PCR quantitativa (qPCR)
campioni di DNA. sono stati quindi trattati con qPCR fornire quantificazione più specifico e sensibile. I primer e le sonde sono stati progettati utilizzando la libreria Roche universale Probe (UPL) software di progettazione test per amplificare la regione di sovrapposizione E6 e E7 sequenza genica di HPV16 [GenBank: K02718] e il gene housekeeping β-actina umana [GenBank: M10277]. Tutti i primer sono stati acquistati da Sigma-Aldrich (St. Louis, MO.) E sonde acquistati da Roche Applied Science (Indianapolis, IN.)
HPV16 E6 /E7 primer forward 5'-CAACTGATCTCTACTGTTATGAGCAA-3 ', HPV16 E6 /E7 inversione di primer 5'-CCAGCTGGACCATCTATTTCA-3 ', HPV16 E6 /E7 idrolisi "Taqman" sonda 5' - (fam) -AGGAGGAG- (scuro quencher dye) -3 '(UPL sonda # 63) è stato utilizzato per amplificare la coppia di 73 di base (bp) regione tra la posizione 535 nucelotide (nt) e 607 posizione nt. Umana β-actina primer forward 5'-GTGGGGTCCTGTGGTGTG-3 ', umano β-actina 5'-GAAGGGGACAGGCAGTGA-3', β-actina idrolisi "Taqman" umano sonda 5 '- (fam) -GGGAGCTG- (scuro quencher dye) - 3 '(UPL sonda # 24) amplificato regione 61 bp tra 2.642 posizione NT e 2702 la posizione nt.
il tempo reale miscela di reazione è stata preparata in un LightCycler ® 480 Piastra pozzetti 96 contenente 1 × LightCycler ® 480 Sonde Maestro (Roche Applied Sciences), 1 mM di ogni rispettivo set di primer (avanti e indietro), 0,2 micron di rispettiva sonda, e 2 ml di stampo di DNA; in un volume finale di reazione di 20 microlitri. Il mix sonde maestro contenute tampone di reazione, miscela dNTP (compresi dUTP al posto di dTTP), 3,2 mm MgCl 2, e Taq polimerasi
DNA. La PCR in tempo reale è stata eseguita su un sistema LightCycler 480 (Roche Applied Science) con i seguenti parametri ciclo: pre-incubazione per l'attivazione dell'enzima iniziale a 95 ° C per 10 minuti, seguita da 45 cicli di 95 ° C per 10 secondi (rampa 4.4 ° C /secondo), 60 ° C per 30 secondi (velocità di rampa 2.2 ° C /secondo) e 72 ° C per 1 secondo (rampa 4.4 ° C /secondo). Dopo fase di amplificazione, una fase di raffreddamento è stata effettuata a 40 ° C per 30 secondi (velocità di rampa di 2,2 ° C /secondo). Acquisizione del segnale di fluorescenza è stato eseguito utilizzando l'impostazione (465-510 nm) in seguito alla 72 ° C fase di estensione di ciascun ciclo Mono Idrolisi sonda. Tutti i campioni sono stati eseguiti in triplicato
analitica sensibilità
Il CaSki (American Type Culture Collection, Manassas, VA). Linea di cellule di adenocarcinoma cervicale è stato utilizzato per sviluppare curve standard sia per la HPV16 (600 copie /genoma) e β actina (2 copie /genoma) geni. DNA estratto dalle cellule CaSki è stato diluito serialmente dieci volte a partire da 50 ng di 0,0005 ng [65]. Questo passaggio permesso per la quantificazione relativa del livello del DNA di ingresso e la quantità finale come il numero di copie virale /genoma /cellule. La quantificazione è stata ottenuta utilizzando ciclo soglia (C T) misurata con il secondo metodo massima derivata (LightCycler 480 Software versione 1.5.0.39; Roche Applied Science). La saliva campioni & gt; 0.001 copie /genoma sono stati considerati HPV positivo. Analisi La specificità è stata eseguita su test qPCR contro HPV18 e risultato essere 100% specifico (dati non riportati)
valutazione statistica
sensibilità e la specificità sono stati calcolati come la percentuale di veri positivi e veri negativi (valore di taglio & gt;. 0,001 copie /genoma), rispettivamente. A seguito dell'acquisizione di campioni di saliva e dei risultati di screening HPV, informazioni demografiche di ogni campione è stato confrontato con il profilo demografico generale del pool paziente UNLV-SDM (N = 71, 051) utilizzando un test chi-quadro (χ2), per determinare se qualsiasi caratteristica (genere, razza, età) è stato diverso da quello previsto tra i pazienti valutati in questo studio (n = 151). Un livello di probabilità di alfa (α) = 0,05 stata utilizzata per determinare la significatività statistica.
Risultati
I campioni di saliva sono stati prelevati da 151 pazienti UNLV-SDM tra il 2 giugno e il 1 ° ottobre 2010. I pazienti da cui campioni sono stati raccolti e proiettato non erano statisticamente diverso dalla popolazione clinica UNLV-SDM rispetto al genere, razza o età (Tabella 1). Più specificamente, il numero totale di femmine e maschi nel campione era approssimativamente uguale (52,3% e 47,7%, rispettivamente) e non significativamente diverso rispetto alla popolazione clinica generale (p = 0,589
). Ci sono stati i pazienti leggermente più bianche nel campione di studio (48,3%) rispetto alla popolazione generale UNLV-SDM (40,8%) (p = 0,133
). In aggiunta, ci sono stati un po 'meno 18 - 64 anni di età nel campione (80,8%) rispetto alla clinica complessiva (85,3%) (p = 0,354
) .table 1 analisi demografica dei partecipanti allo studio
Variabili
UNLV-SDM
studiare campione
analisi statistica
genere
|
|
femminile
n = 35.952 (50,6%)
n = 79 (52,3 %)
χ2 = 0.119, df = 1
Maschio
n = 35.099 (49,4%)
n = 72 (47,7%)
p = 0,589
Race
|
|
|
Bianco
n = 28.989 (40,8%)
n = 73 (48,3%)
χ2 = 1.621, df = 1
non-White
n = 42.062 (59,2%)
n = 78 (51,7%)
p
= 0.133
Età
|
|
|
18 - 64 anni
n = 60.598 (85,3%)
n = 122 (80,8%)
χ2 = 1.056, df = 1
65 +
n = 10.453 (14,7%)
n = 29 (19,2%)
p =
0,354
L'analisi dei campioni di saliva ha rivelato la conta delle cellule che varia tra 0,8-2,4 × 10 6 cellule /ml (Tabella 2). DNA è stato isolato con successo da tutti i campioni di saliva raccolti, con concentrazioni medie di DNA comprese tra 820-1047 ng /mL. misure di assorbanza e A260 /A280 analisi per indici hanno confermato la purezza del DNA isolati, che media tra 1,87 e 2 2.05.Table numero di celle e l'isolamento del DNA
conteggio delle cellule (cellule /mL)
concentrazione di DNA medio (ng /mL)
A260 /A280
campioni (n)
0,8 - 1,2 × 106
915
2.05
31
1.6- 1.9 × 106
820
1.87
94
2,1-2,4 × 106
1047
1.95
26
Il estratto DNA è stato successivamente a screening per la presenza di HPV16 e HPV18 mediante PCR (Figura 1). Da questo screening, quattro campioni dei pazienti sono stati determinati ad essere tipizzazione HPV- positivo, che ha rappresentato il 2,6% del totale schermato (n = 4/151). Tutti e quattro i campioni ospitavano HPV16 DNA e nessuno sono risultati positivi per HPV18. Anche se un pool campione positivo di solo quattro pazienti non consente alcuna conclusione più ampia o conclusioni, una preliminare analisi descrittiva delle informazioni demografiche rivelato questi quattro campioni provenivano da donne, che erano anche di minoranza (non bianchi, ispanici) (tabella 3). Tre dei quattro campioni di pazienti tra i 18 - 64 anni (2,0%), e un campione veniva da un paziente di 65 anni (0,7%). Figura 1 Screening dei campioni dei pazienti per l'HPV. PCR utilizzando DNA estratto da campioni di pazienti (n = 151) è stato proiettato con HPV16- e primer specifici per HPV18, che ha rivelato quattro campioni HPV16 nutrito (2819, 2718, 2527 e 2430). Non sono stati trovati campioni al porto HPV18. DNA estratto in precedenza da linee cellulari di adenocarcinoma cervicale, CaSki e GH354, è stato utilizzato come rispettivamente HPV16 e HPV18 controlli positivi,.
Tabella 3 Analisi di HPVscreening
Variables
HPV16-positive
HPV18-positive
HPV-negative
Genere
|
|
femminile
n = 4 (2,6%)
n = 0
n = 75 (49,7%)
Maschio
n = 0
n = 0
n = 72 (47,7%)
Race
|
|
|
Bianco
n = 0
n = 0
n = 73 (48,3%)
non-White
n = 4 (2,6%)
n = 0
n = 74 (49,0%)
Età
|
|
|
18 - 64 anni
n = 3 (2,0%)
n = 0
n = 119 (78,8%)
65 +
n = 1 (0,7%)
n = 0
n = 28 (18.5 %)
campioni di DNA sono stati elaborati utilizzando qPCR quantitativa per fornire una valutazione quantitativa, nonché misurazione di sensibilità e specificità (Figura 2). L'analisi della gamma di numero di copie /genoma per il gene housekeeping (β-actina) all'interno di HPV-negative (range: 4 - 363 copie /genoma) e campioni HPV-positivi (range: 75-1096) erano simili e ben al di sopra della valore di cut-off (& gt; 0,1 copie /genoma). Analisi di qPCR risultati in numero di copie /genoma di HPV ha rivelato notevoli differenze nel numero di copie tra HPV-negative (range: 0.0001 - 0.000004 copie /genoma) e HPV-positivi (range: 70-111), che sono state facilmente distinguibili utilizzando il cut-off valore (& gt; 0.001 copie /genoma). Non ci sono falsi positivi o falsi negativi sono stati trovati, dimostrando sensibilità e specificità sufficienti per accertare la percentuale di veri positivi (4/4 o 100%) e veri negativi (147/151 o 100%). Figura 2 Analisi grafica di qPCR HPV risultati dello screening. Rappresentazione grafica di numero di copie /genoma gene housekeeping (β-actina) era simile da campioni di HPV-positivi (range: 75-1096) e campioni HPV-negativi (range: 4 - 363 copie /genoma). numero di copie /genoma utilizzando qPCR è stato significativamente superiore al valore soglia (& gt; 0,1 copie /genoma), confermando i campioni HPV-positivi hanno fatto porto HPV16 DNA (range: 70 - 111 copie /genoma), ma non HPV18. I valori per i campioni HPV-negativi sono stati ben al di sotto del valore di cut-off (range: 0,0003-0,000004 copie /genoma)., Con l'eccezione di tre campioni (2867, 2854, 2792), che erano sotto il limite di rilevabilità
Discussione
Lo scopo principale di questo studio è stato quello di eseguire uno screening orale di normali adulti sani in Nevada per HPV ad alto rischio. I precedenti tentativi di questa istituzione e all'interno dello Stato per ottenere campioni di sangue a base per altri tipi di proiezioni, come ad esempio i livelli di piombo (Pb), sono stati in gran parte senza successo a causa di apprensione del paziente e la paura di raccolta del sangue [63]. Per evitare questi problemi specifici, questo studio utilizzato non invasivo saliva raccolti per effettuare questa analisi. Questi sforzi in ultima analisi, ha permesso per la raccolta e lo screening di decine di campioni dei pazienti; un netto miglioramento dei tassi di partecipazione dei pazienti rispetto ad altri precedenti, ma simile, cerca di raccogliere campioni biologici da parte della popolazione locale. I risultati di questo studio forniscono nuovi dati da una popolazione di pazienti in precedenza non schermato e area geografica per completare il crescente corpus di informazioni sulla prevalenza di HPV orale tra adulti sani.
Questi dati hanno dimostrato un tasso di prevalenza di HPV ad alto rischio per via orale (2.6 %) praticamente lo stesso come i più recenti studi multinazionali di adulti sani, privi di tumore (3,1% al 5%) [61, 62]. Nel corso degli ultimi decenni, gli studi internazionali hanno valutato la prevalenza di HPV in adulti sani utilizzando campioni di biopsia, che ha registrato tassi di prevalenza ampiamente variabili che andavano 0-15% [47-51]. Tuttavia, altri rapporti recentemente pubblicati di screening per l'infezione da HPV orale tra adulti sani utilizzando la saliva e il test di lavaggio orale segnalati tassi di prevalenza complessivi che erano anche vicino a questa gamma (1,3%, 2,8%, 7%) [52-59].
Inoltre, anche se i risultati di questo studio hanno trovato l'infezione da HPV per via orale solo tra i quattro pazienti, che erano minoranza e femminile, la stragrande maggioranza dei pazienti di sesso femminile e di minoranza in questo studio non aveva alcuna evidenza di infezione da HPV per via orale. Come uno studio pilota iniziale, questi dati suggeriscono un'analisi più completa e approfondita di questa popolazione potrebbe essere necessario, come recenti studi epidemiologici hanno dimostrato che i tassi di orofaringeo rifugio cancro notevolmente aumentato tra le donne di minoranza negli Stati Uniti, nonostante i tassi di generale calo [ ,,,0],66]. Più in generale, i tassi di cancro orofaringeo sono aumentati tra alcuni sottogruppi di minoranza [67], nonostante un calo generale nella popolazione generale negli Stati Uniti [23, 24, 68]. Ciò può essere spiegato, in parte, dai più alti tassi di consumo di tabacco e alcol, ma può anche essere attribuibile ad altri fattori tra cui l'istruzione, il reddito, lo stress, la dieta, l'alfabetizzazione sanitaria e l'esposizione ad agenti infettivi orali [22, 25]. Questo studio pilota fornisce informazioni preliminari sulla prevalenza di HPV per via orale ed i risultati suggeriscono che ulteriori indagini può essere giustificato, in particolare alla luce delle disparità di salute che affrontano entrambe le donne e le minoranze in Nevada e negli Stati Uniti, in generale [23, 24].
Questo studio ha anche rivelato la presenza del ceppo HPV16 ad alto rischio, ma non HPV18. Anche se alcuni studi hanno suggerito che l'infezione da HPV orale può coinvolgere più ceppi di HPV [15-21, 69], questo risultato non è dissimile da altri risultati che suggeriscono HPV16 può spiegare la stragrande maggioranza dei campioni orali HPV-positive [48, 49, 53, 57, 59]. E 'probabile che l'ulteriore espansione di questo progetto per includere campioni più grandi sarà scoprire i ceppi HPV aggiuntivi per fornire più ampie stime di infezione da HPV orale all'interno di questa popolazione.
Questo studio ha diversi limiti che dovrebbero essere considerati. In primo luogo, sebbene la natura non invasiva di questo studio era sufficiente per l'assunzione e lo screening di un numero significativo di pazienti, la dimensione complessiva del campione era alquanto limitata rispetto alle grandi studi multinazionali precedentemente menzionati [57, 58, 61]. Il numero di adulti sani screening per HPV orale in questo studio pilota, tuttavia, il confronto con una serie di altre relazioni - con campioni di dimensioni da 12 a 97 [20, 47-53]. In secondo luogo, i dati demografici e comportamentali dettagliati non sono stati designati come fondamentale per gli obiettivi iniziali di questo studio pilota, tuttavia, l'inclusione del fumo e l'uso di tabacco, così come informazioni più dettagliate su altri comportamenti, alloggio, istruzione, reddito e altri indicatori socio-economici , così come le pratiche sessuali possono fornire ulteriori approfondimenti in indagini future [55, 58, 59, 70]. Infine, lo screening per i ceppi supplementari di HPV ad alto rischio [71-75] e altri agenti infettivi per via orale potrebbe essere possibile in studi futuri con le risorse più significative e di personale.
Conclusioni
Questo studio ha reclutato con successo i pazienti ei campioni di saliva a screening per HPV ad alto rischio, confermando HPV16, ma non HPV18, era presente in un piccolo sottogruppo di pazienti adulti sani in una scuola dentale della popolazione clinica degli Stati Uniti. Questi pazienti erano di sesso femminile e di minoranza. Molte le disparità di salute faccia femmine e le minoranze negli Stati Uniti, e con una certa prove che suggeriscono che il fumo e tassi di cancro orofaringei possono essere in aumento in questi sottogruppi di popolazione, i risultati di questo studio possono essere di valore significativo per gli altri dentali, i professionisti medici e sanitari per favorire la comprensione del rischio per la salute e la malattia orale
Abbreviazioni
(HPV):.
papillomavirus umano
(US):
United Stati
(DNA):
acido desossiribonucleico
(UNLV-SDM):
University of Nevada, Las Vegas - school of Dental Medicine
(PCR):
polymerase chain reaction
(GAPDH):
gliceraldeide-3- fosfato deidrogenasi
(qPCR):
reazione a catena della polimerasi quantitativa
(BP):
coppia di basi
(nt):
nucleotide
(RCF):
forza centrifuga relativa
( PBS):
tampone fosfato salina
(dNTP):
deoxyribonucleotide trifosfato
(dUTP):
2'-desossiuridina trifosfato
(dTTP):.
deossitimidina trifosfato
Dichiarazioni
Ringraziamenti
Gli autori desiderano ringraziare l'Università del Nevada, Reno (UNR) School of Medicine, la Scuola UNLV di Comunità Scienze della Salute e UNLV-SDM Dipartimento di Scienze Biomediche e Ufficio per la ricerca per la fornitura dei materiali di consumo e reagenti per questo studio pilota iniziale. KK ringrazia Laurel Pritchard, Kenneth Fernandez e Chandler Marrs per la loro assistenza. 'File inviati originali per le immagini
Di seguito sono riportati i link agli autori'
Autori file inviati originali per le immagini. 'file originale per la figura 1 12903_2010_195_MOESM2_ESM.pdf Autori 12903_2010_195_MOESM1_ESM.pdf autori file originale per la figura 2 interessi in competizione
Gli autori dichiarano di non avere interessi in gioco.
contributi degli autori
KK, SW, AB e RW ideato, monitorato e coordinato il disegno sperimentale. RB, JC, JF, DM, e JM erano responsabili per i pazienti che assumono, il consenso informato, campioni di raccolta, e un po 'di analisi biomediche. DT, KK, e SW effettuato la estrazione del DNA, PCR, e qPCR. KK, SW e DT sono responsabili per l'analisi dei dati, nonché la scrittura e la modifica di questo manoscritto. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.
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