Abstract
sfondo
supplementazione di probiotici può ridurre la streptococchi mutans (SM) numeri. Uno dei suoi meccanismi proposti è immunomodulazione. Salivare peptide neutrofili umani 1-3 livelli (HNP1-3) sono stati precedentemente dimostrato di essere superiore in carie libere che nei bambini carie sensibili, suggerendo il loro ruolo preventivo contro la carie. Si è voluto confrontare i livelli salivari HNP1-3 tra un gruppo di intervento con probiotici e un gruppo di controllo.
Metodi
Uno studio clinico in doppio cieco randomizzato è stato condotto. Sessanta studenti erano ugualmente assegnati sia ad un intervento o gruppo di controllo. L'uso di un ceppo probiotico, Lactobacillus paracasei
SD1, ha dimostrato di ridurre il numero di MS in volontari. In non stimolato tutta la saliva, i livelli di HNP1-3 sono stati dosati con ELISA, e MS e conta lattobacilli sono stati dosati con colonia conta al basale (T0) e 3 (T3), 6 (T6), e 12 mesi (T12). Il sistema di rilevazione e valutazione internazionale carie è stato utilizzato per valutare lo stato della carie.
Risultati
Nel gruppo di intervento, salivari HNP1-3 livelli erano significativamente maggiori rispetto a quelli del gruppo di controllo a T3 e T6 (p
& lt 0,001), mentre la conta MS erano significativamente diminuita (p
& lt; 0,01). Nel gruppo di intervento, correlazioni positive e negative sono state trovate tra HNP1-3 livelli e conta di lattobacilli e rispettivamente tra MS e conta lattobacilli,. Tuttavia, non vi era alcuna correlazione significativa tra i livelli HNP1-3 migliorate e una diminuzione numeri MS. Le carie incremento per la superficie solchi e fessure, ma non per le superfici lisce, era significativamente diminuito nel gruppo di intervento rispetto al gruppo di controllo (p
= 0.01).
Conclusioni
I probiotici possono migliorare temporaneamente salivare livelli HNP1-3; . Tuttavia, la loro azione per ridurre le carie nuovi solchi e fessure coinvolge probabilmente interazioni microbiche
registrazione di prova
TCTR20130904001. (Data di registrazione: 4 settembre 2013)
Parole chiave
alfa-defensine La carie dentale streptococchi mutans Probiotici materiale supplementare saliva elettronica
La versione online di questo articolo (doi:. 10 1186 /s12903-015-0003-0) contiene materiale supplementare, che è disponibile per gli utenti autorizzati
Sfondo
La carie dentale. è una delle malattie più diffuse nei bambini e adulti in tutto il mondo [1]. Tuttavia, il successo di tutti i programmi di prevenzione della carie è stato impedito, per sua natura multifattoriale. La malattia è il risultato di demineralizzazione, causato dalle interazioni di batteri cariogeni, una dieta ricca di carboidrati fermentabili e componenti host, quali denti e saliva proprietà [2]. Anche se molte specie batteriche possono svolgere un ruolo nel processo di carie [3], streptococchi mutans (SM) sono stati considerati importanti patogeni associati con lo sviluppo precoce della carie [4]. Le principali caratteristiche di virulenza di SM sono acidogenicità, tolleranza acida, la formazione di biofilm e l'adesione dei denti [5]. Forte associazione tra quantità SM e la patogenesi della carie dentale è dimostrata da numerosi studi precedenti, recensiti in [6].
Amministrazione probiotico è considerato un potenziale strategia per migliorare o mantenere la salute orale. Secondo l'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS), i probiotici sono "microrganismi vivi che, quando somministrati in quantità adeguate, conferiscono un beneficio alla salute dell'ospite" [7]. Diversi meccanismi sono stati proposti per l'azione probiotica, compresa la produzione di sostanze antimicrobiche, competizione con patogeni impedendo adesione cellulare e l'invasione e la modulazione di funzioni immunitarie locali e sistemici [8-11]. In una recente revisione sistematica [12], diversi studi clinici hanno dimostrato la capacità di integrazione di probiotici per ridurre il numero di MS, ma l'effetto diminuzione è variabile e di breve durata. Inoltre, solo pochi studi hanno finora esaminato le quantità di lattobacilli (LB) e la prevenzione della carie nuova insorgenza dalla supplementazione di probiotici.
Sebbene LB, comunemente usato come probiotici, sono stati associati con la progressione della carie [13], un recente studio ha rivelato che solo una certa specie, vale a dire
, Lactobacillus salivarius
, è più legata allo sviluppo della carie per la sua capacità di produrre alti livelli di acidi [14]. In contrasto con questi batteri cariogeni, Lactobacillus paracasei
isolati dai soggetti-carie libere possiede la capacità di sopprimere la crescita MS [15,16]. In questo studio, Lactobacillus paracasei
SD1 è stato introdotto come un ceppo probiotico e utilizzati nella cavità orale per le sue diverse proprietà precedentemente dimostrato, compresa l'inibizione della crescita MS, produzione meno acido rispetto altri LB, e buona aderenza epiteliale orale cellule [17].
peptidi neutrofili umana 1-3 (HNP1-3) sono piccoli peptidi antimicrobici cationici che forniscono la prima linea di difesa dell'ospite contro un ampio spettro di microrganismi [18]. HNP1-3 sono espressi nelle cellule epiteliali duttali delle ghiandole salivari sottomandibolari e secreta nel saliva [19]. Sono prodotte anche dai neutrofili e rilasciato nel liquido crevicolare [20]. Il ruolo preventivo di HNP1-3 contro la carie dentale è stata suggerita dalle significativamente più elevati livelli di HNP1-3 salivari nei bambini-carie liberi rispetto a quelli che vivono la carie dimostrate da Tao et al. [19]. Dal momento che uno dei meccanismi probiotici è stato proposto di essere coinvolti con l'host regolazione immunitaria, che, quindi, hanno ipotizzato che la supplementazione di probiotici potrebbe aiutare a prevenire la carie dentale per l'aumento di immunità host locale attraverso una maggiore produzione di salivare HNP1-3. Gli obiettivi di questo studio sono stati per esaminare gli effetti dell'intervento probiotico sui livelli salivari HNP1-3, conta MS, e conta LB, e di determinare le correlazioni tra questi host e parametri microbici. Inoltre, nuovi casi di lesioni cariose per i secondi molari permanenti durante uno studio clinico di 12 mesi sono stati valutati e confrontati tra i gruppi di controllo e di intervento.
Metodi
Panoramica studio di design
Questo studio è stato progettato come un randomizzato, in doppio cieco e controllato con placebo metodo con due gruppi paralleli. Il protocollo di studio è stato approvato dai comitati umani Sperimentazione delle Facoltà di Odontoiatria, Università di Chiang Mai e principe di Songkla University, Thailandia. Il consenso informato è stato ottenuto dai genitori o tutori di ogni partecipante prima dell'inizio di questo studio. Sessanta partecipanti ammissibili e sani su 246 bambini sono stati equamente distribuiti per uno dei due gruppi, il controllo e gruppi probiotici, utilizzando una semplice procedura di randomizzazione mediante estrazione a sorte (Figura 1). I criteri di inclusione ed esclusione sono identificati nei partecipanti e nella Figura 1. Per il metodo in doppio cieco, il codice è stato tenuto da un monitor indipendente. Questo codice non è stato svelato fino a quando tutti i dati sono stati analizzati. Nessuno dei ricercatori, i medici, i partecipanti, gli insegnanti, o lo statistico sapeva se i bambini hanno ricevuto il controllo o latte intervento durante l'intero corso di questo studio. Il processo è stato registrato presso il http: //www. Clinicaltrials in th /, uno dei primari OMS Registro Networks, Clinical Trials identificatore TCTR20130904001... L'intero periodo sperimentale è durato per 12 mesi, e la misurazione risultato di questo studio consisteva di quattro parametri: HNP1-3 salivare, i livelli di MS e LB in quattro momenti diversi: T0 (basale), T3 (tre mesi di intervento), T6 (sei mesi di intervento) e T12 (sei mesi dopo la cessazione dell'intervento), e la presenza di lesioni cariose o demineralizzata a T0 e T12 (figura 1). Il calcolo della dimensione del campione
priori è stata eseguita con una particolare attenzione per le differenze medie di MS conta tra i due gruppi indipendenti utilizzando il software G Potenza [21], con la dimensione dell'effetto pari a 0.8 a livello di significatività statistica del 5% e la potenza del 90% di prova . Il calcolo ha prodotto non meno di 28 partecipanti in ogni gruppo. Figura 1 Un diagramma di flusso consorte che mostra il numero di partecipanti nel controllo e nei gruppi probiotici all'inizio e il completamento del processo. Su 246 bambini arruolati in questo studio, 60 partecipanti sono rimasti ammissibili a causa dei criteri di inclusione ed esclusione. Sessanta i partecipanti sono stati ugualmente assegnati sia il controllo o il gruppo probiotico per semplice randomizzazione descritta nei metodi. I partecipanti hanno ricevuto latte in polvere con o senza probiotici durante il primo intervento di sei mesi, e campioni di saliva sono stati prelevati per le analisi dei livelli HNP1-3, MS e LB conta in quattro diversi momenti: T0, T3, T6 e T12. Prova orale per la valutazione dei punteggi ICDAS è stata effettuata a T0 e T12.
Preparazione di latte in polvere addizionato con probiotici
Il ceppo probiotico, Lactobacillus paracasei
SD1, è stato isolato da volontari-carie libere ed è stato mostrato in precedenza per esercitare l'effetto inibitorio massimo sulla Streptococcus mutans in vitro
[17]. Il ceppo batterico è stato identificato mediante PCR-RFLP delle 16S geni RNA ribosomiale e sodio dodecil-SDS-PAGE [22]. L'intervento probiotici è stato fabbricato in una forma di latte in polvere con la tecnica spray drying. Le condizioni di coltura e la tecnica di essiccamento a spruzzo sono stati eseguiti come precedentemente descritto [23]. Brevemente, una cultura di Lactobacillus paracasei
SD1 è stato inoculato in una miscela di 1% probiotici e una quantità di 3 litri di trattamento termico (50 ° C per 30 minuti) e il 20% latte scremato ricostituito, e poi essiccato a spruzzo con un atomizzatore (modello B191 Buchi mini spray dryer; Flawil, Svizzera). Il prodotto finale è stato giallastro polvere bianca con un contenuto di umidità di 3,44 ± 0,85% e la conta di 7,5 ± 0.20x10
8 ufc /g, che è stato conservato a 4 ° C. La vitalità di Lactobacillus paracasei
SD1 nel latte in polvere inoculato è stato precedentemente valutato in uno studio di sei mesi, esaminando la sua crescita in triplice copia uomo Rogosa e Sharpe (MRS) Versare in piastre sotto incubazione anaerobica per tre giorni a 37 ° C [23 ]. È stato dimostrato che il tasso massimo sopravvivenza di Lactobacillus paracasei
SD1 nel latte scremato in polvere è stata del 99% se il latte in polvere è stato conservato a 4 ° C per sei mesi [23]. Tuttavia, il tasso di sopravvivenza fortemente diminuito se il latte in polvere è stato conservato a 25 ° C [23]. Il latte in polvere in aspetto generale per entrambi i gruppi probiotici e controllo sembrava identici, tranne per l'assenza del ceppo probiotico nel gruppo di controllo, e viene imballato stessi sacchetti di plastica trasparente contrassegnati con un nome di ciascun partecipante. Le fasi di confezionamento e che forniscono sono stati eseguiti da un assistente di ricerca che è stato accecato da ogni fase del campionamento e l'analisi
partecipanti
I criteri di inclusione sono stati:. (I) una buona salute orale con la carie in due o meno denti (ii) presenza di quattro molari secondi in bocca (iii) assenza di lesioni cariose profonde attivi non trattati (iv) assenza di parodontite (v) non fumatori e (vi) dente spazzolatura quotidiana abitudine con un dentifricio al fluoro. I criteri di esclusione erano adolescenti con malattie sistemiche, ricevendo antibiotici sistemici entro sei settimane, il consumo di routine di probiotici o xilitolo, allergia al latte vaccino, l'intolleranza al lattosio e grave allergia alimentare. Prima dell'inizio della sperimentazione clinica, tutti i partecipanti sono stati informati di non consumare i prodotti contenenti probiotici, come lo yogurt, yogurt da bere, formaggio, ecc, per tutta la durata di questo processo. I partecipanti di entrambi i gruppi sono stati incaricati di mescolare 5 g di latte in polvere in 50 ml di acqua e bere una volta al giorno, tranne nei giorni di raccolta della saliva, per sei mesi sotto la supervisione di istruttori. Sulle vacanze o il fine settimana, tutti i bambini sono stati informati di bere il latte a casa e di restituire i sacchetti di plastica vuoti. La conformità è stata controllata dai loro insegnanti che hanno compilato un diario di bordo ogni giorno con informazioni sulla frequenza scolastica dei bambini e sulla necessità o meno i bambini avevano bevuto il latte. Era evidente che non i bambini che partecipano a questo studio sono stati assenti dalle loro classi a causa di assenze per malattia durante il primo intervento di sei mesi. Tutti i partecipanti sono stati invitati a segnalare immediatamente eventuali effetti collaterali.
Analisi dei livelli salivari HNP1-3 impara una quantità di 2 ml di non stimolato tutta la saliva è stato raccolto e equamente divisa in due aliquote, una per l'analisi dei livelli di HNP1-3 e l'altro per l'analisi dei livelli microbiologici. La prima porzione è stata addizionata di Nonidet P-40 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) alla concentrazione finale di 0,1% (v /v), centrifugate a 15.000 rpm a 4 ° C per 10 min [19], e il surnatante eliminato è stato raccolto e conservato congelato per ulteriori analisi dei livelli di HNP1-3 da parte di un kit di HNP1-3 ELISA (HyCult Biotecnologie, Uden, Paesi Bassi) in base alle istruzioni del produttore. In breve, i campioni diluiti saliva (1: 200) sono stati applicati ad una piastra pre-rivestito in triplicato con lo specifico anticorpo primario per HNP1-3, e incubate per 1 ora a temperatura ambiente. Per un controllo negativo, tampone di diluizione senza l'aggiunta dei campioni di saliva è stato aggiunto alla piastra pre-rivestito. Dopo aver lavato quattro volte con tampone di lavaggio, ciascun pozzetto è stato incubato con l'anticorpo tracciante biotinilato per 1 ha temperatura ambiente. Poi, il coniugato streptavidina-perossidasi è stato aggiunto e incubato per 1 h. Dopo di che, il 3,3 ', 5,5'-tetrametilbenzidina, un substrato cromogenico, è stato aggiunto per 20 minuti, e la reazione è stata quindi bloccata con l'aggiunta di acido ossalico al 2%. Le concentrazioni di HNP1-3 in campioni di saliva sono stati calcolati da una curva standard stabilito da varie concentrazioni note di uno standard HNP1-3, utilizzati come controllo del sistema ELISA. Le concentrazioni di salivari HNP1-3 sono stati poi normalizzati per il loro contenuto totale di proteine usando un test di proteine BCA (Pierce Inc., Rockford, IL) secondo le istruzioni del produttore.
Test microbiologici
Le quantità di salivari MS e LB sono state valutate da un tipico metodo di conteggio delle colonie a T0, T3, T6 e T12. La seconda aliquota di campioni di saliva era dieci volte diluito da 1:10 a 1: 10.000. Ogni diluizione (10 ml) è stata abbandonata sulle piastre di agar selettivo, Mitis Salivarius bacitracina (MSB) agar per MS (Difco Laboratories, Detroit, MI) e MRS agar per LB (Difco Laboratories). Le condizioni di incubazione erano anaerobica, 10% H 2, 10% CO 2 e 80% N 2 a 37 ° C per 48 h. Il conteggio delle colonie è stata eseguita al microscopio in duplicato.
Rilevamento delle carie International e Assessment System (ICDAS)
All'inizio e alla fine dello studio (T0 e T12), tutti i partecipanti sono stati esaminati per la salute orale e dentale carie stato da due dentisti esperti (SP e ST) con kappa della Cohen valori rispettivamente 0,85 e 0,82 per le calibrazioni intra e inter-esaminatore,. L'esame è stato eseguito utilizzando uno specchio bocca e una siringa ad aria sotto una luce operativo. I dati carie per ogni superficie del dente, tra cui occlusale (solchi e fessure) e la superficie liscia (buccale, linguale, mesiale e distale) carie, sono stati registrati in base ai criteri della rilevazione carie International e Assessment System (ICDAS) [24]. I codici ICDAS sono costituiti da: 0 = suono, 1 = primo cambiamento visivo in smalto, 2 = distinto cambiamento visivo in smalto, 3 = ripartizione smalto localizzato, 4 = sottostante dentina ombra, 5 = cavità distinta con dentina visibile, e 6 = vasta cavità all'interno della dentina visibile. valutazione del rischio carie in questo studio è stato determinato in base ai criteri modificati in precedenza descritti da Nase e collaboratori [25], che comprendono sia stato carie clinica e quantità MS nel modo seguente. I partecipanti "alto rischio" sono stati definiti come avere sia un punteggio ICDAS & gt; 0 e livelli di MS ≥10 5 ufc /ml, mentre il "rischio moderato" quelli avevano o un ICDAS punteggio & gt; 0 o MS livelli ≥10 5 ufc /ml e il "basso rischio" quelli avevano un punteggio ICDAS = 0 e MS livelli & lt; 10 5 ufc /ml analisi statistica
Il Mann-Whitney U
. test è stato utilizzato per analizzare le differenze tra gruppi nei livelli HNP1-3 salivari. Le differenze nei livelli HNP1-3 salivari tra quattro diversi periodi di ciascun gruppo sono stati analizzati con il test di Kruskal-Wallis, seguito dal Mann-Whitney U
test. Il numero di conta delle colonie per MS e che per LB sono stati presentati come log CFU /ml e analizzati dal campione indipendente t
-test. Le correlazioni tra ogni coppia di dati dai livelli HNP1-3, conteggi MS e LB in ciascun gruppo sono stati testati con il test di correlazione di Pearson. L'analisi di regressione è stata effettuata per i dati significativi di correlazione. Un odds ratio (OR) per la carie incremento è stato calcolato contingenza. Il pacchetto software utilizzato è stato il pacchetto di statistica per le Scienze Sociali (SPSS versione 17.0 Inc., Chicago, IL), e le differenze sono state considerate significative quando p
-Valori erano meno di 0,05. . Tutti questi metodi statistici sono stati eseguiti da un biostatistico (TS)
Risultati
dati demografici
Un totale di 60 partecipanti (fasce di età 13-15 anni; n =
26 per i maschi e 34 per femmine) hanno completato questo studio clinico di 12 mesi (Figura 1). Non sono stati riportati effetti collaterali di probiotici o latte in polvere apporto in questa coorte. La conformità per il consumo giornaliero di latte in polvere in entrambi i gruppi è stato attentamente monitorato sotto la supervisione di insegnanti e ben controllato per tutto il primo periodo di intervento di sei mesi. La valutazione del rischio di carie ha rivelato che le percentuali di partecipanti classificati nel "ad alto rischio", il "rischio moderato" ei gruppi "basso rischio" sono stati 50, 31,7 e 18,3 rispettivamente. Anche se la procedura randomizzato è stato eseguito per allocare tutti i 60 partecipanti idonei al controllo o gruppo probiotico, si è coincidente che le percentuali di rischio elevato, moderata e bassa carie nel controllo e il gruppo probiotico erano quasi uguali come segue: 50,0 contro 50,0, 33,3 contro 30,0 e 16,7 contro 20,0, rispettivamente.
alzata salivare HNP1-3 livelli nel gruppo probiotico
la mediana livelli salivari HNP1-3, espresso in unità di mg /mg di proteine totali, nel probiotico gruppo era significativamente maggiore rispetto a quelli del gruppo di controllo a T3 (1.0250 contro 0,5145 mg /mg; p
& lt; 0,001) e T6 (1,1470 rispetto a 0,5415 mg /mg; p
& lt; 0,001), ma non a T0 o T12 (figura 2). Per quanto riguarda la cinetica di livelli HNP1-3 salivari nel gruppo probiotico durante il periodo di 12 mesi di questo studio clinico, è stato dimostrato che i livelli HNP1-3 furono temporaneamente elevati durante il periodo di intervento di sei mesi (Figura 2). In altre parole, questi livelli sono stati significativamente aumentati a T3 e T6 (p
& lt; 0,001) e via via diminuite a T12. Tuttavia, cambiamenti significativi nei livelli salivari HNP1-3 nel gruppo di controllo a quattro punti di tempo (T0, T3, T6 e T12) sono stati osservati (Figura 2). Figura 2 significativo ma transitorio incremento dei neutrofili salivare peptide umano (HNP) 1-3 livelli di supplementazione di probiotici. Il y
-axis grafico diagramma a riquadri dimostra livelli salivari HNP1-3 normalizzati per la concentrazione di proteine totali in unità di mg /mg per il controllo (scatole vuote) ei probiotici (caselle grigie) gruppi da quattro diversi periodi di saliva collezione: T0, T3, T6 e T12. * = P
& lt; 0,05; *** = P
& lt; 0.001. Le linee continue mostrano le differenze significative tra due gruppi, mentre le linee tratteggiate rappresentano le differenze significative all'interno del gruppo probiotico.
Diminuzione MS conta in contrasto con l'aumento delle conte LB dall'intervento probiotico
I conteggi medi e gli errori standard per salivare MS e LB (log ufc /ml) a T0, T3, T6 e T12 nel controllo e gruppi probiotici sono dimostrate in un grafico lineare (Figura 3). Al basale (T0), è stato dimostrato che l'salivare conteggio medio LB nel gruppo probiotico (a linea continua) non era significativamente differente da quella del gruppo di controllo (linea tratteggiata), mentre salivari MS medio conteggio nel gruppo probiotico era significativamente più alta di quella del gruppo di controllo (p
& lt; 0,05; Figura 3). Tuttavia, a T3 e T6, una significativa riduzione MS risiedono nel gruppo probiotico era chiaramente evidente rispetto a quelli del gruppo di controllo (T3 = p
& lt; 0,001 e T6 = p
& lt; 0.01), mentre un aumento significativo della conta LB è stata invece osservata (p
& lt; 0,05; Figura 3). In contrasto con il gruppo probiotico, variazioni significative nelle conte medie per salivare MS e LB sono stati trovati nel gruppo di controllo (linee tratteggiate in figura 3). A T12, il conteggio medio per salivare MS nel gruppo probiotico è stata aumentata e restituito quasi alla linea di base, mentre il conteggio medio per salivare LB nel gruppo probiotico era ancora significativamente superiore a quella del gruppo di controllo (p
& lt; 0.01; Figura 3), suggerendo la possibilità di LB da conservare nella cavità orale, nonostante la cessazione dell'intervento probiotico per sei mesi. Figura 3 significativa ma transitoria riduzione mutans streptococchi salivari (MS) conta da un intervento probiotico. Il grafico lineare illustra significa accedere capi di SM (cerchi aperti) e quelli di lattobacilli (LB; cerchi neri) nell'unità di CFU /ml (y
-axis) sia in probiotico (linee continue) e di controllo (linee tratteggiate ) gruppi da quattro diversi periodi di raccolta della saliva (x
-axis): T0, T3, T6 e T12. * = P
& lt; 0,05; ** = P
& lt; 0,01; *** = P
& lt; 0.001. barre di errore rappresentano gli errori standard (SE). I valori della media log MS e LB conta e (SE) sono mostrati nelle caselle solidi per il gruppo probiotico e nelle caselle tratteggiate per il gruppo di controllo in ciascun periodo di raccolta della saliva.
Significativa riduzione della carie incremento per la fossa e la superficie fessura nel gruppo probiotico
le percentuali del suono (ICDAS punteggio = 0) e superfici non solide (punteggi ICDAS = 1-6) da tutte e cinque le superfici dei denti, tra solchi e fessure, mesiale, distale, buccale, e linguale, a T0 e T12 sia controllo e probiotici gruppi sono illustrati come barre impilate a un totale di 100% (Figura 4A). Era evidente che le percentuali di lesioni cariose nei secondi molari permanenti sia di controllo e probiotici gruppi aumentati in quasi tutte le superfici dei denti nel corso di questo studio di 12 mesi e che la carie solchi e fessure in entrambi i gruppi era più diffuso nella nostra coorte di stato carie negli altri quattro superfici lisce, tra cui mesiale, distale, buccale e linguale (Figura 4A). Somme di percentuali di carie incrementano per tutte e cinque superfici dentali, tra la fossa e la superficie fessura e quattro superfici lisce, e quattro superfici lisce nel gruppo probiotico rispetto al gruppo di controllo erano 25,5 contro 44,2 e 15,2 contro 21,4 rispettivamente (Figura 4B ). Le percentuali di carie incrementano solo in superficie solchi e fessure erano 10,3 contro 22,8 (Figura 4B). È interessante notare che la percentuale di nuove carie occorrenza per tutte e cinque le superfici dentali (OR = 1.605; 95% CI 1,007-2,557; p = 0,045
) e per la superficie solchi e fessure (OR = 2.582; 95% CI 1,235-5,400 ; p = 0,01
) era significativamente più bassa nel gruppo probiotico rispetto a quella del gruppo di controllo, mentre non vi era alcuna differenza significativa nella nuova carie occorrenza tra i due gruppi per le quattro superfici lisce (OR = 1.506; 95% cI 0.726- 3.126; p = 0.269
). Figura 4 diminuzione significativa nella percentuale di carie incrementare la superficie solchi e fessure, ma non per le superfici lisce, per intervento probiotico. (A) Le barre in pila 100% mostrano le percentuali di suono (area bianca; ICDAS punteggio = 0) e malsane (aree piene; punteggi ICDAS = 1-6) emerge da tutte e cinque le superfici dentali, tra cui solchi e fessure, mesiale, distale , buccale e linguale, nel controllo (pannello superiore) e gruppi probiotici (pannello inferiore). Nota percentuali più elevate di superfici non solide nella superficie solchi e fessure di quelle nelle altre quattro superfici. (B) La barra rivela riduzione significativa nelle percentuali di carie incrementare nel gruppo probiotico per una combinazione di tutti e cinque superfici dentali e per la superficie solchi e fessure solo, ma non per i combinati quattro superfici lisce, incluse mesiale, distale, vestibolari e linguali superfici. * = P
& lt; 0,05; ** = P = 0,01
.
Mancanza di correlazione tra aumento dei livelli di HNP1-3 e numeri di MS
correlazioni sono diminuite tra ogni coppia di salivare HNP1-3 livelli in mcg /mg di proteine totali, MS conta e conta LB in log CFU /ml sia nel controllo e gruppi probiotici sono stati determinati con il test di Pearson di correlazione (vedi file aggiuntivo 1 per i dati di ciascun parametro), ed è stato rivelato che le correlazioni significative tra questi parametri sono stati trovati solo in gruppo probiotico, ma non nel gruppo di controllo (figura 5). In particolare, salivari HNP1-3 livelli erano correlati positivamente con i conteggi LB (r = 0,376
; p
& lt; 0,001; Figura 5B) con l'equazione dall'analisi di regressione: y =
0.653x
+ 5,929, dove y
è il numero di registro e LB x
è il livello HNP1-3, mentre la conta LB sono stati inversamente associati con i conteggi MS (r = -0,282
; p = 0,002
; Figura 5F). Tuttavia, nessuna correlazione significativa è stata osservata tra i livelli salivari HNP1-3 e MS conta nel gruppo probiotico (Figura 5D), suggerendo che migliorate salivari HNP1-3 livelli con l'intervento di probiotici non sono associati con una diminuzione quantità MS. Figura 5 correlazioni positive e negative tra salivare umana dei neutrofili peptide (HNP) 1-3 livelli e accedere conta di lattobacilli (LB) e tra i conteggi di log di streptococchi mutans (SM) e quelle di LB, rispettivamente, nel gruppo probiotico. I coefficienti di correlazione (r
) ed i livelli di significatività (p
-Valori) tra ogni coppia di tre parametri, tra cui HNP1-3 livelli in mcg /mg, LB conta nel log CFU /ml e MS conta nel registro ufc /ml sono stati determinati ed illustrati sia per il controllo (a, C ed e) e probiotici (B, D e F) gruppi. L'analisi di regressione ha potuto essere determinato solo per la significativa correlazione tra l'aumento dei livelli HNP1-3 e un aumento LB conta in B, e una linea di regressione è stato elaborato con l'equazione: y =
0.653x
+ 5,929; p = 0,003
Discussione
I principali risultati di questo studio comprendono (a) un aumento significativo, ma temporaneo salivare HNP1-3 livelli a T3 e T6 nel gruppo probiotico.; (B) un significativo aumento nella conta LB al contrario di una riduzione transitoria MS risiedono durante l'intervento probiotici; (C) correlazioni positive e negative trovati tra i livelli HNP1-3 e conta LB e tra i conteggi LB e MS risiedono rispettivamente, nel gruppo probiotico; e (d) una significativa riduzione della carie incrementare la superficie solchi e fessure, non per le superfici lisce. Tra questi quattro grandi risultati, l'aumento significativo dei livelli salivari HNP1-3 di supplementazione di probiotici durante il periodo di intervento di sei mesi è di grande interesse in quanto è probabile che il Lactobacillus paracasei
SD1 può esercitare un effetto immunostimolante da una maggiore produzione di innata effettori del sistema immunitario, in particolare HNP1-3, da cellule epiteliali duttali delle ghiandole salivari sottomandibolari [19], che vengono poi secreti nella saliva. Il possibile effetto immunostimolante di Lactobacillus paracasei
SD1 garantisce ulteriori indagini. Inoltre, l'attivazione del sistema immunitario innato da Lactobacillus paracasei
SD1 è confermata con la significativa correlazione tra i livelli salivari HNP1-3 elevati e aumentato la conta LB visto in Figura 5B. Attivazione di immunità dell'ospite, particolarmente aumentata produzione di secretoria immunoglobulina A (sIgA), è stato precedentemente dimostrato di essere uno dei meccanismi principali per probiotici nei tratti gastrointestinali [26-28] e nella cavità orale [29-31]. In questo studio, la logica di indagare solo il salivare HNP1-3 livelli durante l'intervento probiotico si è basata sull'osservazione da un unico precedente studio che ha dimostrato significativamente più alti livelli HNP1-3 nei campioni di saliva da carie-liberi i bambini di quelli caries- bambini suscettibili [19]. Tuttavia, è necessario determinare ulteriormente i livelli salivari di altre molecole effettrici immuno-correlati, in particolare altri peptidi antimicrobici, oltre HNP1-3, in uno studio futuro. Si osserva che i livelli di salivare HNP1-3 identificati nella nostra coorte erano paragonabili a quelli misurati con lo stesso metodo ELISA eseguito da Tao e collaboratori [19]. È interessante notare che i livelli HNP1-3 furono temporaneamente elevati durante il periodo di intervento di sei mesi e gradualmente diminuiti ai livelli basali dopo l'interruzione dell'assunzione di probiotici. L'induzione temporanea dei livelli HNP1-3 era in linea con l'induzione transitoria dei livelli sIgA nella saliva per l'assunzione di probiotici [30], che indica che il consumo giornaliero di probiotici sembra essere richiesto per un aumento sostenibile in risposta immunitaria.
Tuttavia , le alzate salivare HNP1-3 livelli non correlavano significativamente con i conteggi MS diminuito, ma i conteggi LB sono stati invece correlati inversamente con la MS conta, suggerendo che il meccanismo di azione probiotica nella cavità orale può probabilmente comportare la competizione e /o l'interazione tra due microrganismi distinti come precedentemente dimostrato da Teanpaisan e Piwat [22], piuttosto che una maggiore produzione di HNP1-3.
